首页 > 文献资料
-
短葶山麦冬遗传多样性TRAP标记研究
目的:利用TRAP分子标记技术研究短葶山麦冬遗传多样性.方法:以果糖、光合或甾体皂苷代谢途径7个关键酶基因和1个凝集素基因作为靶标序列设计固定引物13条,筛选随机引物19条,利用其中11对多态性较高引物组合对50份短葶山麦冬种质进行分析.结果:共扩增了335条带,其中多态性带323条,占96.42%.引物平均多态信息量0.930.遗传分化系数0.610.UPGMA聚类表明相似系数0.52～0.98,,结论:短葶山麦冬遗传多样性水平较高,出现了一定程度的遗传分化.
-
Wnt/β-catenin信号途径抑制Raw264.7分化
目的 了解Wnt/β-catenin信号途径对小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7的分化调控.方法 将细胞分为4组:阴性对照组(即空Raw264.7组)、实验对照组(即感染Ad-GFP组)、阳性对照组(即50 ng/mL RANKL诱导组)和实验组(即感染Ad-β-catenin组).分别给予上述4组处理因素后常规细胞培养3、6和9d提取细胞总RNA,荧光定量real-time (RT-PCR)检测核因子受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)及金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,再于同样处理因素培养6d通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察Raw264.7的分化情况;Western blot检测TRAP、Cathepsin K蛋白的表达.结果 RT-PCR检测Ad-β-catenin组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K和MMP-9 mRNA的表达;TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导Raw264.7成多核细胞,空白组和Ad-GFP组有个别多核细胞,Ad-β-catenin组为单核细胞;Western blot检测显示Ad-β-catenin组TRAP、Cathepsin K蛋白表达降低(P＜0.05).结论 Wnt/β-catenin信号途径能抑制RAW264.7分化成熟为破骨细胞.
关键词： Wnt/β-catenin RAW264.7 RANKL TRAP -
探讨端粒酶及其相关组分在乳腺癌诊断中的意义
目的探讨端粒酶活性及端粒酶相关组分(hTERT)在乳腺癌诊断中的价值.方法端粒重复扩增分析法检测81例乳腺良恶性病变组织端粒酶活性;原位杂交法检测端粒酶逆转录酶基因hTERT mRNA的表达.结果58例乳腺癌中49例端粒酶阳性(84.5%),端粒酶活性与临床病理参数无相关性;癌旁正常乳腺组织端粒酶阴性,7例乳腺增生症和6例乳腺腺瘤中分别有1例端粒酶阳性,与乳腺癌比差异非常显著(P＜0.01).原位杂交结果显示,hTERT mRNA阳性表达率为67.2%(39/58),与端粒酶活性表达呈一致性(P＜0.05).结论端粒酶活性检测和hTERTmRNA原位杂交检测在乳腺癌的诊断中具有重要参考价值,其抑制剂有望成为恶性肿瘤治疗的新靶点.
-
双胎反向动脉灌注序列征中血流自然阻断一例
双胎反向动脉灌注序列征(twin reversed arterial perfusiion sequence,TRAP)是单合子多胎妊娠中严重的并发症之一,发病率为妊娠总数的1/35000,单卵双胎中占1%,宫内死亡率高.
-
BM210955对破骨细胞骨吸收的抑制作用
细胞水平研究国产双磷酸盐药物-BM210955的骨吸收抑制作用.由1日龄SD大鼠四肢长骨分离破骨细胞(OC)并接种于牛皮质骨薄切片上,在不同浓度BM210955作用下培养,定时取骨片作TRAP免疫组化染色,计数阳性多核细胞后,经超声去除细胞后作甲苯胺蓝染色,光镜下作吸收陷窝计数,数据以(-x±s)表示,并与对照比较作t检验.结果显示:①BM210955能降低体外培养OC的数目,10-8mol/L组的TRAP阳性多核细胞较对照组减少73%,差异具有非常显著性,P<0.01.②BM210955抑制OC的陷窝形成能力,10-10、10-8mol/L组的抑制率分别为76.32%和87.99%,均与对照有明显差异,P<0.01.③上述结果与剂量有关,剂量越高,抑制效应越明显.
