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菩人丹对2型糖尿病胰腺微循环损伤大鼠VEGF 及其受体 VEGFR2/p - VEGFR2和Angiostatin、Endostatin 的影响
目的：观察菩人丹（PuRenDan）对2型糖尿病胰腺微循环损伤大鼠胰腺组织中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR2/ p - VEGFR2）和血管生成抑制素（Angiostatin）、内皮细胞抑制素（Endostatin）的影响，探讨菩人丹修复胰腺微循环障碍的机制。方法通过高脂饲料喂养（12周）与尾静脉快速注射小剂量链脲佐菌素（30 mg/ Kg）的方法建立大鼠模型。在同批次正常大鼠中随机选15只为正常对照组，后将成模大鼠随机分为：模型组、菩人丹组（1.77 g/ Kg）、降糖通脉片组（0.42 g/Kg）和二甲双胍组（0.14 g/ Kg），每组15只。各组大鼠每天灌胃1次，正常对照组和模型组给予等剂量蒸馏水，连续给药4周后，提取各组大鼠胰腺组织总蛋白质，采用 Western blot 法测定各组大鼠胰腺组织中 VEGF 及其受体 VEGFR2的蛋白质表达和磷酸化水平，以及 Angiostatin、Endostatin 的蛋白质表达水平。结果与正常对照组相比，模型组胰腺组织 VEGF 蛋白质表达水平和受体 VEGFR2磷酸化水平明显降低（P ﹤0.01），而 Angiostatin、Endostatin 蛋白质表达水平显著增高（P ﹤0.01）；菩人丹干预后，VEGF 蛋白质表达水平和受体 VEGFR2磷酸化水平均显著上调（P ﹤0.01），而 Angiostatin、Endosta-tin 蛋白质表达则被抑制（P ﹤0.01）。其与阳性对照药降糖通脉片和二甲双胍作用相当。结论菩人丹通过上调血管生成促进因子 VEGF 蛋白质表达及其受体 VEGFR2磷酸化，抑制血管生成抑制因子Angiostatin、Endostatin 的蛋白质表达，促进糖尿病状态下胰腺组织微血管新生，进而改善胰腺微循环障碍，发挥其对胰岛β细胞的保护、修复作用。
关键词： 菩人丹 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体2 血管生成抑制素 内皮细胞抑制素 -
青蒿琥酯纳米脂质体对人肝癌HepG2细胞抗血管生成作用的研究
目的:探讨在青蒿琥纳米脂质体的干预下,血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)在HepG2中的表达,为肝癌的治疗提供理论依据.方法:取对数生长期HepG2细胞制成3×105/mL单细胞悬液,接种于35 cm2培养皿中培养24 h后给药,分别设生理盐水对照组、青蒿琥酯原料药组、青蒿琥酯纳米脂质体组(浓度均为μmol·L-1),药物作用24 h.采用RT-PCR法检测各处理组HepG2细胞中VEGF mRNA及VEGFR2 mRNA的表达水平；Western blotting法检测各处理组HepG2细胞中VEGF及VEGFR2的蛋白表达水平.结果:青蒿琥酯纳米脂质体组VEGF及VEGFR2 mRNA相对表达量为0.22 ±0.02,0.09 ±0.02;对照组为0.55 ±0.03,0.53 ±0.02；青蒿琥酯纳米脂质体组VEGF,VEGFR2蛋白相对表达量为0.33 ±0.06,0.25 ±0.06,对照组为0.95±0.03,0.78 ±0.03,(P＜0.05).青蒿琥酯纳米脂质体组与原料药组的VEGF及VEGFR2 mRNA表达和蛋白表达均低于对照组,且纳米脂质体组表达量低于原料药组.结论:青蒿琥酯纳米脂质体能够抑制肿瘤血管的生成达到抗肿瘤作用,且作用强于青蒿琥酯原料药,有应用于肝癌治疗的潜在价值.
