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健脾养正消癥方对裸鼠皮下移植瘤中肿瘤转移相关因子的影响
目的:观察健脾养正消癥方对BALB/c裸鼠人胃癌MGC-803细胞皮下移植瘤生长及转移的影响,并探讨其相关机制.方法:建立人胃癌MGC-803裸鼠皮下移植瘤模型,并随机分为阴性对照组、阳性对照组、健脾养正消癥方大、小剂量组,观察对裸鼠皮下移植瘤的抑制作用.使用荧光定量PCR检测移植瘤内RECK、c-myc、MMP-9、MMP-14、CXCR4和VEGFA的基因表达.Western blot检测移植瘤内的MMP-9、MMP-14、RECK、STAT3和p-STAT3的蛋白表达.结果:与阴性对照组比较,健脾养正消瘕方大、小剂量组有明显缩小皮下移植瘤体积的作用.荧光定量PCR显示,健脾养正消瘕方大剂量组中RECK的表达显著上调,而c-myc、MMP-9、MMP-14,CXCR4和VEGFA的表达均显著下调.Western blot检测显示,健脾养正消癥方大、小剂量组能上调RECK蛋白的表达,下调MMP-9、MMP-14的表达,并抑制p-STAT3表达.结论:健脾养正消瘕方对胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤的生长有显著的抑制作用,其作用机制可能与该方调节胃癌组织中侵袭转移的相关基因、蛋白有关.
关键词： 健脾养正消癥方 胃癌MGC-803细胞 皮下移植瘤 作用机制 -
健脾养正消癥方对裸鼠胃癌皮下移植瘤细胞凋亡的影响及自噬机制的实验研究
目的 观察健脾养正消癥方对人胃癌MGC-803细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤抑瘤率的影响及可能的分子机制.方法 取胃癌MGC-803细胞接种于裸鼠皮下,制备裸鼠移植性胃癌模型.32只BALB/c裸鼠按随机数字表法分为阴性对照组、阳性对照组和健脾养正消瘕方高、低剂量组,每组8只.阴性对照组给予生理盐水灌胃,阳性对照组给予5-氟尿嘧啶(5-Fu,2.5 mg/kg)灌胃,健脾养正消瘕方高、低剂量组分别以85、43 g/kg灌胃,每天1次,连续10天.观察健脾养正消瘕方对裸鼠皮下移植瘤抑瘤率的影响;采用RT-PCR法观察该复方对移植瘤中Bax、Bcl-2、Fas、Cyclin D1、Cyclin D2和Cyclin D3基因表达的影响;采用Western Blot法观察该复方对移植瘤中procaspase-3、procaspase-8和procaspase-9、cleaved-PARP、Beclin-1和LC3B蛋白表达的影响.结果 (1)与阴性对照组比较,阳性对照组和健脾养正消癥方高、低剂量组瘤重明显减轻(P＜0.05),健脾养正消瘕方高、低剂量组瘤重均高于阳性对照组(P＜0.05).(2) RT-PCR显示:与阴性对照组比较,阳性对照组和健脾养正消瘕方高、低剂量组Bax表达上调,Bcl-2、Cyclin D1、Cyclin D2和Cyclin D3表达下调(均P＜0.05),阳性对照组及健脾养正消瘕方高剂量组Fas表达上调(P＜0.05);与阳性对照组比较,健脾养正消癥方高、低剂量组Fas、Bax表达均下调,Bcl-2、Cyclin D2和Cyclin D3表达上调(均P＜0.05),健脾养正消瘕方高剂量组Cyclin D1下调,低剂量组Cyclin D1上调(均P＜0.05).(3) Western blot显示:与阴性对照组比较,健脾养正消癥方高、低剂量组procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9蛋白表达下调,cleaved-PARP、Beclin-1、LC3BⅡ蛋白表达上调(均P＜0.05);阳性对照组procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9和LC3BⅡ蛋白表达下调,cleaved-PARP、Beclin-1和LC3B Ⅰ蛋白表达上调(均P＜0.05).结论 健脾养正消瘕方对胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤有显著的抑制作用,其作用可能与其激活凋亡、自噬相关因子有关.
