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六味地黄丸对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响
目的 探讨六味地黄丸对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响.方法 原代培养大鼠前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测六味地黄丸含药血清对前脂肪细胞的增殖情况,以酶组织化学法检测其对前脂肪细胞分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响,油红0染色方法测定其对细胞内脂肪积聚的影响.结果 10%以内六味地黄丸含药血清对大鼠前脂肪细胞的增殖有促进作用,对分化过程中的GPDH升高有抑制作用,而对于分化过程中的脂肪积聚则有促进分解的作用.结论 六味地黄丸能促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制大鼠前脂肪细胞的分化.
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黄连解毒汤及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖和分化的影响
目的 探讨黄连解毒汤（Huanglian Jiedu Decoction,HJD）及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖和分化的影响及其机制.方法 制备HJD及其拆方的大鼠含药血清；培养3T3 -L1前脂肪细胞；以四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测3T3-L1前脂肪细胞的增殖；油红O染色并通过比色定量分析检测3T3-L1前脂肪细胞分化过程中胞浆脂质的堆积；采用逆转录聚合酶链反应技术检测过氧化物体增殖物活化受体γ( peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARγ)和CAAT/增强子结合蛋白α（CAAT/enhancerbinding protein,C/EBPα）mRNA的表达.结果 与空白对照组比较,HJD、黄芩栀子合煎和栀子的含药血清对3T3-L1前脂肪细胞增殖均表现出明显的促进效应(P ＜0.05,P＜0.01)；HJD、黄芩栀子合煎、黄连和栀子的含药血清处理前脂肪细胞,分化后胞浆中脂滴明显减少,PPARγ和C/EBPα mRNA表达明显降低,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）.结论 HJD促进前脂肪细胞的增殖,减少脂肪细胞分化过程中脂质的堆积,抑制脂肪细胞的分化,可能与其降低PPARγ和C/EBPα mRNA表达有关；HJD发挥此作用的主要成分可能来自于黄芩栀子药对.
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六味地黄丸、金匮肾气丸及健骨二仙丸含药血清对BMSCs成脂、成骨细胞分化相关基因的影响
目的 研究补肾方药对大鼠骨髓间充质干细胞(B MSCs)来源的前脂肪细胞向成骨分化的影响.方法 采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,用经典化学方法诱导BMSCs为前脂肪细胞,用六味地黄丸、金匮肾气丸和健骨二仙丸含药血清(含量浓度均为10％,分别代表补肾阴、补肾阳和补肾填精方药),干预前脂肪细胞成骨分化过程；采用反转录-实时荧光定量PCR技术(RT-real time qPCR),分别于第6、12和18天,检测成骨分化相关基因RUNX2、ALP、BGP、BMP2、BMP4、SPP1和IGF1 mRNA,及成脂分化相关基因LPL、FABP4和PPARγ mRNA表达水平.结果 对于成骨分化相关基因,与对照组比较,第6天各组基因表达无显著变化(2.0 ＞Ratio ＞0.5)；第1 2天,金匮肾气丸组IGF1和RUNX2mRNA表达升高较为显著,相对表达量(Ratio)分别为2.97和1.81；第1 8天,各组IGF1 m RNA表达均显著上升,六味地黄丸组、金匮肾气丸组和健骨二仙丸组Ratio值分别为3.74、12.60和8.35；各组SPP1 mRNA表达也显著升高,Ratio值分别为2.94、3.18和2.62.对于成脂分化相关基因,第6天,六味地黄丸组和金匮肾气丸组FABP4 mRNA表达显著下降(Ratio分别为0.47和0.40),其他基因表达均下调,但不显著；第12天和第18天,成脂分化基因表达变化均无显著变化(2.0 ＞Ratio ＞0.5).结论 成骨分化相关基因在补肾方药作用较晚时间出现表达上调的变化,而成脂分化相关基因在补肾方药作用较早时间即出现表达下调的改变,并且提示补肾阳法促进成骨分化、抑制成脂分化作用更为显著.
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雌二醇对人大网膜前脂肪细胞增殖和分化的影响
体脂分布有件别差异性,绝经前女性低内脏脂肪使她们比男性和绝经后女性的代谢性疾病患病率低;绝经后妇女同经前妇女相比网膜的脂肪细胞变得更大,这些均提示性激素在调节体脂分布上有重要的作用.目前雌二醇对原代培养网膜前脂肪细胞作用仍处于争议中,且大多局限于啮齿类的研究.本实验在成功地培养原代人大刚膜前脂肪细胞的基础上,对雌二醇的作用进行了初步研究.
