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活化蛋白1在高糖诱导MC3 T3-E1成骨细胞凋亡中的作用
目的：观察活化蛋白1（AP-1）在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的 MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组，实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组（高糖组）、P38MAPK-shRNA慢病毒转染组、 P38MAPK 信号转导阻断剂组、无关 shRNA 转染组、 AP-1抑制剂SP600125组。采用TUNEL和流式细胞术检测细胞凋亡，用EMSA检测MC3T3-E1细胞AP-1的活性。结果与正常对照组相比，高糖组 MC3T3-E1成骨细胞 P38MAPK 表达、 AP-1活性、细胞凋亡显著增加。P38MAPK-shRNA慢病毒转染组和P38MAPK信号转导阻断剂组MC3T3-E1细胞AP-1活性较高糖组分别下降57.9％（P＜0.01）和45.6％（P ＜0.05）。 AP-1抑制剂组 MC3T3-E1细胞凋亡率较高糖组下降39.7％（ P＜0.01）。结论高糖通过激活P38MAPK增加AP-1活性，诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡，抑制AP-1活性后高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡显著下降。
关键词： 活化蛋白1 MC3T3-E1成骨细胞 RNA干扰 细胞凋亡 -
碳酸化羟基磷灰石表面成骨活性的研究
目的:探讨碳酸化羟基磷灰石(carbonated hydroxyapatite, CHA)表面的成骨活性.方法:在CHA直接培养成骨细胞MC3T3-E1,观察细胞的黏附和增值数目,并检测碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原mRNA的表达,并以骨水泥(PMMA)作为对照.结果:MC3T3-E1细胞在CHA表面黏附和增值数目明显高于PMMA,并且ALP活性和Ⅰ型胶原mRNA表达水平均高于PMMA.结论:成骨细胞可直接在CHA表面黏附、增殖和并表达较高的成骨活性,可能是一种较为理想的骨缺损修复材料.
关键词： 碳酸 羟基磷灰石 MC3T3-E1成骨细胞 -
胰岛素样生长因子-1对MC3T3-E1细胞增殖及I型胶原蛋白合成的影响
目的 观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养的小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞增殖及I型胶原蛋白合成的影响,探讨IGF-1对骨代谢可能的影响机制.方法 不同浓度rhIGF-1刺激体外培养的MC3T3-E1,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力.结果 一定浓度IGF-1能明显增加成骨细胞数量(P<0.05),在1 ng/mL～100 ng/mL这种作用与IGF-1的浓度呈正相关;经rhIGF-1的刺激,成骨细胞I 型胶原蛋白的表达明显高于对照组(P<0.05);半定量RT-PCR显示在rhIGF-1干预48h后,I型胶原蛋白mRNA表达较对照组明显增加.结论 IGF-1 对MC3T3-E1细胞有明显的促增殖作用,在0.1 ng/mL～100 ng/mL之间呈浓度依赖性,IGF-1 能促进成骨细胞I 型胶原蛋白的合成及其mRNA的表达.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 MC3T3-E1成骨细胞 增殖 I型胶原蛋白 -
IGF-1对MC3T3-E1细胞凋亡及凋亡调控蛋白Bax、Bc1-2表达的影响
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对小鼠前成骨样MC3T3*E1细胞凋亡基因相关蛋白Bax/BEl-2表达的影响.方法 MC3T3-E1细胞分组培养,应用4个浓度的IGF-1(1 ng/mL、10 ng/mL、30 ng/mL、50 ng/mL)干预24 h.观察MC3T3-E1细胞动态生长状况;流式细胞技术检测细胞凋亡率;免疫组织化学法检测凋亡蛋白Bax/Bc1-2的表达水平.结果 与正常血清对照组相比,无血清对照组MC3T3-E1细胞凋亡率增加(P<0.05);与无血清组相比,IGF-1组MC3T3一E1细胞凋亡率降低(P<0.05),Bax表达减弱(P<0.05),Bc1-2表达增强(P<0.05);各浓度组间比较,(1-50)ng/mL浓度范围内MC3T3-E1细胞凋亡率随IGF-1浓度加大而逐渐降低(P<0.05),Bax表达逐渐减弱(P<0.05),50ng/mL浓度组Bc1-2表达明显增强(P<0.01),Bc1-2/Bax灰度比与细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.917,P<0.01).结论 一定浓度的IGF-1同时调节Bax和Bc1-2表达,抑制无血清培养诱导的细胞凋亡:并存在刺量依赖性效应.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 MC3T3-E1成骨细胞 无血清 凋亡 -
土家传统药刺老苞总皂苷对H2O2诱导的MC3T3-E1成骨细胞损伤改善
目的:在H2O2胁迫下,研究刺老苞总皂苷增强MC3T3-E1成骨细胞抗自由基损伤的作用.方法:用H2O2作用MC3T3-E1成骨细胞,建立自由基损伤细胞模型.培养的成骨细胞分为对照组、模型组、刺老苞总皂苷低剂量组(1×10-8mol/L)、刺老苞总皂苷中剂量组(1×10-7mol/L)和刺老苞总皂苷高剂量组(1×10-6mol/L).测定不同处理组细胞活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性自由氧(reactive oxygen species,ROS)含量、脂质过氧化物(lipid oxygen,LPO)含量,同时利用荧光偏振法测定细胞膜流动性.结果:模型组细胞活力、SOD活性、细胞膜流动性均比不同刺老苞总皂苷组有显著降低(P＜0.01),而ROS含量、LPO含量均比不同刺老苞总皂苷组有显著升高(P＜0.01).结论:H2O2摄入会导致MC3T3-E1成骨细胞的氧化损伤,而刺老苞总皂苷可以预防或降低此类损伤对细胞的影响.
