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8-异戊烯基柑橘素与柑桔素对体外培养破骨细胞活性影响的比较研究
目的:研究8-异戊烯基柑橘素(8-prenylnaringenin,PNG)和柑桔素(naringenin,NG)影响体外培养破骨细胞活性和凋亡的差异,探讨8-异戊烯基团的生理活性.方法:从青紫兰乳兔四肢长骨中分离出破骨细胞,培养于含10％ FBS的α-MEM培养液中,分别加入浓度为1×10-5 mol.L-1的PNG和NG.药物干预4d后进行TRAP染色和TRAP酶活性测定,7d后进行甲苯胺蓝染色.于加药后48 h内多个时间点进行Annexin Ⅴ-FITC染色,观察破骨细胞凋亡情况,并提取总RNA,用Real-time RT-PCR法检测TRAP及Cathepsin K(CTSK)的基因表达情况.结果:与对照组相比,PNG和NG组的TRAP阳性细胞即破骨细胞数均显著减少,TRAP酶活性显著降低,形成骨吸收陷窝的数量和面积明显减少,TRAP和CTSK的基因表达水平明显降低.PNG组与NG组相比,以上所有指标均是前者显著低于后者.此外,PNG组的破骨细胞凋亡高峰于加药后12 h到达,而NG组是24h后到达,且前者的凋亡总数显著高于后者.结论:PNG抑制破骨细胞骨吸收和诱导破骨细胞凋亡的活性明显高于NG.由于两者分子结构的唯一差别在于8-异戊烯基团,因此,8-异戊烯基团可提高黄酮母核的抗骨吸收活性.
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8-异戊烯基柑橘素抑制骨髓细胞向破骨细胞分化及骨吸收活性
研究8-异戊烯基柑橘素(8-prenylnaringenin,8-PNG)对骨髓细胞向破骨细胞分化及骨吸收活性的影响.从出生24 h内的青紫兰兔四肢骨髓中分离培养破骨细胞,加入8-PNG(1×10-7、1×10-6和1×10-5 mol·L-1),以1×10-7 mol·L-117β-雌二醇(17β-estradiol,E2)作为阳性对照.培养5天后进行TRAP染色和TRAP活性检测,7天后进行甲苯胺蓝染色和骨吸收陷窝数量与面积的分析.分别于加药后2、4、8、12、24、36及48 h进行Annexin V染色,观察破骨细胞凋亡情况；于12、24和36 h提取总RNA,用real-time RT-PCR法检测TRAP (tartrateresistant acid phosphatase)和CTSK (cathepsin K)的基因表达水平.结果显示,8-PNG(1×10-6和1×10-5 mol·L-1)组的TRAP染色阳性细胞即破骨细胞数量明显低于空白对照组(P＜0.01),但只有8-PNG (1×10-5 mol·L-1)组显著低于E2组(P＜ 0.05); TRAP活性的变化呈相同趋势;骨陷窝数和面积的计量结果亦呈相似变化趋势；E2组使破骨细胞的凋亡高峰大大提前,且凋亡数量多,其次为8-PNG(1×10-5mol·L-1)组,8-PNG(1×10-7 mol·L-1)组与空白对照组比较无差异.8-PNG(1×10-7、1×10-6和1×10-5 mol·L-1)可显著抑制TRAP和CTSK的基因表达,且呈剂量依赖性.结果表明,8-PNG能抑制骨髓细胞向破骨细胞分化,并能抑制破骨细胞的骨吸收活性,其机制与诱导破骨细胞凋亡和抑制骨吸收关键酶的基因表达与活性有关.