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无血清原代培养人前脂肪细胞并诱导分化
目的无血清原代培养人前脂肪细胞并诱导其分化为成熟脂肪细胞.方法采用胶原酶消化法分离并原代培养人前脂肪细胞,通过对细胞形态学的观察、油红O染色,以及脂肪细胞标志性酶G-3-PDH活性的测定对细胞进行鉴定.结果摸索出无血清培养并诱导人前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞的条件.在无血清的基础培养基中前脂肪细胞能够维持增殖.无血清分化培养基培养4 d后细胞形态逐渐变圆,并出现球性脂滴,脂滴的数量逐渐增多至分化培养的第21天到达顶峰.结论在无血清培养的状态下成功诱导前脂肪细胞向脂肪细胞的分化,以作为激素或细胞因子对前脂肪细胞增殖或分化影响的研究基础.
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小檗碱对脂肪细胞瘦素和抵抗素基因表达的影响
小檗碱是中药黄连的主要成分,具有改善胰岛素抵抗、降血糖和纠正脂质代谢紊乱的作用,临床上用于治疗2型糖尿病[1].近年来,脂肪组织在2型糖尿病发病中的作用日益受到重视,脂肪细胞分泌的多种激素在机体的糖、脂代谢中起重要作用,其中瘦素(leptin)和抵抗素(resistin)的作用备受关注.本实验采用的3T3-L1细胞株是一种来自小鼠的前脂肪细胞,在一定条件下能分化成脂肪细胞,被广泛用于脂肪细胞的功能研究.本研究通过体外观察小檗碱对瘦素和抵抗素基因表达的影响,探讨其改善胰岛素抵抗的分子机制.
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瘦素与脂肪生成
瘦素是一种由肥胖基因编码、主要由脂肪组织合成和分泌的蛋白质,通过与其受体结合而发挥多种生物学效应.许多研究发现瘦素能减少脂肪蓄积,但其发挥作用的机制还不是很清楚.本文就瘦素对脂肪生成的作用,尤其是瘦素对前脂肪细胞增殖与分化的影响进行综述.
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瘦素对人前脂肪细胞增殖及分化的影响
目的 观察瘦索在体外对人前脂肪细胞增殖和分化的影响,探讨瘦素调节肥胖发生的可能机制.方法 分离并体外培养人腹部皮下前脂肪细胞.采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法、细胞计数法、油红O染色提取法及逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法 分析不同浓度(0～1 000 ng/ml)瘦素对人前脂肪细胞增殖、脂质积聚及分化转录因子γ2过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)、CCAAT增强子α结合蛋白(C/EBP-α)mRNA表达的影响.结果 高浓度(1 000 ng/ml)瘦素能够促进人前脂肪细胞的增殖、脂质积聚以及PPAR-γ2、C/EBP-α mRNA表达(P<0.05).低浓度(10 ng/ml)和中浓度(100 ng/ml)瘦素对人前脂肪细胞的增殖及脂质积聚没有明显的促进作用(P>0.05).结论 在体外超生理浓度的瘦素能够促进前脂肪细胞的增殖和分化,提示瘦素抵抗、血清高瘦素浓度等病理状态时,瘦素可能促进前脂肪细胞的增殖及分化,影响肥胖发生.
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前脂肪细胞组织工程学的初步探讨
目的 探讨胶原透明质酸海绵支架与前脂肪细胞复合培养形成工程化脂肪组织的可行性.方法 切取成年女性腹部皮下脂肪组织,经体外分离培养前脂肪细胞,与胶原-透明质酸支架混合,移植到裸鼠体内,未混合细胞的支架作为对照组.移植后4周和8周取材,对所取标本进行大体观察及厚度、高度测量和免疫组织化学检测.结果 初步证实复合物植入后能形成黄色脂肪样组织,有新生血管形成,免疫组织化学检测证实脂肪细胞的存在及良好分布.结论 胶原透明质酸海绵支架可以作为组织工程技术应用研究中形成脂肪组织的支架,移植到裸鼠体内,在其皮下能形成脂肪样组织.