关键词： MC3T3-E1成骨细胞 自由基 刺老苞土家药 总皂苷 -
刺老苞根皮黄酮类化合物对MC31E-E1成骨细胞OPG和RANKL mRNA基因表达影响的实验研究
目的:探讨刺老苞根皮黄酮类化合物对MC3T3-E1成骨细胞骨保护素(OPG)和核因子κB受体激活因子配体(RANKL)mRNA基因表达的影响.方法:体外培养MC313-E1成骨细胞,分别加入含0mol·L-1、10-8mol·L-1、10-7mol·L-1、10-6mol·L-1刺老苞根皮黄酮类化合物的培养液,48h及96h后分别提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析OPG/RANKL的mRNA的表达,进行半定量分析.结果:培养48h后,与对照组比较,刺老苞根皮黄酮类化合物增强了OPGmRNA的表达,有显著性差异(P<0.05或P<0.01),VOPG/VRANKL比值增大;96h后,刺老苞根皮黄酮类化合物明显增强了OPG mRNA的表达,各浓度组与对照组相比,均有显著性差异(P<0.05或P<0.01),各浓度组VOPG/VRANKL比值增大,有显著性差异(P<0.05或P<0.01).结论:刺老苞根皮黄酮类化合物可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,达到治疗骨质疏松症的目的.
关键词： 刺老苞根皮 黄酮类化合物 MC3T3-E1成骨细胞 OPG RANKL -
含硅二氧化钛纳米管层的体外生物活性
背景:钛合金长期以来被用作可植入的生物材料,通过在其表面制备二氧化钛纳米管层可提高材料表面与骨的接触面积,然而将硅元素注入纳米管层表面是否可以进一步提高材料生物活性,有待进一步研究.目的:探讨钛表面含硅二氧化钛纳米管层对成骨细胞MC3T3-E1细胞活性的影响,为医用钛金属生物管层的改良提供实验依据.方法:利用阳极氧化法技术在钛表面制备二氧化钛纳米管层,采用等离子体浸没离子植入和沉积法,将硅离子沉积在二氧化钛纳米管层表面(实验组),以二氧化钛纳米管层为阳性对照组,光滑钛片作为阴性对照组.用扫描电镜观察各组形貌,X射线衍射仪测定各组元素组成.3组管层表面分别种植MC3T3-E1细胞,检测第1,3及5天各组细胞黏附铺展、增殖情况,第7天各组细胞相关基因的表达及第3,4周各组细胞的钙沉积情况.结果与结论:①扫描电镜下显示硅元素的加入没有改变管层的表面形貌,且第1天仅实验组细胞上可以观察到有丝状伪足扩展,第3天丝状伪足活性增加并开始合并,第5天丝状网络结构较其他两组明显增多;②X射线衍射仪显示实验组出现了对应为硅元素特征峰;③MTS法显示培养第1,3天,黏附于实验组及阳性对照组表面的细胞数量比阴性对照组显著增多,第5天,实验组上的细胞增殖显著高于对其他2组(P<0.05);④实时定量RT-PCR检测结果显示7 d时实验组中成骨相关基因Ⅰ型胶原蛋白,碱性磷酸酶,Runx2,骨钙素和骨桥蛋白基因表达均高于对照组(P<0.05);⑤第3,4周实验组和阳性对照组上的细胞与阴性对照组相比钙矿物结节形成明显升高,第4周含实验组沉积的钙矿物比其他2组显著增加(P<0.05);⑥结果提示,二氧化钛纳米管层可以通过等离子体浸没离子植入和沉积法加载硅离子并具备良好的成骨活性.
