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人参多糖介导Wnt/β-catenin信号转导诱导人鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡
目的:观察人参多糖(ginseng polysaccharide,GPS)对人鼻咽癌细胞CNE-2的增殖和凋亡的影响以及可能的机制探讨.方法:CCK8法观察人参多糖对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响.取对数生长期的CNE-2细胞,用不同质量浓度人参多糖(GPS)0,0.1,0.2,0.3,0.4g·L-1分别作用48 h后,流式细胞术检测其对CNE-2细胞凋亡的诱导作用;Hoechst-33258染色和电镜观察细胞的形态改变.Real-time PCR检测细胞β-catenin mRNA的表达.采用免疫荧光染色检测细胞中β-catenin,TCF4蛋白定位及表达量的变化.Western blot检测细胞中β-catenin,Bcl-2,Bax蛋白的变化.结果:CCK8法测得人参多糖能明显抑制CNE-2细胞的增殖,其抑制作用呈剂量、时间依赖性,GPS处理细胞48 h的IC50为0.39 g· L-1;质量浓度分别为0.1,0.2,0.3,0.4g·L-1的GPS作用人鼻咽癌CNE-2细胞48 h后细胞凋亡率分别为(5.69 ±0.29)％,(10.3±0.63)％,(15.4±0.74)％,(35.7±1.86)％,与对照组(2.08 ±0.11)％比较均有显著性差异(P＜0.05);Hoechst-33258染色结果显示细胞凋亡特征.电镜下可见0.4 g·L-1GPS诱导48 h后可使CNE-2细胞出现凋亡小体.Real-time PCR显示β-cateninmRNA表达明显降低.激光共聚焦结果显示人参多糖作用48 h后-catenin和TCF4在胞核中表达明显减少,β-catenin表达区域由胞核向胞膜转移.Western blot结果显示经浓度梯度增加的人参多糖作用CNE-2细胞48 h后,β-catenin和抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱;而促凋亡蛋白Bax表达上调(P＜0.05).结论:人参多糖可明显抑制CNE-2细胞增殖促进细胞凋亡.Wnt/β-catenin信号通路的受阻可能是GPS诱导人鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的一个重要机制.
关键词： 人参多糖 CNE-2细胞 细胞增殖 凋亡 Wnt/β-catenin -
含EBV-LMP2基因重组腺病毒修饰的树突状细胞疫苗体内外特异性抗瘤作用的研究
鼻咽癌(NPC)在东南亚地区,尤其在我国南方地区发病率高达40/10万～60/10万.Epstein-Barr virus(EBV)在鼻咽癌的病因学中有着十分重要的作用,在肿瘤细胞中该病毒的存在为以CTL为基础的免疫治疗提供了一个潜在靶位.
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ApoG2联合放疗对鼻咽癌 CNE-2细胞自噬与凋亡的影响研究
目的：探讨ApoG2联合放射治疗对鼻咽癌（NPC）的CNE-2细胞自噬与凋亡的影响。方法将人NPC CNE-2细胞株分成空白对照组（仅加培养液，不加细胞）、放射治疗组、ApoG2组、联合组（放射＋ApoG2），采用CCK-8法测定ApoG2＋放射治疗对细胞增敏的作用，Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态的变化，吖啶橙染色观察细胞自噬形态变化，检测细胞凋亡率的变化；Western bolt检测Beclin1、Bcl-2蛋白的表达情况变化。结果不同的放射剂量组间细胞增殖抑制率比较具有显著性差异（ P ＜0?．01），随着放射剂量的增加，鼻咽癌CNE-2细胞的抑制率也随之上升；不同的ApoG2药物浓度组间细胞增殖抑制率比较差异也具有显著性意义（ P ＜0．01），随着药物浓度的增加，鼻烟癌CNE-2细胞的抑制率也上升。4组CNE-2细胞的凋亡率组间比较具有显著性差异，联合组凋亡率显著高于其他3组（ F ＝140．2， P ＜0．01）。4组的Bcl-2、Beclin1的蛋白表达量组间比较差异具有统计学意义（Bel-2：F ＝71．24， P ＜0．01；Beclinl：F ＝107．53， P ＜0．01），其中联合组的Bcl-2蛋白表达量低，Beclin1的蛋白表达量高。结论ApoG2联合放疗能够通过诱导鼻咽癌CNE-2细胞的自噬与凋亡，从而抑制CNE-2细胞的增殖。