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超声波对猪前脂肪细胞增殖与分化的影响
目的 观察超声波对脂肪抽吸部位前脂肪细胞的影响,探讨超声吸脂术对局部脂肪重新积聚的影响.方法 将实验组经过超声波作用后(8 min,3 W/cm2)的猪前脂肪细胞进行体外培养,测定细胞活力,并每隔2 d测定其细胞数量及用油红O测定其脂质含量,观察其细胞增殖速率及脂质含量的变化,并测定其分化率,与未经过超声波处理的正常对照组相比较.结果 实验组细胞活力为(70±6.8)%,细胞倍增时间约72 h,脂滴出现时间为培养后6 d,脂质测定时其吸光度峰值为0.32±0.1,细胞分化率为(45±12)%;而正常对照组各项对应指标分别为(91±4.3)%、36 h、4 d、0.68±0.12、(80±8)%.表明经超声波处理的猪前脂肪细胞体外培养有细胞活力下降、细胞增殖速率减缓、脂质含量减少、分化率下降等改变.结论 超声波对前脂肪细胞的体外增殖分化有明显的抑制,提示超声吸脂术可能对局部脂肪重新积聚有一定的抑制作用.
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儿茶酚胺对人前脂肪细胞增殖与分化的作用
目的研究去甲肾上腺素、肾上腺素和异丙肾上腺素这三种儿茶酚胺对人前脂肪细胞增殖与分化的作用.方法培养人皮下脂肪的前脂肪细胞,在其增殖与分化的不同阶段分别加入肾上腺素、去甲肾上腺素和异丙肾上腺素这三种儿茶酚胺,观察其对人前脂肪细胞的增殖,分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)和细胞内脂肪积聚的作用,并探讨α受体和β受体阻断剂对这个过程的影响.结果肾上腺素和异丙肾上腺素对人前脂肪细胞的增殖有促进作用,对分化过程中的GPDH的升高有抑制作用;而对于分化过程中的脂肪积聚三者均有促进分解的作用;均通过前脂肪细胞的β受体完成.结论人前脂肪细胞对儿茶酚胺的反应与成熟脂肪细胞相比有其特点,可望应用于脂肪分解药物的研究.
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前脂肪细胞增殖分化在高脂膳食诱导大鼠肥胖及运动预防肥胖中的作用
目的:探讨前脂肪细胞增殖分化在高脂膳食诱导大鼠肥胖及运动预防肥胖过程中的作用.方法:40只雄性SD大鼠分为普通膳食安静组(C组,n=8)、普通膳食运动组(E组,n=8)、高脂膳食安静组(H组,n=14)和高脂膳食运动组(HE组,n=10).C组和H组不运动,E组和HE组大鼠进行跑台运动,运动强度约为75％VO2max水平.12周干预后,记录各组大鼠体重,取附睾、肾周和腹后壁的脂肪垫分别称重,并计算总脂肪量;体视学方法检测脂肪细胞数目及平均直径;Western Blot检测脂肪组织过氧化物酶增殖物受体γ(PPARγ)和CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)的蛋白表达水平.结果:(1)H组大鼠体重及腹腔内总脂重均显著高于C组(P＜0.01),E组和HE组大鼠肾周、腹后壁脂肪垫重及腹腔内总脂肪量均分别显著低于C组和和H组的相应部位(P＜0.01).(2)H组大鼠腹腔内脂肪总数目显著高于C组(P＜0.01).E组大鼠肾周及腹后壁脂肪细胞平均直径均分别显著低于C组的相应部位(P＜0.05,P＜0.01),HE组大鼠附睾、肾周及腹壁脂肪细胞平均直径均分别显著低于H组的相应部位(P＜0.01).(3)与C组相比,E组及H组大鼠附睾、肾周及腹壁脂肪组织PPARγ蛋白表达显著升高(P＜0.01);H组大鼠附睾及肾周脂肪组织C/EBPα蛋白表达显著高于C组的相应部位(P＜0.01),E组大鼠肾周及腹后壁脂肪组织C/EBPα蛋白表达显著高于C组的相应部位(P＜0.01),但HE组大鼠肾周脂肪组织C/EBPα蛋白表达显著低于H组(P＜0.01).结论:前脂肪细胞增殖分化能力在高脂膳食诱导肥胖及运动预防肥胖过程中均增强,但其作用及机制皆不同.高脂膳食诱导肥胖过程中前脂肪细胞增殖分化能力的增强可使脂肪细胞数目增多,是机体为适应体脂增多的代偿机制;运动预防肥胖过程中前脂肪细胞增殖分化能力的增强可促进脂肪细胞更新,并使脂肪细胞平均体积缩小,是脂肪细胞贮脂能力改善的适应机制.