关键词： 青蒿琥酯 纳米脂质体 肝癌 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体2 -
健脾解毒方对HUVECs细胞增殖、侵袭、转移和管腔形成能力的影响
目的:探讨健脾解毒方对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞增殖、侵袭、转移和管腔形成能力的影响.方法:以伴有或不伴有血管内皮生长因子(VEGF) (4ng/mL)及不同浓度的健脾解毒方作用HUVECs细胞,采用CCK-8检测不同浓度的健脾解毒方对HUVECs细胞增殖的影响;划痕实验检测转移能力;Transwell实验检测侵袭能力;Matrigel实验检测管腔形成能力;Western blot检测血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)蛋白及其磷酸化水平.结果:健脾解毒方能够抑制HUVECs细胞的增殖,对VEGF诱导的HUVECs细胞增殖的抑制作用更为敏感.健脾解毒方能够以剂量依赖性方式抑制VEGF诱导的HUVECs细胞的侵袭、转移和管腔形成能力(P＜0.01).健脾解毒方能够显著下调VEGF诱导的HUVECs细胞VEGFR2蛋白的磷酸化水平(P＜0.01).结论:健脾解毒方抑制HUVECs细胞增殖、侵袭、转移和管腔形成能力的机制可能与其下调VEGFR2蛋白磷酸化水平有关.
关键词： 健脾解毒方 人脐静脉内皮细胞 血管新生 血管内皮生长因子受体2 -
小檗碱对HL-60细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体2表达的影响
本研究旨在观察小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞的增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)表达的影响.选用HL-60细胞体外培养,在不同浓度的小檗碱(6-96μg/ml)作用下,应用CCK-8法检测小檗碱对HL-60细胞的增殖抑制作用；应用流式细胞仪检测HL-60细胞的凋亡水平及细胞周期的分布；用RTPCR及Western blot分别检测VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白表达的变化.结果显示,小檗碱能抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,呈浓度和时间依赖关系.随着小檗碱浓度增加,G1期细胞增多,S期细胞减少,同时VEGFR2mRNA和VEGFR2蛋白表达减少.结论:小檗碱可抑制HL-60细胞增殖,促进细胞凋亡,改变HL-60细胞周期,下调VEGFR2mRNA及VEGFR2蛋白的表达.
关键词： 小檗碱 HL-60细胞 血管内皮生长因子受体2 细胞周期 细胞凋亡 -
人胚胎主动脉血管内皮祖细胞的分离、培养及鉴定
目的 研究人胚胎血管内皮祖细胞(EPCs)分离、扩增及鉴定的方法,并评价其分化成血管内皮细胞的能力,为人胚胎血管来源 EPCs 作为干细胞技术治疗疾病的细胞材料提供依据.方法 从 14 周龄流产人胚胎主动脉中应用胶原酶消化法分离获得 EPCs,用含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和白血病抑制因子的低血清培养基体外扩增培养EPCs.分离培养的 EPCs 鉴定采用细胞免疫荧光染色、RT-PCR 及流式细胞术,检测 EPCs 细胞的特异标志CD133、CD34 和血管内皮细胞生长因子受体 2(VEGFR2).培养的 EPCs 应用 VEGF 进行诱导分化,并评价其分化成为血管内皮细胞的能力.结果 分离的人胚胎主动脉 EPCs 细胞表达 EPCs 的标志分子 CD133、CD34 和 VEGFR2.EPCs 在体外特定低血清培养条件下表现很强的增殖能力.培养的 EPCs 细胞经过VEGF 诱导后,细胞表达 CD133 明显降低,表达 vWF、CD31 和 ELAM-1 增强,并且体外成管能力和摄取Ac-LDL 能力增强,表明细胞分化成为血管内皮细胞.结论 人胚胎早期主动脉的 EPCs 具有很好的体外自我更新能力和分化成为血管内皮细胞的潜能,可作为 EPCs 治疗疾病的细胞材料.