关键词： 健脾养正消癥方 胃癌MGC-803细胞 皮下移植瘤 凋亡 自噬 -
异紫堇碱抑制裸鼠人宫颈癌Siha细胞移植瘤的生长
目的 研究异紫堇碱(ICD)对裸鼠人宫颈癌Siha细胞移植瘤的影响,探讨异紫堇碱抑制宫颈癌发生发展的机制.方法 将人宫颈癌Siha细胞接种于BALB/c(nu/nu)裸鼠皮下建立动物模型,待移植瘤平均直径≥0.5 cm时,随机分为对照组及腹腔注射不同剂量异紫堇碱干预组.4周后取出瘤体组织,用HE染色法观察瘤体组织病理形态学,用免疫组化染色及Western blot方法观察负荷瘤组织中的蛋白表达.结果 经异紫堇碱干预后的宫颈癌Siha细胞裸鼠负荷瘤体积减小(P<0.05);细胞形态可由干细胞样向上皮样细胞转化;上皮细胞分化成熟标记E-cadherin表达明显升高,而HPV16E6蛋白和间叶组织标志物vimentin的表达下降.结论 异紫堇碱可能通过抑制携带HPV亚型的宫颈癌Siha细胞中E6蛋白的表达及EMT相关信号通路来抑制宫颈癌的发生发展.
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应用MEC-1与HG3细胞株建立慢性淋巴细胞白血病BALB/c裸鼠皮下移植瘤的模型
目的:通过对免疫缺陷鼠(BALB/c)不同部位、不同密度接种人慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞,探索裸鼠皮下移植瘤模型建立的条件.方法:通过慢病毒系统建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人CLL细胞(MEC-1-GFP与HG3-GFP细胞).首先将MEC-1-GFP细胞(5×107/ml)分别接种于裸鼠的前肢腋下、腹部及后肢腋下,观察不同接种部位对CLL细胞成瘤率的影响;其次将同等密度的MEC-1-GFP、HG3-GFP细胞(5×107/ml)分别接种于裸鼠的前肢腋下部位,观察两种细胞的成瘤时间及成瘤率.再次以同样接种方法,将不同密度的MEC-1-GFP与HG3-GFP细胞(1×107/ml与5×107/ml)分别接种于裸鼠的前肢腋下,观察不同接种密度的细胞成瘤时间及成瘤率.观察5周后,通过眼球取血获得外周静脉血,经EDTA抗凝及溶血素处理后,用流式细胞术检测GFP阳性的CLL细胞;同时,将荷瘤鼠处死,剥离肿瘤组织并制备冰冻切片,进行组织病理学检查.结果:成功获得稳定表达标记蛋白GFP的MEC-1与HG3细胞株;接种后裸鼠的前肢腋下、腹部及后肢腋下都形成了皮下移植瘤,且前肢腋下更有利于移植瘤的形成;接种密度为5×107/ml的MEC-1-GFP和HG3-GFP细胞均可形成皮下移植瘤,且5周后的成瘤率均为80％;接种密度分别为1×107/ml与5×107/ml MEC-1-GFP与HG3-GFP细胞均可有效地形成皮下移植瘤.流式细胞术检测显示,2组荷瘤鼠外周血中均未见GFP阳性的MEC和HG3细胞,组织病理检查表明CLL细胞向腹腔转移.结论:利用CLL细胞株MEC-1-GFP和HG3-GFP建立了CLL裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究CLL的发病机制提供了实验工具.
