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刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响
目的:研究不同浓度刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞的增殖、分化及矿化功能的影响.方法:SPF级健康雌性SD大鼠(80只)给予蒸馏水、刺老苞根皮水煎剂高、中、低3种剂量浓度,连续灌胃7d制备含药血清.各组合药血清干预培养成骨细胞,采用微量酶标法检测碱性磷酸酶活性、茜素红染色钙化结节并计数,流式PI单染法检测成骨细胞周期.结果:在干预培养后与模型对照组比较,各剂量组碱性磷酸酶活性、钙化结节数有所升高,中、高剂量组高于模型对照组;与模型对照组比较,流式细胞仪检测发现各剂量组G0/G1期、G2/M期明显下降,S期和G2/M+S期明显升高.结论:刺老苞根皮含药血清可通过延长原代成骨细胞S期,促进其增殖、分化及矿化功能的作用.
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刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响
该文研究了不同浓度刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin表达的影响.经SPF级健康雌性SD大鼠(80只)给予蒸馏水、刺老苞根皮水煎剂高、中、低3种剂量,连续灌胃7 d,制备刺老苞根皮含药血清.体外培养原代成骨细胞(OB)并鉴定,取第3代成骨细胞,培养48 h后用各组含药血清干预培养10 d,采用茜素红染色钙化结节并计数;干预培养48 h后收集细胞,分别采用Real-time PCR(RT-PCR)和Western blot 法测定β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin的表达情况.结果显示,经鉴定体外培养细胞为原代成骨细胞;在干预培养后,与模型组相比,各剂量组可促进原代成骨细胞的矿化能力,且上调β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF mRNA和蛋白的表达,下调Axin mRNA和蛋白的表达.结果发现刺老苞根皮含药血清可通过调节原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin表达,增强成骨细胞的分化和增殖.
关键词： 刺老苞根皮 原代成骨细胞 Wnt/β-catenin 信号通路 -
Micro-CT和骨力学测试观察刺老苞根皮对骨折大鼠的作用
目的 应用骨力学和Micro-CT技术,探讨刺老苞根皮对3月龄大鼠胫骨骨折显微结构和骨力学的影响.方法 60只SPF级3月龄SD雌性大鼠,在胫骨上打孔造模后,随机分为正常模型组、刺老苞根皮低剂量组[0.9 g/(kg·d)]、刺老苞根皮中剂量组[1.8 g/(kg·d)]、刺老苞根皮高剂量组[3.6 g/(kg·d)],每天一次,连续给药4 w.分别在给药14、21、28 d后,取右侧胫骨进行骨力学检测,取左侧胫骨进行Micro-CT扫描及三维重建.结果 与模型组相比,从14 d到28 d,刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组骨的结构力学参数(弹性挠度、弹性载荷、大挠度、大载荷)和生物力学参数(大应力、大应变、弹性应力、弹性应变)明显提高(P＜0.05);BV/TV、Tb.Th、Tb.V在21、28 d时刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组明显升高(P＜0.05或P＜0.01);Tb.Sp、SMI在21、28 d时,刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组明显低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 刺老苞根皮可通过改善骨折部位骨微小结构,提高骨密度,促进骨组织结构完整性,从而提升骨的抗冲击和变形能力,使其韧性和可塑性增强,骨组织强度增加,提高胫骨骨力学性能,促进大鼠骨折修复.