关键词： 血管内皮生长因子受体2 主动脉 细胞分离 细胞分化 -
具有血管内皮细胞生长因子受体-2酪氨酸激酶抑制作用的链霉菌次生代谢产物2754R的研究
目的分离鉴定链霉菌 I06A-02754发酵液中具血管内皮生长因子受体-2酪氨酸激酶（VEGFR2-CD）抑制活性的强极性次生代谢产物。
方法采用大孔吸附树脂、阴离子交换树脂、MPLC、HPLC等分离手段对次生代谢产物进行分离纯化；通过 UV、IR、HR-ESI 质谱、1D-NMR 和2D-NMR 对其结构进行鉴定，以 ELISA 法检测其次生代谢产物对 VEGFR2-CD 的抑制活性；以 MTT 法检测化合物对肿瘤细胞的抑制活性。
结果从发酵液的水溶性部分分离得到一个极性较大的胡桃霉素类次生代谢产物--2754R；其化学结构与胡桃霉素D 一致，对 VEGFR2-CD 表现出一定的抑制活性；MTT 实验显示化合物2754R 对 HepG2细胞、MCF-7细胞和BEL-7402细胞没有明显的抑制活性（IC50>10μmol/L）。
结论化合物2754R 是具有 VEGFR2-CD 活性的胡桃霉素类次生代谢产物。关键词： 血管内皮生长因子受体2 链霉菌属 胡桃霉素D -
携VEGFR2单抗靶向微泡评价小鼠肿瘤新生血管
目的 探讨携带抗血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)单克隆抗体的超声微泡造影剂(MBv)评价小鼠肿瘤新生血管的可行性.方法 以生物素-亲和素桥接法构建MBv.免疫荧光法体外鉴定其性质.建立小鼠H22肿瘤模型,分别注射MBv和普通脂质微泡(MBc)进行超声造影检查.定量分析造影图像视频强度变化,描绘时间-强度曲线,并行肿瘤组织VEGFR2免疫组化检测.结果 成功构建偶联抗小鼠VEGFR2单抗的MBv.造影结果 表明MBv组较MBc组达峰时间提前,峰值较高,持续时间更长.免疫组化证明瘤体内新生血管内壁VEGFR2高度表达.结论 应用MBv结合超声造影可较好地评估肿瘤新生血管状况.MBv是良好的肿瘤靶向造影剂.
关键词： 超声检查 介入性 肿瘤 血管新生 血管内皮生长因子受体2 -
比较VEGF及其受体KDR在结直肠腺瘤和腺癌中的表达及与预后的关系
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体KDR在结直肠腺瘤和结直肠腺癌中的表达和临床病理的关系,了解VEGF和KDR的表达与预后的关系.方法 选择结直肠腺瘤和结直肠腺癌组织标本各100例,采用免疫组织化学染色法检测VEGF和KDR在结直肠腺瘤和结直肠腺癌中的表达情况,分析VEGF及KDR与各临床病理因素及预后之间的关系.结果 VEGF和KDR在结直肠腺癌组中的阳性表达明显高于结直肠腺瘤组,二者表达差异有统计学意义(P<0.05);VEGF和KDR在结直肠腺癌组织中的阳性表达与肿瘤大小、转移情况、浸润深度相关,差异有统计学意义(P<0.05); VEGF和KDR在结直肠腺瘤组织中的表达与增生程度相关,差异有统计学意义(P<0.05);结直肠腺癌患者的Kaplan-Meier生存曲线显示,VEGF阳性表达较VEGF阴性表达术后生存率低(P<0.01),KDR表达与患者术后生存率差异无统计学意义(P>0.01).结论 结直肠腺癌组织中VEGF和KDR的表达与肿瘤大小、转移情况和浸润深度密切相关,VEGF阳性表达较VEGF阴性表达者术后生存率低.VEGF和KDR在结直肠腺瘤中的表达与增生程度存在相关性.
