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保元排毒丸对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的:观察保元排毒丸对单侧输尿管梗阻(Unilateral Ureteral Obstruction UUO)模型大鼠肾脏病理的影响及对Wnt/β-catenin信号转导通路的调控.方法:48只健康清洁级雄性SD大鼠,随机分为假手术组、UUO组、厄贝沙坦组(12.5g·kg-1/天)、保元排毒丸低、中、高剂量组(1.25g·kg-1/天、2.5g·kg-1/天、5.0g·kg-1/天),每组8只;除假手术组只分离输尿管不结扎外其余均制备右侧输尿管梗阻肾纤维化模型,造模第二天开始予相应的药物灌胃,假手术组和UUO组给予自由进食和生理盐水灌胃,共灌14天.末次灌胃24小时后取右肾进行HE染色观察肾脏病理改变,Masson染色观察肾组织胶原沉积情况;Western Blot法测肾组织E-cadherin、Collagen Ⅰ、β-Catenin表达水平;Real-time PCR检测Wnt4、β-catenin mRNA表达.结果:与假手术组比较,UUO组和各给药组肾小管、肾间质病变重、肾纤维化重(P＜0.01);与UUO组比较,保元排毒丸低、中、高剂量组和厄贝沙坦组肾小管、肾间质病变明显减轻、肾纤维化减轻(P＜0.01);UUO组E-cadherin表达较保元排毒丸各剂量组、厄贝沙坦组和假手术组明显减少(P＜0.01);保元排毒丸各剂量组和厄贝沙坦组Collagen Ⅰ、β-Catenin表达明显少于UUO组(P＜ 0.01);UUO组Wnt4、β-catenin mRNA表达明显高于假手术组(P＜0.01),保元排毒丸各剂量组和厄贝沙坦组Wnt4、β-catenin mRNA表达明显低于UUO组(P＜0.01).结论:保元排毒丸有改善肾脏纤维化的作用,其机理可能与调控Wnt/β-catenin信号转导通路有关.
关键词： 保元排毒丸 肾纤维化 单侧输尿管梗阻 Wnt/β-catenin -
益气活血利水汤对肝纤维化模型大鼠Necdin-Wnt信号通路的影响
目的:观察益气活血利水汤对肝纤维化模型大鼠necdin-Wnt信号通路的影响,探讨益气活血利水汤抗肝纤维化的作用机制.方法:60只SD大鼠中随机抽取12只为正常组,造模成功的45只大鼠随机分为益气活血利水汤(9.6 g· kg-1)组(n=12),益气活血利水汤(14.4 g·kg-1)组(n=11),秋水仙碱组(Col组,n=11)和模型组(n=11).正常组和模型组灌胃(ig)生理盐水,益气活血利水汤组ig益气活血利水汤9.6,14.4 g·kg-1·d-1,Col组ig Col 0.1 mg·kg-1 ·d-1.10周后观察两组的血清透明质酸(hyaluronan acid,HA),层黏蛋白(laminin,LN),Ⅲ型前胶原(typeⅢprocollagen,PCⅢ),Ⅳ型胶原(typeⅣcollagen,CⅣ)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察其病理表现,Masson染色观察胶原蛋白变化,观察各组necdin,β-链蛋白(β-catenin),过氧化物增殖激活受体(PPARγ)蛋白和mRNA表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠血清HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,纤维化分期的标准(Metavir)评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,Col组HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,METAVIR评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著降低(P＜0.01);与Col组比较,益气活血利水汤(9.6 g·kg-1)组HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,METAVIR评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著降低(P＜0.01);与益气活血利水汤(9.6g·kg-1)组比较,益气活血利水汤(14.4 g·kg-1)组HA,LN,PCⅢ,CⅣ水平,Metavir评分,胶原纤维含量,necdin,β-catenin蛋白及mRNA表达显著降低(P＜0.01).与正常组比较,模型组PPARγ蛋白及mRNA表达显著降低(P＜0.01);与模型组比较,Col组PPARγ蛋白及mRNA表达显著升高(P＜0.01);与益气活血利水汤(9.6 g·kg-1)组比较,益气活血利水汤(14.4 g·kg-1)组PPARγ蛋白及mRNA表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:益气活血利水汤可抑制necdin-Wnt/β-catenin通路的活性,解除Wnt/β-catenin对PPARγ的抑制,具有抗肝纤维化的效果.