关键词： 中医中药 刺老苞根皮 骨折 微型CT(Micro-CT) 骨力学 -
刺老苞根皮对糖皮质激素诱导的大鼠骨质疏松症的干预影响
目的 本研究拟在验证刺老苞根皮提取物对糖皮质激素诱发的大鼠骨质疏松症的干预作用.方法 90只SD大鼠(雌雄各半)随机分成6组,即(雌/雄)对照组、(雌/雄)模型组、(雌/雄)治疗组(刺老苞根皮提取物组),每组15只.其中模型组与治疗组采用连续注射地塞米松磷酸钠(DXM)造成继发性骨质疏松,而后直接灌胃刺老苞根皮提取物(20 mg/kg),观察其治疗作用.8周后,检测脂代谢指标[血清胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)含量]、骨代谢指标[骨钙素(BGP)、1,25-(OH2D3)、骨矿物含量、骨密度值、骨力学参数]、激素指标[甲状旁腺(PTH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)、生长激素(GH)、黄体生长素(LH)、卵泡生成素(FSH)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)含量]以及卵巢、子宫湿重的变化情况.结果 与对照组相比,模型组雌性大鼠脂代谢指标[血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)]、骨代谢指标[骨钙素(BGP)、1,25-(OH2D3)、骨矿物含量、骨密度值、骨力学参数]、激素指标[雌二醇(E2)、生长激素(GH)、黄体生长素(LH)、卵泡生成素(FSH)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)含量]以及卵巢、子宫湿重均有所下降(P＜0.01);雄性大鼠脂代谢指标[血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)]、骨代谢指标[骨钙素(BGP)、1,25-(OH2D3)、骨矿物含量、骨密度值、骨力学参数]、激素指标[睾酮(T)]均也有所下降(P＜0.01),而雌/雄脂代谢指标[胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)]及雄性大鼠激素指标[甲状旁腺(PTH)]则有所升高(P＜0.01).与模型组相比,治疗组雌性大鼠脂代谢指标[血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)]、骨代谢指标[骨钙素(BGP)、1,25-(OH2D3)、骨矿物含量、骨密度值、骨力学参数]、激素指标[雌二醇(E2)、生长激素(GH)、黄体生长素(LH)、卵泡生成素(FSH)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)含量]以及卵巢、子宫湿重均有所升高(P＜0.05);雄性大鼠脂代谢指标[血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)]、骨代谢指标[骨钙素(BGP)、1,25-(OH2D3)、骨矿物含量、骨密度值、骨力学参数]、激素指标[睾酮(T)]均也有所升高(P＜0.05),而雌/雄脂代谢指标[胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)]和雄性大鼠激素指标[甲状旁腺(PTH)]则有所下降(P＜0.05).结论 刺老苞根皮提取物可以有效治疗糖皮质激素诱发的继发性骨质疏松症.
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刺老苞根皮黄酮类化合物对维甲酸致大鼠骨质疏松的影响
目的 研究刺老苞根皮黄酮类化合物对维甲酸致大鼠骨质疏松的影响.方法 将60只大鼠随机分成对照组,模型组,刺老苞根皮黄酮类化合物高、中、低剂量(10、20、30 mg/kg)组和仙灵骨葆胶囊(20 mg/kg)阳性对照组,每组10只.各组以ig维甲酸70 mg/kg造模后,各给药组分别ig给予相应药物,每日1次,连续8周.取血清检测相关生化指标,进行骨组织切片检查和骨生化指标检测,测定股骨长度、宽度及质量.结果 与对照组比较,模型组大鼠股骨质量、尺骨羟脯氨酸(Hyp)和骨钙的量明显降低,胫骨骨髓腔中脂肪组织增多(P＜0.01),血浆胆固醇(TC)水平升高、碱性磷酸酶(ALP)和高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平降低(P＜0.01).与模型组比较,刺老苞根皮黄酮类化合物各剂量组能有效增加骨质量和提高骨质的量(P＜0.01),减少骨髓腔中脂肪的量,升高ALP和HDL-C的量(P＜0.01).结论 刺老苞根皮黄酮类化合物可有效对抗维甲酸引起的大鼠骨生长抑制及骨丢失.
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刺老苞根皮黄酮类化合物对MC31E-E1成骨细胞OPG和RANKL mRNA基因表达影响的实验研究
目的:探讨刺老苞根皮黄酮类化合物对MC3T3-E1成骨细胞骨保护素(OPG)和核因子κB受体激活因子配体(RANKL)mRNA基因表达的影响.方法:体外培养MC313-E1成骨细胞,分别加入含0mol·L-1、10-8mol·L-1、10-7mol·L-1、10-6mol·L-1刺老苞根皮黄酮类化合物的培养液,48h及96h后分别提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析OPG/RANKL的mRNA的表达,进行半定量分析.结果:培养48h后,与对照组比较,刺老苞根皮黄酮类化合物增强了OPGmRNA的表达,有显著性差异(P<0.05或P<0.01),VOPG/VRANKL比值增大;96h后,刺老苞根皮黄酮类化合物明显增强了OPG mRNA的表达,各浓度组与对照组相比,均有显著性差异(P<0.05或P<0.01),各浓度组VOPG/VRANKL比值增大,有显著性差异(P<0.05或P<0.01).结论:刺老苞根皮黄酮类化合物可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,达到治疗骨质疏松症的目的.