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低频超声联合SonoVue微泡促进裸鼠基因体内转染的可行性
目的 探讨利用低频超声联合SonoVue微泡造影剂促进基因转染人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤的可行性.方法 采用人前列腺癌PC-3细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤后随机分为空白组(仅注射生理盐水)、单纯质粒组(注射生理盐水和质粒混悬液)、低频超声组(注射生理盐水和质粒混悬液后超声辐照)和低频超声+微泡组(注射超声微泡造影剂和质粒混悬液后超声辐照).超声辐照条件:功率3 W/cm2,占空比5∶5,频率80 kHz,辐照10 min.基因转染3天后在激光共聚焦显微镜下观察各组绿色荧光蛋白表达情况,并分析其平均荧光强度;同时行常规病理检查,观察低频超声联合微泡辐照对组织的损伤程度.结果 4组中,仅低频超声+微泡组可见明显绿色荧光,与其他各组差异均有统计学意义(P均＜0.05);空白组、单纯质粒组和低频超声组均未见明显绿色荧光.各组均未见明显组织损伤.结论 SonoVue微泡造影剂在低频超声辐照下能够安全有效地促进pEGFP基因转染进入人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤组织内.
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ADC值在内皮抑素对小鼠结肠癌疗效评价中的应用价值
目的 探讨ADC值在内皮抑素(ES)对小鼠结肠癌皮下移植瘤疗效评价中的应用价值.方法 建立小鼠结肠癌皮下移植瘤模型,1周后筛选成瘤均匀的16只小鼠随机分成ES组和生理盐水(NS)组,分别给予ES 6 mg/(kg·d)和0.9%生理盐水各0.2 ml,14 d后行MMMRI检查,测量肿瘤的表观弥散系数(ADC)值,并与病理特征相对照.结果 b=800 s/mm2时DWI图像质量可,肿瘤显示清晰,结合T2WI像可明确肿瘤位置;NS组与ES组的ADC值分别为(0.87±0.21)×10-3mm/s 和(1.64±0.34)×10-3 mm/s,差异有统计学意义(t=5.412,P<0.001);病理表现与影像学表现一致,ES组肿瘤内部坏死较多.结论 采用DWI图像可以观察肿瘤内部的病理变化,通过测量肿瘤的ADC值可以有效地评价ES的疗效.
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DNA疫苗对小鼠HCV-C皮下移植瘤的防治
目的:从病理组织学方面验证DNA疫苗对小鼠HCV-C皮下移植瘤的预防及治疗作用,为将来的临床应用提供动物实验依据.方法:利用脂质体转染技术将pcDNA HCV-C质粒转染SP2/0细胞并将稳定表达HCV C抗原的SP2/0细胞皮下接种于Balb/c小鼠,成瘤后取小鼠瘤组织,用病理组织学方法验证DNA疫苗对HCV-C皮下移植瘤的预防及治疗作用.结果:肿瘤组织中以T淋巴细胞浸润为主;HCV-C抗原表达主要在SP2/0细胞的细胞质和胞膜上,少数位于胞核中;对照组HCV-C抗原表达明显强于实验组.结论:HCV-C DNA疫苗对HCV的感染有预防和治疗作用.
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奥曲肽对小白鼠肝癌皮下移植瘤的抑制作用及机制研究
有研究表明,奥曲肽不仅能抑制绝大多数具有神经内分泌功能的肿瘤增殖,对普通的实体性肿瘤亦存在抑制作用.亦有人对原发性肝癌进行了研究,认为其对原发肝癌有一定抑制作用[1].但其报道较少见.其抗肿瘤作用机制尚未明确[2].
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人胰腺癌组织块小鼠皮下移植瘤模型的构建及生物学行为的观察
目的 构建来源于人胰腺癌组织块的小鼠皮下移植瘤模型.方法 移植术中获取的人胰腺癌组织块到NOD/SCID小鼠皮下构建移植瘤模型,观察肿瘤生长并进行小鼠体内传代扩增,比较各代移植瘤生长速度,组织HE染色及免疫组化检测Ki67和VEGF表达情况的差异.结果 收集13例胰腺癌组织块标本及6例活检组织标本,其中5例组织块标本移植成功,1例已传至第四代小鼠,4例传至第二代小鼠,随着传代次数的增加,肿瘤生长速度明显加快;HE染色显示移植瘤与其来源的人胰腺癌组织病理形态基本一致;免疫组化染色显示Ki67和VEGF表达增加.结论 通过直接移植人胰腺癌组织块,可成功构建胰腺癌小鼠皮下移植瘤模型,并且移植瘤的变性程度及侵袭性可能随传代增加.