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健脾解毒方通过COX-2-Wnt/β-catenin信号通路抑制裸鼠人结肠癌血管新生
目的:研究健脾解毒方对裸鼠人结肠癌血管新生的作用及机制.方法:建立人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组:对照组(0.9％氯化钠溶液组),健脾解毒方低、中、高剂量组(250、500、1 000mg·kg-1·d-1)和化疗药顺铂组(lmg·kg-1·d-1).给药第21天,处死各组荷瘤鼠,比较各组肿瘤大小.免疫组化法检测各组瘤体的微血管密度(MVD)、COX-2和β-catenin表达;ELISA测定血清中血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素(Ang-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达.结果:健脾解毒方低、中、高剂量组的瘤重抑制率分别为30.14％、38.01％、40.36％.免疫组化结果显示,对照组、健脾解毒方低、中、高剂量组瘤体MVD计数分别为(56.00±2.65)、(43.00±1.58)、(28.67±2.53)和(23.33±2.08),与对照组比较差异显著(P＜0.01).ELISA结果显示,健脾解毒方能够显著下调裸鼠血清中VEGF、Ang-2和bFGF表达(P＜0.01).同时,健脾解毒方能够显著下调瘤体中COX-2和β-catenin蛋白表达,呈剂量依赖效应.结论:健脾解毒方能抑制人结肠癌皮下移植瘤的生长和血管新生,其机制可能通过COX-2-Wnt/β-catenin信号通路下调VEGF表达有关.
关键词： 健脾解毒方 结肠癌 血管新生 COX-2 Wnt/β-catenin -
茵芍散含药血清对HSC-T6增殖及β-catenin表达的影响
目的:探讨茵芍散含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖作用的影响及其机制.方法:40只Wistar大鼠分别给予中药高、中、低剂量、0.9％氯化钠溶液、己酮可可碱灌胃,喂养1周后,腹主动脉采血,制备药物血清.设中药高、中、低剂量组,阴性对照组,阳性对照组及空白组,药物血清干预HSC-T6后,运用流式细胞术、吖啶橙/溴化乙锭(AO-EB)染色观察细胞增殖、分析周期情况,并分别通过实时荧光定量PCR、Western blot检测β-eatenin mRNA及蛋白表达情况.结果:与对照组比较,茵芍散能有效抑制HSC-T6增殖,下调β-catenin mRNA及蛋白表达(P＜0.05),且具有量-效关系.结论:茵芍散可抑制HSC增殖,阻断Wnt/β-catenin信号通路对HSC的激活可能是其治疗肝纤维化的作用机制.