关键词： 结直肠肿瘤 血管内皮生长因子A 血管内皮生长因子受体2 -
FOLFOX6方案对患者结肠癌细胞生物特性影响的研究
目的 探究新辅助放化疗对患者结肠癌细胞生物特性的影响.方法 选取2012-01/2015-12期间嘉兴市第二医院收治的68例结肠癌为研究对象,将患者采用随机数表法分为对照组和观察组,各34例.给予对照组患者结肠癌根治手术和常规术后放化疗,观察组患者在此基础上进行术前新辅助放化疗.对比2组患者癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)、血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的阳性表达率,2组患者治疗后20 mo的复发率和生存率.结果 观察组与对照组患者的CEA阳性表达率分别为58.83％和85.30％,VEGFR2阳性表达率分别为44.10％和67.63％,PCNA阳性表达率分别为47.04％和73.54％,差异具有统计学意义(P＜0.05).术后20 mo观察组患者的复发率和生存率分别为14.70％和70.58％,对照组患者的复发率和生存率分别为38.23％和47.05％,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 术前新辅助放化疗能够降低结肠癌患者癌组织中CEA、VEGFR2和PCNA的表达,抑制结肠癌肿瘤细胞的增殖、转移,促进结肠癌肿瘤细胞凋亡,降低复发率,提高生存率.
关键词： 结肠癌 新辅助放化疗 癌胚抗原 血管内皮生长因子受体2 增殖细胞核抗原 -
Notch-1及Delta样配体4在糖尿病大鼠早期视网膜中的表达
目的 探讨糖尿病早期大鼠视网膜中Notch-1与Delta样配体4(Dll-4)的表达变化,及其与血管内皮生长因子受体-2 (VEGFR-2)的关系.方法 健康雄性成年大鼠60只,分为正常对照(NC)组,糖尿病1个月(DM 1 m)组、2个月(DM 2 m)组及3个月(DM 3 m)组.免疫组织化学法和RT-PCR检测视网膜中Notch-1、Dll-4、VEGFR-2的表达.结果 免疫组织化学结果显示,糖尿病大鼠Notch-1、Dll-4、VEGFR-2在视网膜中染色范围较正常大鼠广.RT-PCR结果显示,DM2 m组、DM3 m组Dll-4mRNA表达较NC组升高(P＜0.05),DM 1 m组、DM2 m组、DM3 m组Notch-1 mRNA、VEGFR-2mRNA表达较NC组升高(P＜0.05).Dll-4 mRNA与VEGFR-2及Notch-1呈正相关(r=0.80、0.89,P＜0.01),Notch-1与VEGFR-2 mRNA表达呈正相关(r=0.88,P=0.00).结论 糖尿病大鼠早期的视网膜中,Notch-1、Dll-4表达升高,与VEGFR-2表达基本一致,表明糖尿病早期Notch信号通路参与调控视网膜的变化,这种调控作用也许和VEGF通路有关.
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降糖治疗对老年冠心病合并糖尿病患者外周血内皮祖细胞影响的研究
目的 探讨降糖药物对老年冠心病合并糖尿病患者外周血CD34与血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)共同标记的血管内皮祖细胞(EPC)水平的影响.方法 选择确诊的冠心病患者85例,根据口服葡萄糖耐量试验结果分为冠心病组41例,冠心病合并糖尿病组(合并组)44例,采用流式细胞仪检测2组外周血CD34及VEGFR-2双阳性的EPC(CD34+/VEGFR-2+ EPC)水平；合并组患者降糖治疗,血糖稳定4周后门诊随访,观察外周血CD34+/VEGFR-2+ EPC水平的变化.结果 合并组外周血CD34+/VEGFR-2+ EPC水平较冠心病组明显降低(P＜0.05)；合并组治疗后外周血CD34 +/VEGFR-2+ EPC水平较治疗前明显上升(P＜0.05)；EPC百分比与糖化血红蛋白水平呈负相关(r=-0.771,P＜0.05).结论 降糖治疗可减轻高血糖水平对CD34 +/VEGFR-2+的影响,使EPC耗损减少,有利于减缓冠状动脉粥样硬化进程.