-
不同氧环境中破骨细胞的发育分化和功能变化研究
目的 本实验拟观察不同氧浓度下破骨细胞诱导过程中的分化发育,寻找破骨细胞体外培养的适宜氧浓度,为骨转换平衡的修复提供依据.方法 取野生型C57B/L小鼠(2个月龄左右,雄性)骨髓进行破骨细胞的诱导培养.用RANKL(10ng/ml)和M-CSF(10ng/ml)联合的诱导方案,将小鼠骨髓中单核-巨噬细胞系体外诱导为破骨细胞样细胞.将原代破骨细胞置于20%O2、7%O2、2%O2下诱导培养,MOCP5不同氧浓度下普通培养.用MTT法检测MOCP5的增殖变化,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞形成的变化,并进行TRAP阳性细胞计数,用象牙骨片骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色检测破骨细胞骨吸收活性的变化.结果 骨髓中单核-巨噬细胞体外经RANKL和M-CSF联合诱导可分化为多核的破骨细胞样细胞,在诱导第3天细胞开始融合,第5天TRAP染色强阳性,第8天可见象牙骨片上形成圆形、椭圆形、腊肠形等多种形态的骨吸收陷窝.MTT检测显示MOCP5在20%O2培养时一直处于增殖状态,7%O2条件下由增殖期进入平台期,2%O2时增殖缓慢且没有规律.20%O2、7%O2、2%O2培养下形成的TRAP阳性破骨细胞数分别为22±5.97、34±2.97、7±1.39(P<0.05),原代诱导的破骨细胞在20%O2、7%O2、2%O2形成的骨吸收陷窝面积(μm2)分别为3892.28±1642.78、5356.7±1655.6、2573±994.48(P<0.05).结论 体外RANKL和M-CSF联合可将骨髓单核-巨噬细胞诱导成多核的破骨细胞样细胞作为破骨细胞的研究模型.常氧条件下破骨细胞的TRAP阳性细胞数和骨吸收活性均低于7%O2.7%O2培养下的破骨细胞更接近于体内生理状态的破骨细胞.
-
孕早期双胎反向动脉灌注序列征的超声诊断
双胎反向动脉灌注(twin reversed arterial perfusion,TRAP)序列征是单合子多胎妊娠中的严重并发症,在孕早期通过产前超声可以诊断;如治疗不及时,50%～75%的胎儿会发生宫内死亡[1].因此,孕早期宫内诊断TRAP序列征可赢得治疗时间,对改善其预后有重要意义.
-
8-异戊烯基柑橘素抑制骨髓细胞向破骨细胞分化及骨吸收活性
研究8-异戊烯基柑橘素(8-prenylnaringenin,8-PNG)对骨髓细胞向破骨细胞分化及骨吸收活性的影响.从出生24 h内的青紫兰兔四肢骨髓中分离培养破骨细胞,加入8-PNG(1×10-7、1×10-6和1×10-5 mol·L-1),以1×10-7 mol·L-117β-雌二醇(17β-estradiol,E2)作为阳性对照.培养5天后进行TRAP染色和TRAP活性检测,7天后进行甲苯胺蓝染色和骨吸收陷窝数量与面积的分析.分别于加药后2、4、8、12、24、36及48 h进行Annexin V染色,观察破骨细胞凋亡情况；于12、24和36 h提取总RNA,用real-time RT-PCR法检测TRAP (tartrateresistant acid phosphatase)和CTSK (cathepsin K)的基因表达水平.结果显示,8-PNG(1×10-6和1×10-5 mol·L-1)组的TRAP染色阳性细胞即破骨细胞数量明显低于空白对照组(P＜0.01),但只有8-PNG (1×10-5 mol·L-1)组显著低于E2组(P＜ 0.05); TRAP活性的变化呈相同趋势;骨陷窝数和面积的计量结果亦呈相似变化趋势；E2组使破骨细胞的凋亡高峰大大提前,且凋亡数量多,其次为8-PNG(1×10-5mol·L-1)组,8-PNG(1×10-7 mol·L-1)组与空白对照组比较无差异.8-PNG(1×10-7、1×10-6和1×10-5 mol·L-1)可显著抑制TRAP和CTSK的基因表达,且呈剂量依赖性.结果表明,8-PNG能抑制骨髓细胞向破骨细胞分化,并能抑制破骨细胞的骨吸收活性,其机制与诱导破骨细胞凋亡和抑制骨吸收关键酶的基因表达与活性有关.