关键词： 肝纤维化 茵芍散 肝星状细胞 Wnt/β-catenin -
人参多糖介导Wnt/β-catenin信号转导诱导人鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡
目的:观察人参多糖(ginseng polysaccharide,GPS)对人鼻咽癌细胞CNE-2的增殖和凋亡的影响以及可能的机制探讨.方法:CCK8法观察人参多糖对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响.取对数生长期的CNE-2细胞,用不同质量浓度人参多糖(GPS)0,0.1,0.2,0.3,0.4g·L-1分别作用48 h后,流式细胞术检测其对CNE-2细胞凋亡的诱导作用;Hoechst-33258染色和电镜观察细胞的形态改变.Real-time PCR检测细胞β-catenin mRNA的表达.采用免疫荧光染色检测细胞中β-catenin,TCF4蛋白定位及表达量的变化.Western blot检测细胞中β-catenin,Bcl-2,Bax蛋白的变化.结果:CCK8法测得人参多糖能明显抑制CNE-2细胞的增殖,其抑制作用呈剂量、时间依赖性,GPS处理细胞48 h的IC50为0.39 g· L-1;质量浓度分别为0.1,0.2,0.3,0.4g·L-1的GPS作用人鼻咽癌CNE-2细胞48 h后细胞凋亡率分别为(5.69 ±0.29)％,(10.3±0.63)％,(15.4±0.74)％,(35.7±1.86)％,与对照组(2.08 ±0.11)％比较均有显著性差异(P＜0.05);Hoechst-33258染色结果显示细胞凋亡特征.电镜下可见0.4 g·L-1GPS诱导48 h后可使CNE-2细胞出现凋亡小体.Real-time PCR显示β-cateninmRNA表达明显降低.激光共聚焦结果显示人参多糖作用48 h后-catenin和TCF4在胞核中表达明显减少,β-catenin表达区域由胞核向胞膜转移.Western blot结果显示经浓度梯度增加的人参多糖作用CNE-2细胞48 h后,β-catenin和抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱;而促凋亡蛋白Bax表达上调(P＜0.05).结论:人参多糖可明显抑制CNE-2细胞增殖促进细胞凋亡.Wnt/β-catenin信号通路的受阻可能是GPS诱导人鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的一个重要机制.
关键词： 人参多糖 CNE-2细胞 细胞增殖 凋亡 Wnt/β-catenin -
刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响
该文研究了不同浓度刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin表达的影响.经SPF级健康雌性SD大鼠(80只)给予蒸馏水、刺老苞根皮水煎剂高、中、低3种剂量,连续灌胃7 d,制备刺老苞根皮含药血清.体外培养原代成骨细胞(OB)并鉴定,取第3代成骨细胞,培养48 h后用各组含药血清干预培养10 d,采用茜素红染色钙化结节并计数;干预培养48 h后收集细胞,分别采用Real-time PCR(RT-PCR)和Western blot 法测定β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin的表达情况.结果显示,经鉴定体外培养细胞为原代成骨细胞;在干预培养后,与模型组相比,各剂量组可促进原代成骨细胞的矿化能力,且上调β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF mRNA和蛋白的表达,下调Axin mRNA和蛋白的表达.结果发现刺老苞根皮含药血清可通过调节原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin表达,增强成骨细胞的分化和增殖.
关键词： 刺老苞根皮 原代成骨细胞 Wnt/β-catenin 信号通路 -
胃癌中YAP与β-catenin蛋白表达的临床意义及相关性
目的 探讨YAP及β-catenin在胃癌组织、癌旁正常组织的表达与临床病理特征的关系及两者表达相关性.方法 采用荧光定量PCR、免疫组化和Western blot测定YAP和β-catenin在50例胃癌组织及癌旁正常组织中mRNA及蛋白表达,并分析其与临床病理参数关系及两者表达的相关性.结果 胃癌组织中YAP和β-catenin蛋白阳性表达率分别为72％ (36/50)和64％ (32/50),癌旁正常组织中阳性表达率分别为14％ (7/50)和20％ (10/50),P ＜0.05;YAP及β-catenin mRNA和蛋白在胃癌组织中表达较正常组织高(P＜0.05),且两者表达水平与胃癌分化程度、淋巴结转移和临床分期有显著关系(P ＜0.05);YAP与β-catenin在胃组织中共表达呈明显正相关(r=0.72,P＜0.05).结论 YAP和β-catenin蛋白在胃癌组织中存在高表达共存现象,可能与胃癌细胞恶性程度及细胞分化有关,参与胃癌的发生、发展过程.