关键词： 冠心病 糖尿病 血管内皮生长因子受体2 降血糖药 血小板聚集 -
血管紧张素Ⅱ对骨髓源内皮祖细胞增殖能力的影响及机制的探讨
目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对骨髓源内皮祖细胞(EPCs)增殖能力的影响,并探讨其可能机制.方法 通过密度梯度离心法分离大鼠骨髓单个核细胞,进行诱导分化,培养7天获得EPCs.抗AC133与抗血管内皮生长因子受体对EPCs双标后进行激光共聚焦鉴定.收集贴壁细胞加入不同浓度AngⅡ(10-7 mol/L、10-8 mol/L、10-9 mol/L)进行干预,MTT法观察EPCs增殖能力的变化,并利用RT-PCR法观察不同浓度AngⅡ干预及缬沙坦、蛋白激酶C(PKC)抑制剂预处理后EPCs的Flk-1 mRNA表达量的变化.结果 在血管内皮生长因子(VEGF)存在的前提下,AngⅡ可以增强EPCs的增殖能力,并可以上调Flk-1 mRNA的表达.缬沙坦、抑制剂可以显著抑制AngⅡ的这种作用.结论 AngⅡ可以通过1型受体、PKC通路上调EPCs的Flk-1,在VEGF的作用下促进其增殖,从而有助于血管新生.
关键词： 血管紧张素Ⅱ 骨髓细胞 细胞增殖 血管内皮生长因子受体2 逆转录聚合酶链反应 -
脐带间充质干细胞治疗1型糖尿病小鼠视网膜病变的作用机制探索
目的 研究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)能否通过影响Notch信号通路及血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)对糖尿病视网膜病变(DR)起治疗作用.方法 选取周龄6～8周、体重20～24 g雌性NOD小鼠80只,适应性喂养1周后按随机数字表法将1型糖尿病发病小鼠分为糖尿病(DM)组、胰岛素(INS)组(给予甘精胰岛素干预)和干细胞(MSC)组(给予hUC-MSCs+甘精胰岛素干预),选取未发生糖尿病的NOD小鼠为正常对照(NC)组;每组10只小鼠.定期检测各组小鼠随机血糖.8周后处死小鼠,制作眼球切片,计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数;检测视网膜Notch-1蛋白胞内段(NICD)、发状分裂相关增强子1(HESR1) mRNA、VEGFR-2mRNA及蛋白的表达.多组间比较采用单因素方差分析,多组间两两比较采用小显著性差异法(LSD)-t检验.结果 (1)四组间突破内界膜的内皮细胞核数量总体比较差异有统计学意义(F=57.247,P＜0.001),与DM组(6.4±1.0)相比,MSC组(2.8±0.5)数量显著减少(P＜0.05).(2)四组间小鼠视网膜NICD蛋白、HESR1 mRNA、VEGFR-2mRNA及蛋白表达量比较差异均有统计学意义(分别为F=155.076～562.306,均P＜0.05).与NC组相比,DM组小鼠视网膜NICD蛋白(0.38±0.18比1.74±0.11)和HESR1 mRNA(0.29±0.04比1.00±0.00)表达下降、VEGFR2 mRNA(4.11±0.40比1.00±0.00)及蛋白(1.40±0.85比0.28±0.02)表达量增加(均P＜0.05);与DM组相比,MSC组小鼠视网膜NICD蛋白(1.36±0.05比0.38±0.18)、HESR1 mRNA (0.80±0.02比0.29±0.04)表达增加,VEGFR2 mRNA(1.80±0.27比4.11±0.40)及蛋白(0.92±0.10比1.40±0.85)表达量减少,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 hUC-MSCs可能通过激活Notch通路、抑制VEGFR-2来抑制视网膜新生血管形成,从而对DR起治疗作用.
关键词： 糖尿病视网膜病变 间充质干细胞 血管内皮生长因子受体2 受体 Notch1 -
60%氧暴露对早产大鼠肺血管内皮生长因子及其受体表达的影响
目的 观察60%氧暴露对早产大鼠肺血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体--胎肝激酶-1受体(fetal liver kinase-1, Flk-1)表达的影响,探讨其与新型支气管肺发育不良发病机制之间的关系.方法 早产鼠生后6 h内随机分为中浓度氧组(简称中氧组)和空气组,空气组置于常压空气中,中氧组置于氧体积分数为60%的氧舱中,两组动物均于生后1、4、7、11和14 d各随机取8只,行HE染色,观察肺组织形态学结构,做辐射状肺泡计数(radial alveolar counts,RAC);采用Western 印迹和RT-PCR技术检测各组肺组织VEGF及其受体Flk-1蛋白及mRNA表达水平.结果 (1)中氧组RAC在7 d时为8.32±0.11,11 d时为8.53±0.08,14 d时为9.03±0.17,明显高于空气组相应时间点的RAC值;(2)中氧组VEGF及其受体Flk-1 mRNA表达水平在第7、11和14天均低于空气组相应时间点,差异有统计学意义 (P＜0.05);(3)中氧组VEGF蛋白表达水平在第11、14天时低于空气组;受体Flk-1蛋白表达水平与其mRNA表达变化规律基本一致.结论 60%氧暴露可引起早产大鼠肺部VEGF及其受体Flk-1表达下降,可能是引起肺微血管发育障碍及肺泡化进程受阻,进而导致新型BPD发生的重要因素.