-
蛇床子素对体外培养破骨细胞骨吸收及细胞凋亡的影响
研究蛇床子素对破骨细胞骨吸收的影响及其分子机制.采用体外分离、培养兔破骨细胞,与盖玻片及骨磨片共同培养,使用1× 10-5 mol·L-1蛇床子素刺激破骨细胞,观察活体细胞并依据HE、TRAP、骨陷窝甲苯胺蓝染色鉴定破骨细胞；进行骨吸收陷窝和面积定量分析,吖啶橙染色统计凋亡细胞;real time PCR及Western blotting法检测相关基因和蛋白.与空白对照组比较,1×10-5 mol·L-1蛇床子素能够明显提高破骨细胞凋亡率并通过抑制RANKL和TRAP等相关基因及JNK1/2磷酸化水平抑制其骨吸收.结果提示,蛇床子素可以通过RANK+RANKL/TRAF6/Mkk/JNK途径刺激破骨细胞凋亡并抑制骨吸收.
-
鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对小鼠破骨细胞活性的影响
目的研究鲫鱼卵唾液酸糖蛋白（Carassius auratus sialyglycoproteins，CA-SGP）对破骨细胞活性的影响。方法通过M-CSF和RANKL体外诱导小鼠骨髓造血细胞分化，建立破骨细胞模型，以MTT法检测CA-SGP对破骨细胞前体细胞及破骨细胞增殖活性的影响；采用TRAP染色和TRAP含量测定法评价其对小鼠骨髓细胞向破骨细胞分化的影响；利用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测CA-SGP对小鼠破骨细胞促炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α分泌的影响。结果 CA-SGP对破骨细胞前体细胞和破骨细胞的增殖活性无影响，可明显抑制小鼠骨髓造血细胞向破骨细胞的分化，且在早期抑制作用强。ELISA 试剂盒检测结果表明，CA-SGP 能明显降低小鼠破骨细胞 IL-6、IL-1β和 TNF-α的含量。结论鲫鱼卵唾液酸糖蛋白可明显抑制小鼠骨髓造血细胞向破骨细胞的分化以及破骨细胞炎症因子的分泌。[营养学报，2015，37（1）：51－55,61]
-
灯心草抑制RANKL诱导的破骨细胞形成
目的 观察灯心草对核因子(NF)-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导骨髓巨噬细胞(BMMs)分化形成破骨细胞的作用,并探讨其机制.方法 取8周龄C57/BL6小鼠分离出BMMs,采用CCK-8法检测灯心草对BMMs增殖的影响.在30 μg/L巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和50 μg/L RANKL刺激BMMs分化成破骨细胞,经不同浓度灯心草(0、6.25、12.5、25 μmol/L)处理,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测破骨细胞分化的情况.RT-PCR检测破骨细胞分化过程中特异性基因降钙素受体(CTR)、活化T细胞核因子1(NFATC1)、空泡型H+三磷酸腺苷转运酶-d2(V-ATPase-d2)、空泡型H+三磷酸腺苷转运酶-a3(V-ATPase-a3)、C-FOS的表达.结果 CCK-8实验结果显示,灯心草浓度低于12.5 μmol/L时对BMMs细胞增殖无明显抑制.50 μg/L RANKL可诱导BMMs细胞分化成TRAP染色阳性的多核巨细胞,即成熟的破骨细胞.不同浓度的灯心草可显著抑制破骨细胞形成,且呈现浓度依赖性;RT-PCR结果显示,灯心草浓度依赖性地抑制破骨细胞分化过程中特异性基因的表达.结论 灯心草浓度依赖性地抑制破骨细胞的形成,其机制可能是通过抑制破骨细胞分化过程中特异性基因的表达来实现的.