关键词： 胃肿瘤 Hippo/YAP Wnt/β-catenin 信号传导通路 -
筋脉通含药血清对高糖培养大鼠雪旺细胞β-catenin、GSK-3β及髓鞘零蛋白表达的影响
目的探讨不同浓度筋脉通含药血清对高糖培养大鼠雪旺细胞(SCs)β-catenin、GSK-3β及髓鞘零蛋白(P0)的影响. 方法SD大鼠灌胃获得含药血清及正常血清,原代培养雪旺细胞,随机分为正常对照组、高糖组、筋脉通5、10和20倍干预组,72 h后分别用CCK、real-time PCR和Western blot法检测各组SCs细胞增殖活性及β-catenin、GSK-3β和P0的mRNA与蛋白表达.结果与正常组相比,高糖组SCs细胞增殖率显著降低(P<0.01),β-catenin和P0 mRNA与蛋白表达显著降低(P<0.01),而GSK-3β mRNA表达显著上升(P<0.05).中药筋脉通干预后使高糖培养的SCs细胞β-catenin、P0的mRNA及蛋白表达显著回升(P<0.01),而GSK-3β mRNA表达显著回降(P<0.01),且与浓度相关.结论高糖可引起SCs细胞损伤,中药筋脉通可以通过调节β-catenin、GSK-3β水平抑制该作用.
关键词： 筋脉通 雪旺细胞 Wnt/β-catenin 髓鞘零蛋白 -
Wnt/β-catenin信号途径抑制Raw264.7分化
目的 了解Wnt/β-catenin信号途径对小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7的分化调控.方法 将细胞分为4组:阴性对照组(即空Raw264.7组)、实验对照组(即感染Ad-GFP组)、阳性对照组(即50 ng/mL RANKL诱导组)和实验组(即感染Ad-β-catenin组).分别给予上述4组处理因素后常规细胞培养3、6和9d提取细胞总RNA,荧光定量real-time (RT-PCR)检测核因子受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)及金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,再于同样处理因素培养6d通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察Raw264.7的分化情况;Western blot检测TRAP、Cathepsin K蛋白的表达.结果 RT-PCR检测Ad-β-catenin组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K和MMP-9 mRNA的表达;TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导Raw264.7成多核细胞,空白组和Ad-GFP组有个别多核细胞,Ad-β-catenin组为单核细胞;Western blot检测显示Ad-β-catenin组TRAP、Cathepsin K蛋白表达降低(P＜0.05).结论 Wnt/β-catenin信号途径能抑制RAW264.7分化成熟为破骨细胞.
关键词： Wnt/β-catenin RAW264.7 RANKL TRAP -
GDF-5和Dex通过Wnt/β-catenin信号通路促进rBMSCs体外成软骨分化
目的 利用生长分化因子(GDF-5)联合地塞米松(Dex)诱导大鼠BMSCs成软骨分化,并探讨Wnt/β-catenin 信号通路在其中的作用.方法 用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,取P3代细胞随机分成6组:BMSCs组、BMSCs+ Dex组、BMSCs+ GDF-5组、BMSCs+ GDF-5+ Dex组、BMSCs+GDF-5+Dex+ SB216763组和BMSCs+GDF-5+ Dex+XAV-939组.连续诱导培养14 d,倒置相差显微镜观察细胞形态,Alcian blue染色检测细胞的蛋白聚糖,RT-PCR检测成软骨分化相关基因aggrecan、Col2、Sox9、Col1,Wnt/β-catenin信号通路相关基因Dvl1、Gsk3β、β-catenin mRNA表达,Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白和β-catenin蛋白表达.结果 与BMSCs组相比,BMSCs+GDF-5+ Dex组能够使诱导的细胞蛋白聚糖分泌明显增加;Aggrecan、C012、Sox9基因表达明显增加(P＜0.05);Ⅱ型胶原蛋白表达增加(P＜0.05);β-catenin mRNA及蛋白表达水平也增加(P＜0.05).与BMSCs+ GDF-5+ Dex组相比,添加SB216763组蛋白聚糖,Ⅱ型胶原基因和蛋白表达增加(P＜0.05);相反,添加XAV-939组相应的成软骨分化基因及蛋白表达下降(P＜0.05).结论 GDF-5联合地塞米松(Dex)可诱导大鼠BMSCs成软骨分化,Wnt/β-cate-nin信号通路可能在其中发挥促进作用.