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MicroRNA-34 a对人鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用及分子机制研究
目的：探讨MicroRNA-34a(miR-34a）对鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用及其可能的分子机制。方法：体外培养人鼻咽癌CNE-2细胞系，利用miR-34a重组质粒及Scrambled miRNA重组质粒分别构建miR-34a及阴性对照miRNA稳定转染细胞株，qRT-PCR检测细胞内miR-34a表达。选取6周龄雄性BLAB／c裸鼠15只，随机分为3组：miR-34a组(5只），Scrambled miRNA组(5只）及空白对照组(5只）。于裸鼠背部近右后肢皮下注射重组CNE-2细胞悬液，建立移植瘤模型，每7 d测定实验组与对照组肿瘤体积变化，饲养35 d后处死，完整取出肿瘤，测定肿瘤重量及终体积。提取肿瘤组织RNA及蛋白，采用qRT-PCR检测肿瘤组织中miR-34a的表达；分别采用qRT-PCR及免疫组化法检测细胞周期调控基因CDK6及抗凋亡基因Bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结果：miR-34a稳定转染CNE-2细胞后可显著提高细胞内miR-34a表达量( P＜0.05）。15只裸鼠均成功构建皮下移植瘤模型，饲养21 d后，与Scrambled miRNA组及空白对照组相比，miR-34a组肿瘤体积显著减小(P＜0.05）。饲养35 d后，miR-34a组、Scrambled miRNA组及空白对照组肿瘤平均重量分别为(0.81±0.13）g、(1.47±0.21）g、(1.58±0.37）g，肿瘤平均终体积分别为(351.37±98.19）mm3、(798.75±91.04）mm3、(849.62±101.32）mm3，miR-34a组肿瘤平均重量及肿瘤平均终体积均显著小于其余两组(P＜0.05）。 miR-34a组中miR-34a的表达量显著高于其余两组(P＜0.05）；miR-34a组中CDK6及Bcl-2 mRNA及蛋白表达量显著低于其余两组( P＜0.05）。结论：miR-34a可能通过下调CNE-2细胞内CDK6及Bcl-2的表达水平从而抑制CNE-2细胞裸鼠皮下移植瘤的生长，发挥其抗肿瘤作用。
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人参多糖对鼻咽癌细胞CNE-2裸鼠移植瘤的放疗增敏作用及其可能的机制
目的 探讨人参多糖(ginseng polysaccharide,GPS)对人鼻咽癌细胞CNE-2裸鼠移植瘤的放疗增敏作用及可能的机制.方法 取对数生长期的鼻咽癌CNE-2细胞,经裸鼠背部皮下注射,1×107个／(0.2ml·只),待瘤体大径为4 ～6mm时,取20只模型裸鼠,随机分为4组:对照组(经腹腔注射生理盐水)、放疗组(每次每只裸鼠经肿瘤局部给予5GyX射线照射,每3d照射1次,共3次)、GPS组(经腹腔注射GPS,30 mg/kg,每次0.3ml,每72 h给药1次,共5次)和GPS联合放疗组(经腹腔注射GPS,30 mg／kg,每次0.3ml,每72 h给药1次,共5次;末次给药48 h后开始放疗,每只每次经肿瘤局部给予5 GyX射线照射,每3d照射1次,共3次).开始给药3周后处死裸鼠,取瘤体,称重,测量肿瘤的长、短径,计算肿瘤体积及抑制率;HE染色观察移植瘤组织病理学改变;Real-time PCR检测移植瘤组织中β-catenin基因mRNA的转录水平;免疫组织化学和Westem blot法检测移植瘤组织中β-catenin蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,GPS组、放疗组和GPS联合放疗组的肿瘤体积及瘤重均明显下降(P＜0.05),抑制率分别为29.87％、52.60％和74.68％;镜下观察可见,GPS联合放疗组细胞凋亡明显,多数细胞核完全溶解,细胞结构消失,坏死的肿瘤组织呈现均质红染表现;GPS联合放疗组移植瘤中β-catenin mRNA及蛋白的表达水平均显著下降(P均＜0.05).结论 GPS可抑制CNE-2细胞在裸鼠体内的生长,且对鼻咽癌的放疗具有增敏作用,其机制可能与抑制β-catenin的表达有关.