关键词： 刺老苞根皮 黄酮类化合物 MC3T3-E1成骨细胞 OPG RANKL -
刺老苞根皮黄酮类化合物对破骨细胞分化的影响
目的:研究刺老苞根皮黄酮类化合物对体外破骨细胞分化的影响.方法:建立由骨保护素配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)共同细胞因子的小鼠破骨细胞骨髓诱导体系,将不同浓度的刺老苞根皮黄酮类化合物作用于破骨细胞.受试细胞分为对照组、刺老苞根皮黄酮类化合物低剂量组(10-8mol·L-1)、刺老苞根皮黄酮类化合物中剂量组(10-7mol·L-1)和刺老苞根皮黄酮类化合物高剂量组(10-6mol·L-1),并设立空白对照组.7天后取细胞玻片进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,观察破骨细胞并计数;测量抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性以及破骨细胞表面NF-κB活化受体(RANK)mRNA表达量.结果:诱导培养的破骨细胞形态特征明显;刺老苞根皮黄酮类化合物中、高剂量组在细胞数量、TRAP活性上与对照组相比有明显统计学差异(P＜0.05);刺老苞根皮黄酮类化合物各剂量组在(RANK)mRNA表达量上与对照组相比有明显统计学差异(P＜0.05),且呈量效关系.结论:刺老苞根皮黄酮类化合物可以抑制体外培养的破骨细胞分化.
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刺老苞根皮黄酮对大鼠骨折愈合骨质代谢影响
目的 研究刺老苞根皮黄酮对大鼠胫骨骨折模型骨质变化影响.方法 6周龄SD(雌雄各半)大鼠随机分5组,每组10只；刺老苞根皮黄酮高、中、低剂量组(30、20、10 mg/kg)和对照组、模型组,连续灌胃28 d,分别于灌胃第4、7、14、21、28 d进行骨代谢相关参数(碱性磷酸转移酶、骨钙素、羟脯氨酸以及总胶原蛋白)测定.结果 与对照组比较,模型组骨碱性磷酸转移酶(245.7±20.9)U/L、骨钙素(3.12±1.10)U/L、羟脯氨酸(8.69±1.81)μg/mL含量均降低(P＜0.01)；与模型组比较,高剂量刺老苞根皮黄酮组骨折28d骨碱性磷酸转移酶活性(292.3±23.2) U/L、骨钙素(3.88±1.15) U/L、羟脯氨酸(14.01±3.01) μg/mL含量均升高(P＜0.01).结论 刺老苞根皮黄酮可以改善大鼠胫骨骨折骨代谢状况,有利骨折愈合修复.
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刺老苞根皮黄酮对骨折模型大鼠骨质代谢的影响研究
目的 研究刺老苞根皮黄酮对胫骨骨折模型大鼠骨质代谢变化的影响。方法 将50只6周龄SD(雌雄各半)大鼠随机分成5组，即对照组(A组)、模型组(B组)、刺老苞根皮黄酮低剂量组(C组)、刺老苞根皮黄酮中剂量组(D组)、刺老苞根皮黄酮高剂量组(E组)，每组10只。其中刺老苞根皮黄酮低、中、高剂量组给予刺老苞根皮黄酮相应剂量灌胃(分别为10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg)，对照组和模型组以等量的0.9％NaCl溶液灌胃。观察各组灌胃第4天、7天、14天、21天、28天不同时间点其他骨代谢相关参数(碱性磷酸转移酶、骨钙素、羟脯氨酸以及骨盐)变化情况。结果 与对照组比较，模型组不同时间点的骨碱性磷酸转移酶(ALP)、骨钙素、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均降低，差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较，刺老苞根皮黄酮各剂量组除骨折第4天外其他时间点的ALP、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均升高，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；而刺老苞根皮黄酮各剂量组骨钙素的含量在骨折第14天、第21天及第28天升高，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与低剂量组比较，中、高剂量组除骨折第4天外其他时间点的骨碱性磷酸转移酶(ALP)、骨钙素、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均升高，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与中剂量组比较，高剂量组除骨折第4天外其他时间点的骨碱性磷酸转移酶(ALP)、骨钙素、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均升高，差异有统计学意义(P<0.01)。结论 刺老苞根皮黄酮可以改善胫骨骨折大鼠骨代谢状况，有利骨折愈合修复。
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刺老苞根皮总皂苷和总多糖含量测定
目的 对湖北恩施土家族道地药材刺老苞根皮中总皂苷及总多糖含量进行测定.方法 用Flex station3自动化筛选检测系统在400 ～ 900 nm波长处对其总皂苷及总多糖进行扫描,在大吸收波长550,480 nm处分别测定两者含量结果 刺老苞根皮中总皂苷及总多糖的含量分别为3.28％、7.33％,RSD值分别为0.77％、0.46％.结论 作为刺老苞根皮主要物质成分,总皂苷及总多糖含量较高,为该药材治疗骨折愈合机制的研究提供了参考数据.