关键词： Wnt/β-catenin BMSCs 成软骨分化 GDF-5 -
双氢青蒿素通过阻断Wnt/β-catenin信号抑制骨肉瘤细胞系体外增殖和侵袭
目的 研究双氢青蒿素(DHA)在体外对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用及其可能的分子机制.方法 不同浓度的DHA处理骨肉瘤细胞,结晶紫染色检测细胞增殖.Western blot和荧光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin信号通路的活化情况.结果 DHA在体外能明显浓度依赖性地抑制人骨肉瘤细胞的增殖和侵袭(P＜0.05);DHA可降低骨肉瘤细胞β-catenin的蛋白水平和转录调控活性(P＜0.01),过表达β-catenin可逆转DHA对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用(P＜0.05),而β-catenin基因沉默则可进一步加强其抑制效果(P＜0.01).结论 DHA可明显抑制人骨肉瘤细胞增殖和侵袭,这种作用可能与其阻断Wnt/β-catenin信号通路相关.
关键词： 双氢青蒿素 骨肉瘤 Wnt/β-catenin 信号通路 -
XAV939抑制人肝癌HepG2细胞血管生成拟态的形成
目的 初步研究XAV939对人肝癌HepG2细胞血管生成拟态形成的影响及其可能的机制.方法 实验分为对照组和实验组(0.5和1μmol/L XAV939分别处理HepG2细胞48 h);体外成管实验检测各组细胞形成血管拟态的能力,RT-PCR检测ZEB1及MMP-7 mRNA的表达,Western blot检测β-catenin、ZEB1和MMP-7蛋白的表达.结果 对照组与实验组形成管状结构数目分别为9.67±0.70,5.67±0.64(0.5 μmol/L)和2.27±0.81(1μmol/L),体外形成管道结构的数目减少(P＜0.01);实验组ZEB1及MMP-7 mRNA表达和ZEB1、MMP-7及β-catenin蛋白表达均较对照组减少(P＜0.05).结论 XAV939能有效抑制人肝癌HepG2细胞血管生成拟态的形成.
关键词： XAV939 HepG2 Wnt/β-catenin 血管生成拟态 -
Wnt/β-catenin和NF-κB信号通路对肿瘤血管生成中VEGFs/VEGFRs的调控作用
血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factors,VEGFs)及其受体(vascular endothelial growth factor receptors,VEGFRs)在肿瘤的发生、发展、转移等过程中发挥了重要的作用,尤其是在肿瘤血管生成方面.而对其抑制剂的研究已经成为肿瘤防治的热点和发展方向,Wnt/β-catenin和NF-κB信号通路对肿瘤血管生成中也起着重要作用.本文就这两条信号通路对肿瘤血管生成中VEGF/VEGFRs的调控作用作一综述.
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Wnt/β-catenin信号通路与恶性血液病
Wnt/β-catenin信号通路是Wnt通路中重要并且研究为清楚的信号通路,它与许多实体肿瘤的发生、发展密切相关.近有研究发现,Wnt/β-catenin信号通路也可能参与恶性造血,在许多恶性血液病中异常激活,本文就Wnt/β-catenin信号通路与恶性血液病(多发性骨髓瘤、慢性髓系白血病、慢性淋巴细胞白血病及急性白血病)关系的新研究进展作一综述,以揭示其在恶性血液病发生中的相关机制,并为恶性血液病的靶向治疗提供新思路.
关键词： Wnt/β-catenin 恶性血液病 信号通路 -
SOX7与造血系统发育及血液系统恶性肿瘤的关系
SOX7基因是含高迁移率族蛋白(HMG)结构域的SOX家族重要成员,位于人类染色体8p23.1.Wnt/β-catenin信号通路在细胞自我更新、分化、增殖、凋亡中起到重要作用,与肿瘤的发生发展密切相关.SOX7基因为Wnt/β-catenin信号通路的抑制剂.在MDS等血液系统恶性肿瘤的研究中发现,SOX7基因极有可能是一个抑癌基因,该基因启动子区域的甲基化会导致表达沉默,从而促进肿瘤的发生发展.另外,造血干细胞增殖与分化为一个随机过程,但是SOX7可以促进造血干细胞向各个血细胞系分化.本文就SOX7基因改变与造血系统发育及血液系统恶性肿瘤的发生、发展相关性研究的新进展进行综述.