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沙利度胺对人鼻咽癌细胞株体外放射敏感性的影响
[目的]探讨沙利度胺对人鼻咽癌细胞株细胞周期分布及体外放射敏感性的影响.[方法]应用MTT法检测不同时间点、不同浓度沙利度胺对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞增殖的抑制率.采用沙利度胺及放射线单独或联合作用于CNE-2细胞.用克隆形成法经单击多靶模型拟合细胞存活曲线,获得不同处理条件下的放射增敏比;流式细胞技术分析沙利度胺对CNE-2细胞周期分布的影响.[结果]沙利度胺可抑制CNE-2细胞的增殖,且呈浓度依赖性;20mg/L和40m/L沙利度胺作用CNE-2细胞24h后均见到放射增敏作用,SER分别为1.29(0.941/0.728)和1.57(0.941/0.598);流式细胞仪分析表明沙利度胺作用24h,随着沙利度胺浓度的增加,CNE-2细胞中处于G0/G.期的细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,但变化差异无显著性.[结论]沙利度胺能够抑制CNE-2细胞的增殖,并具有一定的放射增敏作用,为临床放疗和沙利度胺的联合应用提供了实验依据.
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2 Gy多分割不同顺序照射对鼻咽癌CNE-2细胞生物效应的研究
目的 探讨总剂量为2 Gy时部分分割和顺序照射对鼻咽癌CNE-2细胞的杀伤效应的差异.方法 采用克隆形成法和四唑盐(MTT)比色法,检测2 Gy剂量照射后鼻咽癌CNE-2细胞的细胞生存率和具有代谢活性细胞比例.结果 在多个等分割照射中,较小分割(≤0.5 Gy)多次照射的细胞存活率均明显低于单次照射组(2 Gy),差异有统计学意义(P＜0.05),而较大分割(1 Gy)照射与单次照射组细胞生存率差异无统计学意义;在2个部分分割和3个部分分割照射中,随着S分割剂量的增大,各S-L和S-S-L照射组细胞生存率呈逐渐下降趋势,至S分割为0.4 Gy(S-L)或者0.5 Gy(S-S-L)组时细胞生存率低;大部分S-L照射组细胞生存率明显低于L-S照射组,大部分S-S-L照射组细胞生存率和相对细胞生存率明显低于L-S-S照射组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 总剂量为2 Gy照射时,分割剂量大小和照射顺序是影响鼻咽癌CNE-2细胞放射治疗生物效应的重要因素.
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miR-106b在鼻咽癌组织中表达及对鼻咽癌CNE-2细胞生物学特性的影响
目的 探讨miR-106b在鼻咽癌组织中的表达及其对鼻咽癌CNE-2细胞生物学特性的影响.方法 选取68例份初治鼻咽癌患者的手术切除标本和45例份鼻咽炎患者的鼻咽部活检组织标本,采用实时荧光定量PCR法检测miR-106b表达,分析miR-106b表达与鼻咽癌患者临床病理参数的关系.取体外培养的对数生长期人鼻咽癌细胞株CNE-2分为四组(1×10.6个/组).miR-106b模拟物组、miR-106b抑制物组分别转染miR-106b模拟物及miR-106b抑制物序列,阴性对照组转染阴性对照序列,空白对照组不处理;采用实时荧光定量PCR技术检测各组miR-106b表达,MTT法检测各组细胞增殖情况(以吸光度值表示),流式细胞仪检测各组细胞周期,Transwell试验检测各组细胞迁移和侵袭能力.结果 鼻咽癌及鼻咽炎组织miR-106b相对表达量分别为1.57±0.15、1.14±0.12,二者比较P<0.05;miR-106b相对表达量与鼻咽癌患者淋巴结转移、侵犯颈动脉鞘和侵犯颅底有关(P均<0.05).各组miR-106b相对表达量:miR-106b模拟物组高于miR-106b抑制物组、阴性对照组和空白对照组,miR-106b抑制物组低于阴性对照组和空白对照组,P均<0.05;各组细胞增殖情况:miR-106b模拟物组细胞接种后24、48、72和96 h时吸光度值均高于miR-106b抑制物组、阴性对照组和空白对照组,而miR-106b抑制物组低于阴性对照组和空白对照组,P均<0.05;各组细胞周期:miR-106b模拟物组S期细胞比例高于miR-106b抑制物组、阴性对照组和空白对照组,而miR-106b抑制物组细胞S期比例低于阴性对照组和空白对照组,P均<0.05;各组细胞迁移和侵袭情况:miR-106b模拟物组迁移和侵袭细胞数均高于miR-106b抑制物组、阴性对照组和空白对照组,且miR-106b抑制物组均低于阴性对照组和空白对照组,P均<0.05.结论 miR-106b在鼻咽癌组织中呈高表达;miR-106b过表达可促进鼻咽癌CNE-2细胞增殖、迁移和侵袭能力.