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放射诱导同步放大基因电路调控HSV-TK表达对肺癌移植瘤的抑制作用
目的 构建由放射诱导的一氧化氮(NO)同步放大基因电路,并利用该基因电路调控单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)表达,以研究该基因电路对肺癌细胞体内的治疗作用. 方法 利用分子克隆的方法构建重组治疗载体pfos-iNOS/TK和对照载体pfos-TK/GFP,并采用脂质体介导重组治疗载体和对照载体转染肺癌细胞A549;G418筛选阳性克隆;建立BALB/c裸鼠移植瘤模型,检测接受照射和未接受照射的瘤组织内TK表达情况,分析给予照射和更昔洛韦(GCV)后肿瘤体积的变化. 结果 接受照射的瘤组织内TK表达明显强于未接受照射组,接受照射的转染治疗载体组强于接受照射的转染对照载体组,放射合并GCV可明显抑制转染治疗载体的移植瘤,且抑瘤率明显高于单纯照射、GCV治疗和转染对照载体的对照组. 结论 放射诱导的同步放大基因电路可明显提高体内转染细胞TK的表达,对肺癌移植瘤有显著的抑制作用,明显地提高了HSV-TK/GCV系统对肺癌细胞的敏感性,进一步完善了肿瘤的放射-基因治疗模式.
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MicroRNA-34 a对人鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用及分子机制研究
目的：探讨MicroRNA-34a(miR-34a）对鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用及其可能的分子机制。方法：体外培养人鼻咽癌CNE-2细胞系，利用miR-34a重组质粒及Scrambled miRNA重组质粒分别构建miR-34a及阴性对照miRNA稳定转染细胞株，qRT-PCR检测细胞内miR-34a表达。选取6周龄雄性BLAB／c裸鼠15只，随机分为3组：miR-34a组(5只），Scrambled miRNA组(5只）及空白对照组(5只）。于裸鼠背部近右后肢皮下注射重组CNE-2细胞悬液，建立移植瘤模型，每7 d测定实验组与对照组肿瘤体积变化，饲养35 d后处死，完整取出肿瘤，测定肿瘤重量及终体积。提取肿瘤组织RNA及蛋白，采用qRT-PCR检测肿瘤组织中miR-34a的表达；分别采用qRT-PCR及免疫组化法检测细胞周期调控基因CDK6及抗凋亡基因Bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结果：miR-34a稳定转染CNE-2细胞后可显著提高细胞内miR-34a表达量( P＜0.05）。15只裸鼠均成功构建皮下移植瘤模型，饲养21 d后，与Scrambled miRNA组及空白对照组相比，miR-34a组肿瘤体积显著减小(P＜0.05）。饲养35 d后，miR-34a组、Scrambled miRNA组及空白对照组肿瘤平均重量分别为(0.81±0.13）g、(1.47±0.21）g、(1.58±0.37）g，肿瘤平均终体积分别为(351.37±98.19）mm3、(798.75±91.04）mm3、(849.62±101.32）mm3，miR-34a组肿瘤平均重量及肿瘤平均终体积均显著小于其余两组(P＜0.05）。 miR-34a组中miR-34a的表达量显著高于其余两组(P＜0.05）；miR-34a组中CDK6及Bcl-2 mRNA及蛋白表达量显著低于其余两组( P＜0.05）。结论：miR-34a可能通过下调CNE-2细胞内CDK6及Bcl-2的表达水平从而抑制CNE-2细胞裸鼠皮下移植瘤的生长，发挥其抗肿瘤作用。
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菱角口服液对人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其VEGF表达的影响
目的:探讨菱角口服液的肿瘤抑制作用和作用机制.方法:通过建立动物肿瘤模型,运用不同剂量药物予以实验治疗,计算抑瘤率,应用免疫组化方法检测各组肿瘤组织中VEGF的表达,并采用图像分析技术检测VEGF阳性表达的平均光密度.结果:通过镜下病理形态学观察,各组均出现类瘤样改变.菱角口服液具有明显的抑制肿瘤生长作用,高剂量组、低剂量组抑瘤率分别为19.4％、11.8％,菱角口服液高剂量组与生理盐水组比较有统计学意义(P＜0.05);菱角口服液高剂量组显著降低VEGF阳性表达的平均光密度(P＜0.05).结论:菱角口服液对人胃癌裸鼠皮下移植瘤的生长具有一定的抑制作用,降低VEGF表达可能是其防治胃癌的主要作用机理之一.