关键词： SOX 7 MDS Wnt/β-catenin 造血干细胞 -
吲哚美辛显著增强伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞的增殖抑制作用
目的:研究吲哚美辛联合伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞增殖的抑制作用,并从Wnt/β-Catenin信号通路角度探讨其抗增殖作用的分子机制.方法:采用MTT法明确吲哚美辛在各细胞中的佳作用浓度及时间;采用MTT法和甲基纤维素集落形成实验检测伊马替尼、吲哚美辛以及两者联合对各细胞增殖能力的影响;采用流式细胞术鉴定细胞周期及细胞凋亡的变化;Western blot检测经两种药物处理的细胞内pβ-catenin(S33/37/T41)、pGSK-3β(Ser9)和C-MYC蛋白的表达情况.结果:吲哚美辛抑制细胞增殖的佳作用浓度和时间分别为80μmol/L和48 h;吲哚美辛联合伊马替尼对细胞的增殖抑制作用明显优于单一药物处理;在KCL22和K562/G01细胞株中联合用药组的细胞周期均被阻制在G0/G1期;联合用药组的细胞凋亡数目明显高于单一药物处理组;与对照组或单一药物处理组相比,联合用药组细胞内pβ-catenin、β-catenin、pGSK-3β (Ser9)和C-MYC蛋白表达明显下调.结论:吲哚美辛可显著增强伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡,并通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路调控细胞的增殖.
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Wnt/β-Catenin信号通路在骨髓间充质干细胞治疗内毒素致急性肺损伤中的作用
目的 探讨Wnt/β-Catenin信号通路在骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗急性肺损伤中的作用.方法 采用6只SPF雄性进行贴壁分离法分离培养骨髓间充质干细胞.采用细菌脂多糖诱(LPS)导急性肺损伤,72只6周龄SPF级雄性SD大鼠,体质量约180～220 g,随机(随机数字法)分为4组,分别为:Control组(n=18)采用PBS处理;LPS组(n=18)采用细菌脂多糖诱导急性肺损伤;LPS+ MSCs组(n=18)在进行急性肺损伤的诱导后直接移植MSCs;Control+ MSCs组(n=18)在注射PBS后再移植MSCs.每组分别取LPS注射后6、24和48 h三个时间点.通过肺组织免疫组化分析及免疫印迹分析法检测Wnt信号通路成分的水平.实时定量PCR检测Wnt信号通路的靶基因的表达水平.结果 相比于PBS对照组,移植MSCs的能够显著降低急性肺损伤大鼠的湿干比,同时能显著提高急性肺损伤大鼠的血氧分压的水平.通过组织免疫组化分析,发现Wnt5a在急性肺损伤的肺组织中表达水平有显著的升高,移植的MSCs能够显著降低Wnt5a的水平.免疫印迹结果显示MSCs能够通过降低GSK-3β的磷酸化和β-catenin水平起到治疗的作用.通过实时定量PCR的结果显示MSCs处理能够显著降低Wnt信号靶基因Vegf、Axin2及Klf4的表达.结论 MSCs对急性肺损伤的治疗作用是通过影响Wnt5a的水平,降低GSK-3β和β-catenin的磷酸化及提高Wnt信号靶基因的表达得以发挥的,Wnt信号通路参与到MSCs治疗急性肺损伤的过程中.