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刺老苞根皮黄酮对抗骨性关节炎软骨细胞氧化损伤及炎性的影响研究
目的 研究刺老苞根皮黄酮对骨关节炎软骨细胞氧化损伤及炎性的逆转作用.方法 选15只5月龄新西兰兔,采用内侧副韧带、前后交叉韧带切断并切除内侧半月板的Hulth骨性关节炎动物模型制作方法,分离培养软骨细胞,其中模型组分别加入10,20,30 μg/ml刺老苞根皮黄酮低、中、高剂量处理.从第9周开始,采用DCFH - DA法检测细胞内活性氧水平,Griess法测定细胞培养上清中NO、SOD和GSH - Px含量,RT - PCR法检测各组细胞相关炎性因子IL- 1β、诱导型一氧化氮合酶iNOS、转录调节因子p53基因mRNA的表达.结果 与模型组比较,刺老苞根皮黄酮各剂量组细胞内活性氧水平、NaN02含量、IL -1β/GAPDH表达水平、iNOS/GAPDH表达水平、p53/GAPDH表达水平均有所降低,且差异均有统计学意义(P＜0.01),而SOD、GSH - Px均有所升高,且差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 剌老苞根皮黄酮对骨关节炎软骨细胞的氧化损伤及炎性有逆转作用,具有研发成为骨性关节炎治疗药物的潜能.
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刺老苞根皮黄酮类化合物对抗大鼠泼尼松性骨质疏松的作用研究
目的 研究刺老苞根皮黄酮类化合物对泼尼松致大鼠骨质疏松的对抗作用.方法 将50只大鼠随机分成正常对照组、泼尼松模型组和刺老苞根皮黄酮类化合物高、中、低(10,20,30 mg/kg)剂量组,每组10只.分别灌胃相应药物,1次/d,连续8周后取血清检测生化指标,对骨进行组织切片检查,长度、宽度以及骨质的测量.结果 泼尼松模型组大鼠股骨重量、尺骨骨羟脯氨酸和骨钙含量比正常对照组明显降低,胫骨骨髓腔中脂肪组织增多(P<0.01),血浆胆固醇(TG)含量上升、碱性磷酸酶(ALP)和高密度脂蛋白(HDL)含量下降(P<0.01).刺老苞根皮黄酮类化合物组能有效提高骨的重量和骨质的含量(P<0.01),减少骨髓腔中脂肪的含量,升高碱性磷酸酶和高密度脂蛋白含量(P<0.01).结论 泼尼松可抑制大鼠的骨生长及引起骨丢失,而刺老苞根皮黄酮类化合物可有良好的对抗作用.
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刺老苞根皮干预大鼠骨折模型矿物元素含量变化
为探讨土家族药刺老苞根皮对大鼠骨折模型胫骨矿物元素的影响,将250只SD大鼠(雌雄各半)随机分成对照组、模型组和刺老苞根皮黄酮高、中、低(30、20、10 mg·kg-1)剂量组,每组10只,分别灌胃相应药物,每日1次,连续4周,用电感耦合等离子体质谱法(ICP - MS)测定了给药第4天、第7天、第14天、第21天和第28天不同时间点大鼠胫骨中Ca、Mg、P、Mn、Cu、Se和Zn7种矿物元素的含量.结果表明,经灌喂刺老苞根皮黄酮的骨折模型大鼠胫骨中上述7种矿物元素含量均有不同程度的提高,呈现一定的剂量关系.为土家药利用刺老苞根皮治疗骨折不愈类疾病从微量元素的角度提供有用数据.
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刺老苞根皮总黄酮及微量元素含量的分析研究
采用紫外分光光度法测定了湖北恩施道地产土家族药刺老苞根皮中总黄酮的含量,在200～400 nm波长范围内扫描,大吸收波长为λ=267.0 nm.原子吸收分光光度法测定了K,Na,Ca,Mg,Fe,Se,Ga,Ni,Mn,Cu和Zn 11种微量、常量元素的含量.结果显示刺老苞根皮中含有丰富的微量元素和较高的总黄酮,微量元素含量较高的是Ca,Mg,Se,Ga,Cu和Zn元素.实验结果为探讨刺老苞根皮中总黄酮含量与微量元素的关系及研究刺老苞根皮中微量元素与治疗骨伤类痰病的关系提供了有用的数据.