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微囊化人胰腺癌细胞建立裸鼠胰腺癌模型研究
目的研究微囊化人胰腺癌细胞建立裸鼠胰腺癌模型效果,以期建立稳定的更为理想的胰腺癌动物模型.方法 分别以人胰腺癌细胞悬液和微囊化人胰腺癌细胞悬液建立皮下移植瘤模型,定期监测皮下肿瘤大小,绘制生长曲线并进行比较.分别以人胰腺癌细胞悬液和微囊化人胰腺癌细胞建立原位移植瘤模型,分别于模型建立后第4周和第8周进行正电子发射计算机断层显像检查及剖腹探查,以评估肿瘤生长及转移情况,标本作电镜及病理检查.结果 细胞悬液组和微囊悬液组皮下移植瘤模型在成瘤体积和成瘤率方面无明显差异.微囊化肿瘤细胞法建立原位移植瘤模型较肿瘤细胞悬液法在成瘤质量及出现转移灶等方面有较强的优势.两组所形成的原位移植瘤在病理学方面无明显差异.结论 微囊化肿瘤细胞法是一种可靠的有发展前景的建立胰腺癌动物模型的方法.
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胃肠安对人胃癌MGC-803裸鼠皮下移植瘤中乏氧相关蛋白表达的影响
目的:观察MGC-803人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型经胃肠安干预后对其相关乏氧蛋白表达的影响,探讨胃肠安对MGC-803人胃癌转移的作用机制.方法:选用BALB/C裸鼠,以人胃癌MGC-803细胞在其皮下注射建立移植瘤模型,随机分为3组并给予相应干预,分别为胃肠安组(胃肠安煎剂0.3 ml灌胃,1次/d)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)组(5-Fu 1 mg腹腔注射,1次/周)、模型组(0.9％NaCl溶液0.3 ml灌胃,1次/d),干预时间均为8周.用免疫组化法检测乏氧相关蛋白包括乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、赖氨酰氧化酶(LOX)、类赖氨酰氧化酶2(LOXL2)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达.结果:胃肠安组裸鼠胃癌组织乏氧相关蛋白HIF-1α、TGF-β1、LOX 、LOXL2、CTGF表达均较模型组明显降低,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:胃肠安能明显降低人胃癌M GC-803裸鼠皮下移植瘤中HIF-1α、TGF-β1、LOX、LOXL2、CTGF的表达,提示胃肠安可能通过下调乏氧相关蛋白的表达而起到抑制肿瘤转移的的作用.
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肠胃清对裸鼠结肠癌皮下移植瘤化疗的减毒作用
目的:研究肠胃清对裸鼠结肠癌皮下移植瘤奥沙利铂(L-OHP)化疗的减毒作用.方法:构建裸鼠人结肠癌细胞HCT116皮下移植瘤模型.造模后裸鼠分为空白组、L-OHP组、肠胃清组、肠胃清联合L-OHP组(联合组),每组10只,分别用0.9％ NaCl溶液、L-OHP、肠胃清、肠胃清联合L-OHP干预30 d.观察各组裸鼠体质量的变化,检测裸鼠脾脏质量,计算脾脏指数;检测裸鼠肝功能[天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)],肾功能[尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)],心功能[肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)]的水平.结果:L-OHP组裸鼠体质量减轻18.1％,较空白组明显减轻(P＜0.01);与L-OHP组比较,肠胃清组及联合组裸鼠体质量下降减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).各组血清AST、ALT、SCr、BUN水平差异无统计学意义(P＞0.05);L-OHP组CK、LDH水平较空白组明显升高(P＜0.05,P＜0.01);肠胃清组及联合组CK、LDH水平较L-OHP组明显降低,差异有统计学意义(P＜O.05,P＜0.01).L-OHP组脾脏指数较空白组明显降低(P＜0.01);与L-OHP组比较,肠胃清组及联合组裸鼠脾脏指数明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:L-OHP对裸鼠副作用较大,肠胃清联合L-OHP后可减轻L-OHP化疗的毒副作用.