关键词： 急性肺损伤 内毒素 间充质干细胞 Wnt/β-catenin -
Wnt/β-catenin信号通路对心脏瓣膜成肌纤维细胞向成骨细胞样表型转化的作用机制
目的 明确Wnt信号通路对心脏瓣膜成肌纤维细胞向成骨细胞样表型转化的调控作用. 方法 以原代培养的猪主动脉瓣成肌纤维细胞作为研究对象,用与心脏瓣膜钙化有关的病理因素氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理细胞24 h、48 h、72 h,在实验中加入Wnt信号阻滞剂DDK 1与ox-LDL共同作用72 h.采用免疫印迹法检测细胞的a平滑肌蛋白(α-SMA)活性变化,骨形成蛋白2(BMP2)、碱性磷酸酶(ALP)和成骨细胞转录因子Cbfa-1的蛋白表达;利用免疫细胞化学法检测Wnt/β-catenin信号通路中的关键效应蛋白β-catenin蛋白质表达的变化,观察Wnt/β-catenin信号通路的变化以及细胞是否向成骨细胞样表型转化. 结果 BMP2、ALP和Cbfa 1蛋白在对照组没有或仅有极弱的表达;经ox-LDL处理细胞后,α SMA、BMP2、ALP和Cbfa-1表达显著增加(P＜0.01),并呈现时间依赖性的表达上调(P＜0.05);β catenin蛋白的表达随着ox-LDL作用时间的增加而上调(P＜0.05),并由细胞质转移至胞核.加入Wnt通路阻滞剂DKK 1后,β catenin蛋白及骨相关蛋白的表达显著下调(P＜0.05). 结论 Wnt/β-catenin信号通路很可能在心脏瓣膜成肌纤维细胞向成骨细胞样表型转化的过程中起着关键性调控作用.
关键词： 心脏瓣膜 成纤维细胞 Wnt/β-catenin 成骨细胞 -
骨细胞 Wnt/β-Catenin 通过 Notch 信号促进 BMSCs 成骨分化
目的 探讨骨细胞Wnt信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用及其分子机制.方法 采用条件性基因敲出Cre/loxp技术制备特异性激活骨细胞Wnt/β-Catenin信号通路的小鼠;体外分离其和野生对照组小鼠的骨细胞,并分别与野生型小鼠骨髓间充质干细胞共培养;碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量、茜素红( Alizarin red)染色检测共培养早期成骨分化和晚期钙盐沉积; Real-Time PCR 检测骨细胞 Notch 信号配体 Jag1、 Jag2、 Dll1、 Dll4 及共培养后成骨分化特异标志物Runx2、ALP、Osteocalcin的mRNA表达水平.随后于共培养中加入Notch信号通路化学抑制剂DAPT(对照组加DMSO),再次行碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量和Real-Time PCR检测成骨分化特异标志物表达水平.结果 Wnt/β-Catenin激活的骨细胞其自身Jag1、Jag2、Dll4 mRNA表达较对照组骨细胞明显升高(P＜0. 05),与BMSCs共培养后成骨转录因子Runx2,成骨分化特异标志物ALP、Osteocalcin mRNA的表达较野生型明显升高(P＜0. 05),钙盐沉积增加.加入DAPT后,骨细胞Wnt激活组成骨转录因子Runx2、ALP、Osteocalcin mRNA的表达明显下降(P＜0. 05).结论 骨细胞调控骨的代谢,激活其Wnt/β-Catenin信号通路将通过上调Notch信号而促进BMSCs的成骨分化.
关键词： 骨细胞 Wnt/β-catenin 骨髓间充质干细胞 Notch 成骨分化 -
非创伤性股骨头坏死相关信号通路研究进展
非创伤性股骨头坏死(NONFH)是目前被国内外均列为尚未解决的难治性疾病之一,目前发现主要的致病原因有酒精、激素、吸烟和遗传因素等,但是对于各因素的具体发病机制仍尚不清楚.研究发现多种信号通路与人体代谢性疾病的发病具有相关性,骨代谢性疾病的研究中亦发现多种信号通路在NONFH的发病中具有一定的调控作用,如Wnt/p-catenin、OPG/RANKL/RANK、TLR4、HIF-1α、RhoA/ROCK和MAPK等信号通路在NONFH的发生和发展中具有抑制破骨细胞的分化、促进成骨细胞的分化、改善股骨头部的血液供应等作用,因此本文就NONFH相关的信号通路做一综述,旨在为NONFH的预防和治疗找到新的方法和途径.
关键词： 非创伤性股骨头坏死 信号通路 Wnt/β-catenin