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重组人促红细胞生成素在早产儿脑白质损伤模型鼠中调控血管内皮生长因子受体2的机制
目的 探讨在早产儿脑白质损伤模型鼠脑血管生成中,重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rh-EPO)调控血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)表达的可能机制. 方法 选取3日龄Sprague-Dawley仔鼠,采用随机数余数分组法分为假手术组、缺血缺氧组、缺血缺氧+促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)组、缺血缺氧+EPO受体(erythropoietin receptor,EPOR)拮抗剂组、缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗剂组.假手术组仔鼠仅游离右侧颈总动脉.缺血缺氧组仔鼠结扎右侧颈总动脉,并吸入氮氧混合气体2h.缺血缺氧+EPO组、缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗剂组结扎后4h腹腔内给予rh-EPO 5 U/g.缺血缺氧+EPOR拮抗剂组、缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗剂组,结扎后脑室内给予EPOR拮抗剂5μl,其余组均给予等量生理盐水.采用蛋白质印迹技术检测分组处理完成后60和90 min脑组织中EPOR和磷酸化EPOR(phosphorylated-EPOR,p-EPOR)、总细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)和磷酸化ERK(phosphorylated-ERK,p-ERK)及分组处理完成后2、4d脑组织中的VEGFR2表达情况.多组间数据比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK检验. 结果 分组处理完成后60和90 min,仔鼠脑组织EPOR蛋白表达在假手术组呈较低水平(分别为1.095±0.182和0.751±0.136);在缺血缺氧组(1.717±0.206和1.416±0.242)、缺血缺氧+EPO组(2.557±0.222和2.111±0.159)和缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗剂组(1.547±0.170和1.452±0.250)表达增加,高于假手术组;在缺血缺氧+EPO组高于缺血缺氧组和缺血缺氧+EPO+EPOR拈抗剂组;在缺血缺氧+EPOR拮抗剂组(1.088±0.160和1.020±0.174)低于缺血缺氧组;差异均有统计学意义(F值分别为30.154和20.265,P值均＜0.05).p-EPOR和p-ERK,以及分组处理完成后2和4 d VEGFR2在各组的表达差异与EPOR一致,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);此外,分组处理完成后4d,VEGFR2表达在缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗剂组低于缺血缺氧组(1.053±0.118与1.439±0.074,F=54.248,P＜0.05).分组处理完成后60和90 min,各组仔鼠脑组织ERK表达差异均无统计学意义(F值分别为1.117和0.734,p值均＞0.05). 结论 在早产儿脑白质损伤模型鼠,EPO与EPOR作用后影响下游ERK信号通路,增加脑组织VEGFR2的表达.