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胃肠安对人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤生长及细胞凋亡的作用
目的:观察胃肠安对人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤生长、凋亡及相关蛋白表达的影响.方法:建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,根据瘤体体积大小随机分为对照组、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)组及胃肠安组3组,每组10只.对照组予无菌水0.3 ml灌胃,1次/d;胃肠安组予胃肠安煎剂0.75 mg/d灌胃,5-Fu组予5-Fu 1 mg腹腔注射,1次/周.干预8周后观察各组移植瘤瘤体生长情况;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡;免疫组化法检测移植瘤细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、8、9及多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)表达.结果:经过治疗,胃肠安组MGC-803胃癌移植瘤体积显著缩小、质量减轻,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).TUNEL及免疫组化法检测结果显示胃肠安组可以促移植瘤细胞凋亡(P＜0.01),上调Caspase-3、8和9蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01),并可促进PARP蛋白剪辑,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),与5-Fu组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:胃肠安具有抑制MGC-803移植瘤生长的作用,可能是通过上调Caspase-3、8、9的表达及促进PARP剪辑,进而促进MGC-803胃癌细胞发生凋亡而起作用.
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肠胃清对人大肠癌细胞HCT8/V皮下移植瘤长春新碱耐药的逆转作用
目的:观察中药复方肠胃清口服液逆转大肠癌长春新碱耐药的作用,初步探讨其逆转耐药的作用机制.方法:建立人大肠癌耐长春新碱(VCR)细胞株HCT8/V裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为正常对照组、VCR组、肠胃清组、肠胃清高剂量+VCR组、肠胃清低剂量+VCR组.治疗结束后计算瘤体抑制率;高效液相色谱法检测瘤内VCR药物浓度;流式细胞技术检测瘤内细胞周期和凋亡改变.结果:肠胃清高低剂量联合VCR的瘤体抑制率为47.47%、69.62%,明显高于单用肠胃清或VCR组;对照组VCR的含量为0.1745μg/g瘤重,而肠胃清高剂量联合VCR组的浓度为12.2236μg/g瘤重,是对照组的70.05倍;与对照组比较,药物干预后,G1期细胞明显增加,S期细胞明显低于对照组,细胞凋亡率明显增加,以肠胃清联合VCR组作用强.结论:肠胃清逆转大肠癌移植瘤对VCR的耐药与通过增加瘤体内药物浓度、诱导细胞凋亡有关.