关键词： 鼻咽癌 微小RNA-106b CNE-2细胞 细胞增殖 细胞迁移 -
pcDNA3.1(+)-SAA真核表达载体构建、转染及其对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响
目的 构建pcDNA3.1(+)-血清淀粉样蛋白A(SAA)真核表达载体,观察其在人鼻咽癌细胞CNE-2中的表达及对CNE-2增殖的影响.方法 以CNE-2细胞的cDNA为模板,通过PCR扩增得到SAA片段,经酶切、纯化后与pcDNA3.1(+)连接;重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染法转染人鼻咽癌细胞CNE-2,用Western blot法检测转染前后该细胞中SAA蛋白的表达,并用MTT法检测转染重组质粒后的细胞增殖情况.结果 pcDNA3.1(+)-SAA经酶切、测序鉴定完全正确,真核表达载体构建成功;转染pcDNA3.1(+)-SAA真核表达载体后CNE-2细胞中SAA蛋白表达水平明显高增高;转染pcDNA3.1(+)-SAA后CNE-2细胞增殖速度加快.结论 成功构建pcDNA3.1(+)-SAA真核表达载体,其能稳定表达于人鼻咽癌细胞CNE-2并促进细胞增殖;此为进一步研究SAA的生物学功能及鼻咽癌的新型治疗方法奠定了基础.
关键词： pcDNA3.1(+)-血清淀粉样蛋白A CNE-2细胞 转染 增殖 -
EGCG对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡的影响及机制
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)治疗鼻咽癌的作用机制.方法 体外培养鼻咽癌CNE-2细胞并以不同质量浓度EGCG处理,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测细胞中锰超氧化物歧化酶(MnSOD)表达变化.结果 EGCG处理后,CNE-2细胞增殖明显受到抑制,且呈时间和剂量依赖性;CNE-2细胞凋亡率显著升高,且呈量效关系;MnSOD表达明显上调,且随EGCG作用时间延长有升高趋势.结论 EGCG能抑制CNE-2细胞增殖、促进其凋亡,可能机制为上调MnSOD表达;此为EGCG在鼻咽癌防治中的应用提供了理论依据.
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山奈酚对CNE-2细胞周期及CyclinB1、Cdk1mRNA表达的影响
目的:观察山奈酚对鼻咽癌CNE-2细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1)表达的影响.方法:分别用0、20、40、60、80和100 μmol/L的山奈酚处理CNE-2细胞.处理24、48和72 h后,应用MTT法测定CNE-2细胞活力;处理24和48 h后用流式细胞术检测细胞周期;处理24 h后用RT-PCR技术检测细胞CyclinB1及Cdk1 mRNA的表达水平.结果:随山奈酚作用剂量的增加和作用时间的延长,CNE-2细胞活力逐渐降低(F浓度=385.194,F时间=237.324,F浓度×时间=13.757,P<0.001,细胞被阻滞于G2/M期(P<0.05);CNE-2细胞中CyclinB1和Cdk1 mRNA的表达量随山奈酚作用浓度的增加而逐渐降低(F=95.682、154.871,P<0.001).结论:山奈酚可能通过下调CNE-2细胞CyclinB1和Cdk1 mRNA的表达水平,诱导G2/M期阻滞,抑制其增殖.
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建立稳定表达融合自杀基因CD/UPRT.UL49的CNE-2鼻咽癌细胞株
目的:建立稳定表达融合自杀基因CD/UPRT.UL49的CNE-2鼻咽癌细胞株.方法:构建表达载体pcDNA3.1(-)E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49,经脂质体法转染CNE-2细胞,G418和前体药物5-氟胞嘧啶筛选出阳性克隆细胞并扩大培养.抽提阳性克隆细胞总蛋白质,Western-blotting检测目的基因表达.结果:融合自杀基因CD/UPRT.UL49在CNE2转染细胞内稳定表达.结论:本组通过脂质体转染技术,成功地建立了稳定表达融合CD/UPRT.UL49基因的CNE 2细胞株.