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持续吸入不同浓度氧气对新生大鼠肺血管内皮生长因子及其受体tuRNA表达的影响
目的 探讨持续吸入不同浓度氧气对新生大鼠肺血管内皮生长因子(VEGF)及其受体1(VEGFRl)和受体2(VEGFR2)mRNA表达的影响.方法 新生足月SD大鼠32只,随机分为对照组和实验组.实验组生后12 h开始持续吸入氧气,按不同的吸入氧浓度,将实验组又分为30%O2组、50%O2组和75%O2组.对照组吸入空气.每组8只.于实验开始后21 d处死实验大鼠,取出右肺下叶,RT-PCR技术检测VEGF、VEGFR1和VEGFR2 mRNA表达,根据2-△△CT的计算方法,实验组基因表达差异用实验组相对于对照组基因表达量的倍数表示.结果 与对照组相比,30%O2对新生大鼠肺VEGF及其受体mRNA表达无影响.75%O2组VEGF mRNA表达是对照组的0.48倍;50%O2组、75%O2组VEGFR1 mRNA分别为对照组的0.18倍和0.06倍;VEGFR2 mRNA分别为对照组的0.22倍和0.10倍,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 长时间吸入低浓度氧对新生大鼠肺VEGF及其受体mRNA影响不明届,而持续吸入中等浓度及较高浓度氧可降低VEGF及其受体mRNA的表达.
关键词： 血管内皮生长因子A 血管内皮生长因子受体1 血管内皮生长因子受体2 氧吸入疗法 氧 大鼠 -
LINC00152通过调节VEGFR2的表达对血管瘤内皮细胞生长、增殖、迁移和侵袭的影响
目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)LINC00152通过调节血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)对血管瘤内皮细胞(HemEC)在体外生长、增殖、迁移和侵袭的影响.方法 采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同组织中LINC00152的表达情况,采用EdU技术检测细胞的增殖情况,采用CCK-8法检测细胞活力,采用Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,应用生物信息学软件预测LINC00152作用靶点,通过双荧光素报告基因实验验证LINC00152与miRNA-200c-5p和miRNA-195-5p的相互作用,通过qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测VEGFR2 mRNA和蛋白的表达水平,通过SKLB1002和miRNA-200c-5p agomir及miRNA-195-5p agomir处理后,采用同样的方法检测LINC00152对HemEC增殖、迁移和侵袭的影响.结果 qRT-PCR检测结果显示,LINC00152在血管瘤增生期组织和血管瘤退化期组织中的相对表达量均明显高于癌旁正常皮肤组织(P﹤0.01).与sh-NC组相比,sh-Linc1组和sh-Linc2组细胞中LINC00152的相对表达量均降低(P﹤0.05).与OE-NC组相比,OE-Linc1组和OE-Linc2组细胞中LINC00152的相对表达量均明显升高(P﹤0.01).OE-Linc1组和OE-Linc2组细胞的侵袭和迁移比例均明显高于OE-NC组(P﹤0.01).与癌旁正常皮肤组织相比,血管瘤增生期组织中VEGFR2 mRNA的表达水平明显升高(P﹤0.01).与NC组相比,miRNA-200c-5p组、miRNA-195-5p组和SKLB1002组细胞在72 h时的光密度值均降低(P﹤0.05).与NC组相比,miRNA-200c-5p组、miRNA-195-5p组和SKLB1002组HemEC在体外的迁移和侵袭能力均明显降低(P﹤0.01).结论 LINC00152可通过调节VEGFR2促进HemEC的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与LINC00152竞争性结合miRNA,从而提高VEGFR2的表达水平有关.
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人非小细胞肺癌VEGFR2和NRP-1表达意义分析
目的:探讨人非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)组织中VEGFR2和NRP-1的表达情况及临床意义.方法:选取2009-01-01-2012-11-30连云港市第一人民医院手术切除并经病理确诊的NSCLC石蜡包埋标本40例和肺良性组织10例,采用免疫组化方法(IHC)测定VEGFR2、NRP-1表达,运用荧光原位杂交技术(FISH)检测VEGFR2基因(KDR)及NRP-1基因拷贝获益(copy number gains,CNG),终所获结果结合患者的临床病理资料进行分析.结果:40例NSCLC组织中VEGFR2蛋白高表达率为57.5％,NRP 1蛋白高表达率为55.0％;KDR CNG(+)比率为32.5％,NRP-1 CNG(+)的比率为30.0％.VEGFR2蛋白在NSCLC组织中的表达与肺良性病变的阴性表达比较,差异有统计学意义,x2=10.65,P＜0.001;NRP-1蛋白在NSCLC组织中的表达与肺良性病变的阴性表达比较,差异有统计学意义,x2 =9.82,P=0.002,且其表达与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移和肿瘤组织分化程度有关,P＜0.05;与患者年龄和病理类型无关,P＞0.05.肺癌患者中KDR CNG(+)与肺良性病变KDR CNG(-)比较差异有统计学意义,x2 =4.39,P=0.04;肺癌患者中NRP-1 CNG(+)与肺良性病变CNG(-)比较差异有统计学意义,x2=3.95,P=0.04;且其与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移和肿瘤组织分化程度有关,P＜0.05;而与患者年龄和病理类型无关,P＞0.05.结论:VEGFR2、NRP-1在NSCLC组织中均有高表达,并且它们在NSCLC发生、发展和转移中有重要意义,对临床判断NSCLC预后和指导临床抗血管生成有一定的价值.