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大黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化及脂肪代谢的影响
目的探讨大黄素对3T3-L1小鼠前脂肪细胞增殖分化和对脂肪代谢的影响，以及探讨大黄素可能的减肥作用的药理机制。方法 MTT法测定细胞的增殖速度，油红O染色法测定细胞的分化速度，分光光度法测定脂肪酸合成酶活性。结果 大黄素在较低浓度下对3T3-L1小鼠前脂肪细胞的增殖有一定的促进作用，但当浓度升高时，转化为剂量依赖性抑制作用；大黄素对3T3-L1小鼠前脂肪细胞向脂肪细胞的分化以及对脂肪酸合成酶活性有剂量依赖性抑制作用。 结论 本研究在国际上第一次报道大黄素对3T3-L1小鼠前脂肪细胞增殖与分化及脂肪代谢有影响；大黄素可能具有潜在的减肥、降脂作用。
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人网膜前脂肪细胞原代培养及其生物学特性研究
目的 建立人网膜前脂肪细胞原代培养的方法,研究内脏脂肪增生肥大和内分泌功能的生物学特性.方法 选取人网膜脂肪组织,采用酶消化细胞原代培养出梭形细胞,对培养细胞进行形态学观察、MTT法测定生长曲线、油红O脂肪染色法进行脂肪细胞鉴定、酶联免疫法测定脂肪细胞因子瘦素和脂联素水平.结果 培养出的梭形细胞成分均一.第3天开始增殖,4～9 d为指数增长期,倍增时间约为60 h.经分化诱导21 d约有90%的细胞分化为成熟脂肪细胞.前脂肪细胞可检出低水平瘦素分泌,经诱导分化分泌量持续增多,第17天达峰值(1.6 ng·ml-1·24 h-1),之后保持高分泌状态至诱导结束;而脂联素直到诱导分化第7天始可检测到低水平分泌,此时光镜下已可见胞质含脂滴的细胞;7～17 d分泌逐渐增多,第17天分泌达峰值(99 ng·ml-1·24 h-1),之后有明显下降趋势.经油红O脂肪染色和瘦素、脂联素分泌检测证实分离培养的细胞为功能活跃的前脂肪细胞.结论 成功建立了人网膜前脂肪细胞模型,观察到瘦素和脂联素不同分泌模式.脂联素可作为鉴定前脂肪细胞分化成熟的内分泌功能特异标志物.
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人皮下、网膜脂肪组织来源前脂肪细胞的原代培养及甘精胰岛素对其增殖、分化的影响
目的 探讨人皮下、网膜脂肪组织来源的前脂肪细胞形态、功能的差异,观察不同浓度甘精胰岛素对其增殖、分化的影响.方法 胶原酶分离法原代培养人皮下、网膜前脂肪细胞,倒置显微镜下观察不同来源的人前脂肪细胞在形态方面的差异,不同浓度甘精胰岛素(20、200、500、1000、1500 nmol/L)干预其增殖及分化过程,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测二者增殖的差异,实时定量PCR检测脂肪分化相关基因表达的差异.结果 (1)可从人皮下、网膜脂肪组织分离出前脂肪细胞,并在体外扩增,皮下前脂肪细胞更细长,容易增殖,而网膜前脂肪细胞呈多角形,易于老化.(2) MTT法结果显示甘精胰岛素抑制网膜前脂肪细胞的体外增殖,且其抑制作用具有剂量依赖性,1000 nmol/L干预72 h后,与未加胰岛素组相比,网膜前脂肪细胞的增殖明显低[吸光度(A)值:0.144±0.021比0.267±0.040,P＜0.01]；皮下前脂肪细胞作用不明显(A值:0.305±0.045比0.350±0.037,P＞0.05).(3)500 nmol/L的胰岛素浓度是人前脂肪细胞分化的适宜浓度,PCR结果显示该浓度时,对于皮下前脂肪细胞,脂肪分化的标志基因过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)γ(F=31.31,P＜0.01)和CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA表达高(F =9.86,P＜0.05),前脂肪细胞的标志基因Pref-1表达低(皮下F=68.95,P＜0.01;网膜F=30.38,P ＜0.01),但是胰岛素浓度对网膜脂肪细胞PPARγ、C/EBPα mRNA影响不大(均P＞0.05).结论 甘精胰岛素可抑制人网膜前脂肪细胞的增殖,促进皮下、网膜前脂肪细胞的分化.
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血管紧张素Ⅱ对前脂肪细胞分化相关转录因子表达的影响
目的 探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)对前脂肪细胞分化过程中转录因子PPARγ、C/EBP α、SREBP1-c/ADD-1表达的调节从而研究AngⅡ调节前脂肪细胞分化可能的分子机制.方法 3T3-L1前脂肪细胞体外传代培养及诱导分化,用RT-PCR技术检测诱导分化过程中不同浓度AngⅡ处理6d对前脂肪细胞分化相关转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA表达水平的影响.结果 RT-PCR结果显示,100 nmol/L的AngⅡ处理细胞6d后,PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的相对表达量与对照组(AngⅡ添加浓度为0 nmol/L)有显著性差异(P＜0.05),比对照组相应的转录因子分别增加了48％、50％、43％.结论 前脂肪细胞分化过程中AnⅡ能够上调PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的表达量,AngⅡ可能通过影响PPARγ、C/EBPα和SREBP1-c/ADD-1的表达来调节前脂肪细胞的分化过程.