关键词： 自杀基因 CD/UPRT.UL49 CNE-2细胞 鼻咽肿瘤 -
三七姜挥发油抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖的作用
目的:体外培养法研究三七姜挥发油对鼻咽癌CNE-2细胞株生长的抑制作用和作用机制.方法:运用MTT法、Hoechst33258荧光染色法、流式细胞仪和倒置荧光显微镜进行研究.结果:三七姜挥发油对鼻咽癌CNE-2细胞增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性.作用24 h后CNE-2细胞的IC50为304.8 μg·ml-1;Hoechst33258荧光染色法观察细胞核有明显的凋亡形态变化;FITC-Annexin V/PI双染法发现三七姜挥发油能诱导CNE-2细胞凋亡,且随着剂量的增加作用增强;PI染色法说明三七姜挥发油将CNE-2细胞阻滞于G1期.结论:三七姜挥发油能有效抑制CNE-2细胞的生长,其抗肿瘤机制为诱导肿瘤细胞凋亡.
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眼镜蛇毒神经生长因子诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡作用的研究
目的:研究广西眼镜蛇毒神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡.方法:应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法(ATP-TCA法)测定不同质量浓度(0.0125,0.025,0.05,0.1,0.2 g·L)NGF处理24,48,72,96 h对人鼻咽癌CNE-2生长的抑制率;Hoechst 33342荧光染色观察凋亡细胞的形态;琼脂糖凝胶电泳测定DNA断裂状况;流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率.结果:不同浓度的NGF能抑制CNE-2细胞增殖,并呈浓度-时间效应关系,作用24,48,72,96 h的半数抑制浓度(IC50)分别为0.213,0.095,0.048,0.033 g·L-1;经NGF(0.1 g·L-1)处理细胞48 h后,荧光染色呈现典型的细胞凋亡形态学特征;DNA凝胶电泳可见凋亡细胞特有的DNA片段;0.05.0.1,0.2 g·L-1NGF作用48 h后,CNE-2细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率分别为(28.2±2.0)%、(39.9±1.9)%、(50.3±1.3)%.结论:NGF通过诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡而产生抗鼻咽癌活性.
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细胞因子CCL25对鼻咽癌CNE-2细胞迁移的影响
目的:研究CCL25是否影响鼻咽癌CNE-2细胞的迁移.方法:采用Transwell实验,上室中加入CNE-2细胞,下室中加入不同浓度的CCL25,观察其对CNE-2向下室迁移的影响.另外同时在下室中加入anti-CCR9,再观察CNE-2向下室的迁移情况.结果:CCL25具有趋化CNE-2细胞的作用,同空白对照组相比,50 ng/ml的CCL25能明显增强CNE-2细胞的迁移率(P＜0.01).而1μg/ml的anti-CCR9能逆转CCL25对CNE-2细胞的促迁移作用(P＜0.05).结论:CCL25具有趋化CNE-2细胞,促进CNE-2细胞迁移的作用.Anti-CCR9能阻断CCL25对CNE-2细胞的促迁移作用.
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细胞因子CCR9/CCL25对鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响
目的:探讨CCR9/CCL25通路对鼻咽癌CNE-2细胞增殖的影响.方法:培养CNE-2细胞,在培养体系中加入不同浓度的CCL25(0,10,25,50和100 ng/ml),用MTT法检测各组细胞的增殖率,确定促CNE-2细胞增殖的佳CCL25浓度.然后在培养体系中同时加入不同浓度的anti-CCR9(0,0.25,0.5,1,2μg/ml),观察此时CNE-2细胞的增殖情况.结果:不同浓度的CCL25均能促进CNE-2细胞的增殖(P＜0.05).而且其促细胞增殖作用呈现浓度依赖性,50 ng/ml时达到高水平.Anti-CCR9能阻断CCL25的促CNE-2增殖作用(P＜0.05),而且也呈浓度依赖性.结论:CCL25具有促进CNE-2细胞增殖的作用,并呈现浓度依赖性.Anti-CCR9能阻断CCL25的促CNE-2增殖作用,并呈浓度依赖性.