关键词： 癌 非小细胞肺/病理学 血管内皮生长因子受体2 神经纤毛蛋白-1 肺肿瘤/病理学 -
内皮抑素对NSCLC细胞系中VEGF受体2表达的影响及其放射增敏效应机制研究
目的：研究内皮抑素对NSCLC细胞（人肺腺癌A549细胞、人肺鳞癌Calu?1细胞）中VEGF受体2（ VEGFR2）表达影响，并探索其放射增敏效应的可能机制。方法 CCK8法检测内皮抑素对细胞增殖抑制作用，计算24 h的20％药物抑制浓度（ IC20）；采用RT?PCR及蛋白印迹法检测各组VEGFR2、相关信号通路及HIF?1α mRNA与蛋白表达变化；克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性，流式细胞术检测凋亡及周期分布。多样本均数比较采用单因素方差分析，组间比较采用两样本均数t检验。结果经内皮抑素处理后，Calu?1细胞增殖活力明显下降（F＝50?36，P＜0?01），IC20＝296?5μg／ml；VEGFR2和HIF?1αmRNA与蛋白表达水平均受抑制（F＝25?43、10?44，P 值均＜0?05）；同时Akt、ERK 1／2和p38的蛋白磷酸化水平均减低（ F＝2?89、0?24、1?09，P值均＜0?05）；其放射增敏比为1?38；凋亡率、G2＋M期阻滞增加（ F＝44?15、104?24，P值均＜0?01）。此外，与Calu?1细胞相比，内皮抑素对A549细胞放射增敏比为1?09。结论内皮抑素能促进VEGFR2高表达Calu?1细胞凋亡并能增强放射敏感性，对低表达的A549细胞效果有限。
关键词： 内皮抑素 A549细胞系 Calu-1细胞系 血管内皮生长因子受体2 放射敏感性 -
RNA干扰VEGFR-2表达对Calu-1细胞增殖、迁移、侵袭力及放射效应影响
目的：研究VEGFR?2对肺癌细胞系Calu?1细胞增殖、迁移、侵袭及联合放射后凋亡率影响，并探讨其可能机制。方法 siRNA敲低Calu?1细胞中的VEGFR?2基因，借助实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测VEGFR?2表达水平的变化；将细胞分为对照组、VEGF组、VEGFR?2基因敲低组和基因敲低加VEGF组。利用CCK8法、细胞划痕实验及Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力变化，利用蛋白印迹法检测VEGFR?2及下游相关信号通路蛋白表达水平变化；各组细胞联合放射后，检测细胞凋亡。结果 RNA干扰VEGFR?2后Calu?1细胞中VEGFR?2的mRNA水平和蛋白水平均降低（ P＝0．001、0．000）；RNA干扰VEGFR?2后Calu?1细胞的增殖、迁移、侵袭能力均降低（ P＝0．000、0．000、0．031）；RNA干扰VEGFR?2后Calu?1细胞中Akt、ERK 1／2、p38的蛋白磷酸化水平均降低（ P＝0．336、0．986、0．553）；RNA干扰VEGFR?2后联合放射后Calu?1细胞的凋亡率增加（ P＝0．012），RNA干扰VEGFR?2后HIF?1α蛋白表达被抑制（ P＝0．016）。结论 VEGFR?2基因表达敲低后显著抑制了Calu?1细胞的多项生理功能，并提高了放射后细胞凋亡率。