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SurvivinshRNA-APC双基因共表达慢病毒载体对HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长情况的影响
目的 在转录后水平进行干预的RNA干扰技术在多基因治疗中的应用越来越广泛.文中旨在构建人HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过联合RNAi和外源性补充的方式研究Survivin shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体对结肠癌裸鼠移植瘤生长情况的影响. 方法 选取35只裸鼠随机数字表法分为5组,即Survivin shRNA-APC双基因组、Survivin shRNA组、APC组、空载组和空白组,每组7只;将已经构建好的处于对数生长期的双基因共表达Survivin shRNA-APC、Survivin shRNA及APC稳转株,空载稳转株,HT-29结肠癌细胞(均为2×106/mL)分别注射至5组裸鼠左前腋下成瘤,构建人HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型;通过测量瘤体体积、重量,检测移植瘤生长抑制率,Real time PCR检测移植瘤组织survivin mRNA的表达,免疫组化检测Survivin蛋白的表达,TUNEL检测凋亡情况. 结果 与空白组比较,APC组、Survivin shRNA组、双基因组移植瘤平均体积、平均重量均减少(P<0.05);与空载组比较,APC组、Survivin shRNA组、双基因组平均体积、平均移植瘤重量亦减少(P<0.05),而体积抑制率、瘤重抑制率均增加(P<0.05);与双基因组比较,APC组、Survivin shRNA组移植瘤平均体积、平均重量均增加(P<0.05).与空白组和空载组相比,APC组、Survivin shRNA组、Survivin shRNA-APC双基因组移植瘤组织Survivin mRNA和蛋白表达相对含量明显降低(P<0.05);与Survivin shRNA组、APC组相比,双基因组移植瘤组织Survivin mRNA和蛋白表达相对含量亦明显降低(P<0.05).与空白组裸鼠移植瘤组织结肠癌细胞凋亡指数[(9.89±0.31)%]比较,APC组、Survivin shRNA组、双基因组[(31.19±1.79)%、(33.64±2.03)%、(56.72±3.17)%]明显升高(P<0.05),而APC组、Survivin shRNA组、双基因组亦较空载组[(10.06±0.43)%]明显升高(P<0.05);与Survivin shRNA组、APC组相比,Survivin shRNA-APC双基因组移植瘤组织癌细胞凋亡指数明显升高(P<0.05). 结论 Survivin shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体能够使Survivin基因的表达水平降低,促进结肠癌细胞的凋亡,抑制移植瘤的生长,且优于单个基因的影响.
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脱落酸作用后人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用的实验研究
[目的]观察脱落酸(ABA)对移植瘤成瘤能力的影响.[方法]分为对照组和ABA组、环六亚甲基二乙酰胺(HMBA)组ABA+HMBA三种不同浓度处理组,采用免疫组化方法研究所形成肿瘤中细胞增殖及恶性生长的变化,并检测脏器有无转移.[结果]HE常规病理切片观察处理组可见组织中癌细胞密度减少,细胞皱缩,胞浆红染,瘤组织分化渐成熟.与对照组比较,处理组移植瘤瘤组织块体积变小、重量明显减轻,有统计学意义(P＜0.05).对照组外周血甲胎蛋白(AFP)明显减少(P＜0.05),细胞核中的Ki-67的表达均明显降低(P＜0.05).全部裸鼠均未发现体表淋巴结及腹腔淋巴结转移,亦未发现转移灶的存在.[结论]ABA对人原发性肝癌裸鼠移植瘤成瘤性有抑制作用,使肿瘤细胞在体内增殖活性下降同时肿瘤细胞形态趋于正常,是一种作用效果良好肿瘤分化诱导剂.
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喷他脒对卵巢癌Skov-3细胞及其裸鼠移植瘤PRL-3的抑制作用
目的 探讨喷他脒对卵巢癌Skov-3细胞及其裸鼠移植瘤PRL-3的抑制作用.方法 (1)M TT法检测不同浓度喷他脒对Skov-3细胞的生长抑制作用;(2)RT-PCR法检测不同浓度喷他脒处理后的Skov-3细胞PRL-3的表达;(3)建立人卵巢癌Skov-3 细胞裸鼠转移瘤模型,按喷他脒给药剂量分4组,记录裸鼠皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线.采用RT-PCR方法检测裸鼠移植肿瘤的PRL-3表达情况.结果 喷他脒对卵巢癌Skov-3细胞体外生长有抑制作用,呈浓度依赖性(P＜0.05);喷他脒中高剂量组予5次给药后裸鼠移植瘤生长速度均与对照组有差异(P＜0.05);中、高剂量喷他脒抑制人Skov-3卵巢癌细胞裸鼠皮下移植瘤的PRL-3表达,且随剂量增加而抑制作用更明显(P＜0.05).结论 喷他脒对卵巢癌Skov-3细胞体外生长及裸鼠Skov-3皮下移植瘤均有有抑制作用;喷他脒可抑制Skov-3卵巢癌细胞及裸鼠Skov-3皮下移植瘤PRL-3的表达.