-
端粒酶的调节基因TRAP在皮肤基底细胞癌中的表达及意义
目的:探讨端粒酶的调节基因TRAP在皮肤基底细胞癌中的表达情况.方法:用免疫组化S-P法检测TRAP在38例皮肤基底细胞癌、15例正常皮肤中的表达.结果:TRAP在皮肤基底细胞癌的表达高于正常皮肤(P＜0.01);在未分化型与分化型基底细胞癌表达的差异无统计学意义.结论:TRAP的异常高表达可能与皮肤基底细胞癌的发病有关.TRAP的表达与基底细胞癌的病理分型无关.
-
胃息肉组织中端粒酶活性的检测及其临床意义
目的:探讨端粒酶在胃息肉中的检测及临床意义.方法:标本均系电子内镜下取得的胃息肉组织5块,3块送活检,另2块进行端粒酶活性检测.结果:增生性息肉、腺瘤、炎性息肉、幼年性息肉和息肉样胃癌组织的端粒酶阳性率分别为6.6%、18%、13.5%、0%和88%.结论:端粒酶活性检测可作为胃息肉恶变的早期预测指标.
-
子宫内膜癌中端粒酶的活性表达
目的：为明确端粒酶在子宫内膜癌中的活性，探索端粒酶活化在子宫内膜癌形成中的作用。方法：用以PCR为基础的端粒重复扩增法(TRAP)对57例子宫内膜癌及11例正常子宫内膜组织标本进行端粒酶活性检测。结果：子宫内膜癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和正常子宫内膜组织标本的端粒酶活性表达的阳性率分别为74%(17/23)、85%(17/20)、86%(12/14)及9%(1/11)。子宫内膜癌的阳性率明显高于正常子宫内膜组织。结论：端粒酶在子宫内膜癌的诊断和治疗上有望成为行之有效的新的靶目标。
-
持续压力对体外培养的人破骨细胞形态和基质金属蛋白酶9、抗酒石酸酸性磷酸酶表达的影响
目的:探讨施加持续压力对体外培养的人破骨细胞功能的影响.方法:从脐血中提取单核细胞,α-MEM培养液中加入RANKL和M-CSF作为诱导因子,细胞培养14d.对鉴定为阳性的成熟破骨细胞施加100kPa持续性压力,加载时间分别为1h、3h、5h,观察加力后细胞形态的变化;对破骨细胞的2种重要功能酶-基质金属蛋白酶9(MMP-9)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)进行染色,每组随机选取20个细胞进行灰度分析,应用SPSS12.0软件包对MMP-9和TRAP表达量进行t检验,分析持续压力对破骨细胞的影响.结果:在持续压力的作用下,破骨细胞形态由不规则形态向圆形变化发展.加力1h后,TRAP表达量(59.61±14.95)与未加力组(80.01±9.69)有显著性差异(P<0.05);MMP-9在加力5h后(60.44±8.49)表达量增加,有统计学意义(P<0.05).结论:体外持续压力可刺激成熟破骨细胞形态发生变化,MMP-9和TRAP表达量增加,说明应力能上调破骨细胞的骨吸收功能.