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RAS阻断剂对人前脂肪细胞分化和胰岛素敏感性的影响
目的 探讨肾素-血管紧张素系统(RAS)阻断剂对体外原代培养的人内脏和外周来源的前脂肪细胞分化和胰岛素敏感性的影响. 方法 自16例行电切开腹部手术的健康成年女性腹部皮下和网膜分离前脂肪细胞.分为4组,即无干预的正常对照(NC)组、噻唑烷二酮类约物吡格列酮(Pioglitazone)组、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)类药物贝那普利(Benazapril)组和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)类药物替米沙坦(Telmisartan)组,诱导分化共14 d.观察细胞活力、细胞内脂质含量和前脂肪细胞分化标志物--甘油-3-磷酸脱氧酶的活性.细胞的胰岛素敏感性通过葡萄糖消耗试验测定. 结果 对照组皮下来源的前脂肪细胞活力高于网膜,脂质含量反而低于网膜来源细胞,二者胰岛素敏感性无差别.与对照组相比,贝那普利、替米沙坦和吡格列酮均能明显提高网膜和皮下来源前脂肪细胞的细胞活力和脂质含量,并提高细胞的胰岛素敏感性;其中,替米沙坦组网膜前脂肪细胞的上述各指标均高于吡格列酮组.在网膜,替米沙坦和吡格列酬组的葡萄糖消耗量分别为(5.567±1.612)mmol/L和(4.418±1.572)mmol/L,P=0.020;皮下则相反,两组葡萄糖消耗量分别为(5.335±1.461)mmol/L和(7.506±1.615)mmol/L,P<0.01. 结论 RAS阻断剂(替米沙坦和贝那普利)可促进人前脂肪细胞分化并改善细胞的胰岛素敏感性,且较之吡格列酮在内脏发挥优势性作用.
关键词： 肾素-血管紧张素系统阻断剂 噻唑烷二酮类药物 前脂肪细胞 细胞分化 胰岛素抵抗 -
甘精、地特和人胰岛素对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响
目的:观察甘精、地特和人胰岛素对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响.方法:用甘精、地特和人胰岛素干预3T3-L1前脂肪细胞,并用MTT和油红O染色法测定其增殖和分化水平.结果:甘精胰岛素(1.013士0.007)可促进前脂肪细胞增殖,地特胰岛素(0.990±0.009)可抑制前脂肪细胞增殖;胰岛素为前脂肪细胞分化的必须成分,促分化作用人胰岛素(0.638士0.006)强,甘精胰岛素(纯品0.6235=0.007,液体0.445土0.006)次之,地特胰岛素(0.412士0.006)弱.结论:不同胰岛素对前脂肪细胞增殖分化的影响不同.
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雌二醇对脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响
目的 观察不同浓度雌二醇对原代培养人大网膜脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响.方法 体外培养人大网膜前脂肪细胞,诱导分化成熟后用雌二醇进行干预,RT-PCR方法检测脂联素mRNA水平.结果 成功培养出人大网膜前脂肪细胞,雌二醇10-9mol/L-10-7mol/L作用24 h,不同程度地抑制脂肪细胞脂联素mRNA的表达,且有剂量依赖性.结论 雌二醇可抑制脂肪细胞脂联素mRNA的表达.
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甘精胰岛素、地特胰岛素、人胰岛素对3T3-L1脂肪细胞PPARγ2mRNA表达的影响
目的 探讨人胰岛素、甘精胰岛素、地特胰岛素对体外培养3T3-L1脂肪细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPARγ2)基因表达的影响及可能机制.方法 体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在分化培养液分别加入100 nmol/L、500 nmol/L、1 000 nmol/L人、甘精、地特胰岛素培养10 d,用RT-PCR检测脂肪细胞中PPARγ2 mRNA表达水平的变化.结果 在细胞分化的过程中,胰岛素浓度的增高促进PPARγ2的表达;相同浓度下,人胰岛素促进PPARγ2 mRNA表达强,甘精胰岛素次之,地特胰岛素弱.结论 胰岛素通过上调PPARγ2基因表达促进前脂肪细胞的分化,不同胰岛素促分化能力不同.