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龙牙楤木皂苷Ⅳ对原代成骨细胞分化和矿化的影响
目的 研究龙牙楤木皂苷Ⅳ (Tarasaponin Ⅳ)对原代成骨细胞的分化及矿化的影响.方法 通过消化SD乳鼠颅盖骨,获得原代前成骨细胞,体外诱导培养并鉴定;采用MTT比色法检测Tarasaponin Ⅳ(10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 μg/mL)作用于前成骨细胞的适宜质量浓度范围;用低、中、高浓度(0.5、5、50 μg/mL) Tarasaponin Ⅳ对成骨细胞进行干预,培养4d后,试剂盒法进行细胞上清中碱性磷酸酶(ALP)活性测定;培养14d后,按茜素红S染色试剂说明对细胞进行钙化结节染色.结果 与对照组比较,Tarasaponin Ⅳ各浓度组均能明显提高前成骨细胞活性(P＜0.05、0.01),0～60 μtg/mL内细胞生存率呈递增趋势.与对照组比较,Tarasaponin Ⅳ低、中、高浓度组细胞上清ALP活性均显著下降(P＜0.01),中、高浓度组细胞矿化结节数目显著增多(P＜0.01),且均呈剂量相关性.结论 TarasaponinⅣ可以促进前成骨细胞生长,增强成骨细胞矿化过程.
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刺老苞根皮水提物对成骨细胞TGF-β/BMPs信号通路的影响
目的 研究刺老苞根皮水提物对成骨细胞TGF-β/BMPs信号通路的影响.方法 建立大鼠骨折模型,随机分为模型组,刺老苞根皮水提物低、中、高剂量(3.6、1.8、0.9 g/kg)组,ig给药7d后腹主动脉取血,分离血清;培养大鼠原代成骨细胞,经碱性磷酸酶染色、茜素红染色鉴定合格后,分别以对应组别的动物血清连续培养48 h,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting技术分别检测各组细胞中骨形态发生蛋白质-2(BMP-2)、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad家族相关蛋白1、2(Smad-1、Smad-2)mRNA和蛋白表达.结果 与模型组比较,刺老苞根皮水提物不同浓度的含药血清组BMP-2、TGF-β、Smad-1 mRNA表达均显著升高(P＜0.05、0.01),中、高剂量含药血清组Smad-2 mRNA表达显著升高(P＜0.05);低、中、高剂量含药血清组的BMP-2、TGF-β、Smad-l、Smad-2蛋白表达均显著升高(P＜0.05).结论 刺老苞根皮水提物通过上调TGF-β/BMPs信号传导通路中的BMP-2、TGF-β、Smad-1、Smad-2表达,促进成骨细胞增殖.
关键词： 刺老苞根皮 水提物 成骨细胞 TGF-β/BMPs信号通路 -
刺老苞根皮总提物对去势大鼠骨质疏松的影响
目的 研究刺老苞Araliae Echinocaulis Radicis et Cortex根皮总提取物对去势雌性大鼠骨质疏松症的影响.方法 75只SD雌性大鼠随机分成对照组、假手术组、模型组、仙灵骨葆胶囊组和刺老苞根皮总提取物组,每组15只.经去势手术2周后,仙灵骨葆胶囊组、刺老苞根皮总提取物组ig相应药物悬液(20 mg/kg),每天1次,连续12周.观察大鼠给药前后体质量变化;试剂盒法检测血清总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、碱性磷酸酶(ALP)水平;取右侧股骨检测骨密度、骨微量元素和羟脯氨酸(Hyp)水平;取左侧股骨进行骨力学测定.结果 与对照组比较,模型组大鼠血清TC、LDL-C水平均显著升高(D＜0.01),血清HDL-C、ALP、骨微量元素(钙、磷、镁、锰)、Hyp水平,骨密度、骨力学指标均显著下降(P＜0.01);与模型组比较,刺老苞根皮总提取物组与仙灵骨葆胶囊组TC、LDL-C水平均显著降低(P＜0.05),血清HDL-C、ALP、骨微量元素(钙、磷、镁、锰)、Hyp水平,骨密度、骨力学指标均显著升高(P＜0.05).结论 刺老苞根皮总提取物有效改善去势雌性大鼠骨质疏松症的发生.