-
低分子壳寡糖对LPS诱导的小鼠颅骨吸收的抑制作用
目的:研究低分子量壳寡糖(low-molecular chitosan oligosaccharide,LMCOS)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的小鼠颅骨吸收模型的影响,评估其在小鼠颅骨吸收过程中的抑制作用.方法:将6周龄C57/BL6雄性小鼠随机分为5组,即磷酸缓冲液(PBS)组、LPS组、LPS+0.005％ LMCOS组、LPS+0.05％ LMCOS组和LPS+0.5％ LMCOS组;每组5只,LPS的刺激量为10 mg/kg.小鼠浅麻醉后,于颅盖骨皮下注射相应试剂,每只注射300 μL.每周小鼠头部皮下组织和颅骨骨膜之间注射试剂3次,2周后处死,取出颅盖骨进行Micro-CT扫描、H-E染色、TRAP染色.采用SPSS21.0软件包对数据进行单因素方差分析,观察骨破坏面积、破骨细胞的形成等骨缺损表现.结果:Micro-CT扫描、H-E染色、TRAP染色发现,与PBS组相比,LPS组小鼠颅骨表面的骨破坏十分明显;加入不同浓度的LMCOS后,颅骨骨破坏面积及破骨细胞数目随LMCOS浓度的升高而不断减少.结论:LMCOS具有抑制LPS诱导的小鼠颅骨骨吸收的作用,提示LMCOS对骨破坏性疾病可能具有一定的治疗作用.
-
血清端粒酶与肠癌相关抗原检测对大肠癌诊断价值的研究
近年来,大肠癌发病率有所增加,老年人所占比例升高更为明显[1].肿瘤标记物在肠道肿瘤的诊断中具有一定价值,但目前尚未发现一种同时具有高灵敏性及高特异性的肿瘤标记物.本文采用端粒重复序列扩增(TRAP)法[2 ]和免疫放射分析法比较研究78例大肠癌及43例对照组外周血端粒酶活性和肠癌相关抗原(CCA)的水平,旨在探讨两项肿瘤标记物联合检测在大肠癌诊断中的价值.
-
端粒酶活性测定方法的改进与探讨
目的判断改良TRAP银染法在端粒酶活性测定中的应用价值.方法建立支气管灌注煤焦沥青法诱导大鼠肺癌的模型,用改良TRAP银染法测定大鼠肺癌、癌前及正常组织中的端粒酶活性,同时用A549细胞系进行方法学鉴定.结果端粒酶较特异地表达于肺癌组织中,改良TRAP银染法有较好的特异性,敏感性(102个细胞)比原方法(103个细胞)有了进一步提高,较原方法简单且染色更为充分,便于观察结果.结论银染法无放射性、成本较低,有推广使用的价值.有望通过改进取材和测定方法,达到早期诊断肺癌的目的.
-
端粒酶活性两种检测方法的相关性研究
[目的]用TRSP-银染法及TRAP-ELISA法两种方法测定端粒酶活性并对其特异性、敏感性及相关性进行研究.方法:以人肺腺癌A549细胞为实验材料,用RNA酶、加热、倍比稀释的等因素处理A549细胞,TRAP-银染法对其特异性、敏感性进行检测;用2mmol/L CINN加入A549细胞培养体系,用两种方法检测诱导分化剂CINN对肿瘤细胞前后端粒酶活性的改变,及对其相关性进行分析.结果:端粒酶活性在A549细胞中有很强的特异性,且可以检出约102个肿瘤细胞的端粒酶活性;CINN可抑制端粒酶活性并对时间有依赖性;TRAP-银染法及TRAP-ELISA法两种方法作等级相关分析,呈正相关(rs=1.000,P＜0.01).结论:两种方法测定端粒酶活性有很高的特异性及敏感性且呈正相关.
-
银染法与产物杂交法检测端粒扩增产物比较
目的:选择简便、灵敏地检测端粒酶活性的方法.方法:以HL-60细胞与慢性粒细胞白血病单个核细胞为检测对象,在端粒重复序列扩增技术(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)基础上,采用同步扩增产物杂交法和产物银染法检测其端粒酶活性.结果与结论:产物杂交法操作简便,比产物银染法有更高的灵敏度,还可用于半定量.