关键词： 鼻咽癌 CNE-2细胞 细胞因子 CCR9/CCL25 -
和厚朴酚联合青蒿素对CNE-2细胞周期阻滞的作用研究
目的:探讨和厚朴酚联合青蒿素对CNE-2细胞周期的阻滞作用.方法:采用RPMI-1540细胞培养液培养细胞,以无水乙醇溶解青蒿素及和厚朴酚,运用胸腺嘧啶核苷双阻断法阻断细胞分裂后,观察和厚朴酚、青蒿素及其联用对CNE-2细胞周期的影响.结果:在联合用药处理24h后,G1、S和G2期细胞比例分别为(62.37±3.21)％、(31.36±3.15)％和0.00％.相较于单独用药,HNK+ ART联合用药可进一步下调Cyclin D1、Cyclin E1,差异具有统计学意义(P＜0.05);p27表达被上调,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:和厚朴酚联合青蒿素能够将CNE-2细胞周期阻滞在G1期.
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新福菌素对人鼻咽癌细胞株CNE-2凋亡杀伤作用的研究
目的 探讨新福菌素对人鼻咽癌细胞株CNE-2的体外杀伤效应及作用机制.方法 体外培养CNE-2细胞,应用MTT比色法观察新福菌素对CNE-2细胞增殖的抑制作用.倒置显微镜下观察实验组细胞的生长及结构变化,同时采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测Bax mRNA基因的表达.结果 新福菌素在体外对CNE-2细胞有较强的增殖抑制作用,能诱导CNE-2细胞凋亡;同时进行Bax mRNA基因表达检测发现对照组CNE-2细胞Bax mRNA表达呈弱阳性;实验组CNE-2细胞Bax mRNA表达均呈阳性,且随着新福菌素浓度的增加而逐渐增强.结论 新福菌素对CNE-2细胞有明显的杀伤效应,杀伤机制可能是诱导鼻咽癌细胞凋亡,并与凋亡相关基因Bax mRNA表达上调有关.
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HMME-PDT对CNE-2细胞增殖的抑制作用
目的 探讨血卟啉单甲醚介导的光动力学疗法(HMME-PDT)对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制作用.方法 以血卟啉单甲醚为光敏剂,532 nm激光为激发光源的光动力学疗法作用于鼻咽癌CNE-2细胞.细胞用5、10、20μg/ml浓度的光敏剂孵育2 h后,用0.6、1.2、2.4、4.8、9.6 J/cm2剂量的激光照射;激光功率密度为10mW/cm2.MTT法检测在HMME和激光两种变量下PDT对细胞活性的抑制作用;光镜观察PDT作用后细胞形态的变化;免疫组化法检测PCNA的表达.结果 在HMME剂量为5μg/ml、10μg/ml及20μg/ml时,细胞的抑制率随着激光剂量从0.6 J/cm2增加至9.6 J/cm2而逐渐增加;并且和HMME及激光剂量密切相关;光镜观察结果表明PDT组与对照组相比细胞密度明显减少,细胞核浓聚、碎裂.免疫组化结果显示PDT作用后PCNA表达减少.结论 HMME-PDT对CNE-2细胞的增殖有明显的抑制作用.
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鼻咽癌细胞系中核迁移蛋白的表达及作用
背景与目的:核迁移是真核生物生长发育和细胞功能所必需的,核迁移蛋白(nuclear distribution C,NUDC)在核迁移中起着重要作用.本研究旨在检测NUDC在鼻咽癌细胞系CNE-2、HNE-2中的表达情况,初步探讨其抗体对癌细胞活性的影响.方法:在大肠杆菌中表达GST-NUDC重组蛋白并制备其多克隆抗体,间接免疫荧光染色法明确NUDC蛋白在鼻咽癌细胞中的亚细胞定位,Western blot确定NUDC蛋白在鼻咽癌细胞系中表达情况,MTT法检测NUDC抗体对鼻咽癌细胞生长的影响.结果:鼻咽非癌组织及鼻咽癌细胞中均有NUDC蛋白表达,且其在鼻咽癌细胞中的表达量明显高于鼻咽非癌组织.NUDC蛋白在鼻咽癌细胞中主要位于细胞质核区附近,细胞核也可见少量表达.NUDC蛋白抗体可抑制鼻咽癌细胞生长,且存在着剂量-反应关系.结论:NUDC蛋白在鼻咽癌细胞系中高度表达,且NUDC蛋白抗体在体外可抑制鼻咽癌细胞的生长.