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土鳖虫醇提物制备方法及其制备物对MC3T3-E1成骨细胞促增殖作用活性评价
目的:研究土鳖虫佳醇提物制备工艺.方法:使用浸渍法和匀浆法用50％乙醇以浸提时间(4h～4 d)、温度(4～60 ℃)、料液比(4～12倍)和是否搅拌为因素,以提取物总获得率和蛋白获得率为指标提取土鳖虫;使用正交试验法优化浸渍法和匀浆法的提取条件;使用MTT法体外评价两种制备方法所得土鳖虫醇提物对MC3T3-E1成骨细胞促增殖作用的影响以探索土鳖虫佳醇提物的制备工艺.结果:搅拌因素对两种方法制得提取物的获得率均影响甚微;在不搅拌的状态下浸渍法制得的提取物和总蛋白获得率随温度升高而增加,料液比对匀浆法物质获得率影响较大;正交试验优选浸渍法佳提取方案为以10倍量料液比在60℃条件下静置4d,其总获得率为11％;匀浆法佳方案为:以8倍量料液比在50℃条件下静置12 h,其总获得率为10.2％;匀浆法和浸渍法提取土鳖虫的总获得率无统计学差异,但匀浆法制得的提取物对MC3T3-E1成骨细胞的促增殖作用更明显,当用药浓度均为0.2 mg/mL时,匀浆法和浸渍法制备物的促细胞增殖率分别达到171.59％和48.45％.结论:优化后的两种方法制备物获得率差异不显著,但匀浆法所得提取物对MC3T3-E1成骨细胞的促增殖作用优于浸渍法.
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格列苯脲在高糖环境下对MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响
以1、10、20 μmol/L格列苯脲处理MC3T3-E1细胞48 h后,利用CCK-8比色法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测凋亡率,实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(COL-1)、骨桥蛋白(OPN)的表达.Western印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达.结果显示与对照组相比,随着格列苯脲浓度的升高,MC3T3-E1细胞的增殖率逐渐上升(P＜0.05),凋亡率逐渐下降(P＜0.05),COL-1、OPN mRNA和Bcl-2蛋白表达逐步升高(均P＜0.05),Bax蛋白的表达逐步下降(P＜0.05).提示格列苯脲能够在高糖环境下促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化,并抑制其凋亡,且在一定范围内具有浓度依赖性.
关键词： 格列苯脲 MC3T3-E1成骨细胞 增殖 分化 凋亡 -
慢病毒介导p38MAPK基因沉默对高糖诱导成骨细胞凋亡的影响
目的 观察p38丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)在高糖诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用,并探讨其对凋亡相关信号分子caspase-3、bax及bcl-2表达的影响.方法 构建靶向p38MAPK的shRNA慢病毒载体,将体外培养的MC3T3-E1成骨细胞分为正常对照组(A组)、高糖组(B组)、p38MAPK-shRNA慢病毒转染组(C组)、信号转导阻断剂组(D组)和无关shRNA转染组(E组).RT-PCR检测细胞p38MAPK mRNA的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测p38MAPK、p-p38 MAPK、caspase-3、bax、bcl-2蛋白水平,透射电镜观察细胞超微结构.结果 构建靶向p38MAPK的shRNA慢病毒载体,并成功导入MC3T3-E1成骨细胞.与高糖组和无关转染组相比,p38MAPK-shRNA转染能显著抑制高糖诱导的MC3T3-E1细胞p38MAPK过度活化,明显减少细胞的凋亡(P＜0.01);同时,p38MAPK-shRNA转染及p38MAPK阻断剂明显降低MC3T3-E1细胞中p38MAPK、p-p38MAPK、caspase-3及促凋亡基因bax蛋白表达,上调凋亡抑制基因bcl-2,与高糖组和无关转染组相比,差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).结论 慢病毒介导p38MAPK靶向RNA干扰可通过抑制p38MAPK 信号通路的活化,降低p-p38MAPK、caspase-3、bax表达,上调bcl-2表达,终抑制高糖所诱导的MC3T3-E1成骨细胞的凋亡.
关键词： p38丝裂原活化的蛋白激酶 MC3T3-E1成骨细胞 RNA干扰 高糖 细胞凋亡 -
6-姜酚对MC3T3-E1成骨细胞增殖及分化的影响
目的 研究6-姜酚对MC3T3-E1成骨细胞增殖及分化的影响.方法 取MC3T3-E1成骨细胞培养,培养基加入含有1×10-9、1×10-8、1 ×lO-7 mol/L的6-姜酚及15 mmol/L的高浓度葡萄糖作为实验组,仅加入15 mmol/L的高浓度葡萄糖作为对照组,MTT法检测MC3T3-E1成骨细胞增殖情况,ELISA法检测细胞中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(bone gla protein,BGP)活性.结果 1×10-9～1 × 10-7mol/L的6-姜酚均能够显著地增加15 mmol/L高糖作用下的MC3T3-E1细胞生长并提升ALP活性,并能够明显地增强细胞骨钙素的分泌,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 6-姜酚能促进体外培养的MC3T3-E1成骨细胞增殖与骨向分化,这可能为其防治骨质疏松的机制之一.
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克老素抑制地塞米松诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡
目的 探究体外转染克老素(Klotho,KL)基因对地塞米松(dexamethason,DEX)诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响.方法 用携带KL基因的重组腺病毒(Ad-KL)及携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP)感染细胞,并建立DEX诱导凋亡的细胞模型.运用荧光倒置显微镜观察重组腺病毒的转染效果,qPCR 与 Western blot 法分析 KL mRNA和蛋白表达情况;CCK-8法检测不同浓度DEX作用于MC3T3-E1细胞后的存活率及各研究组细胞的生存情况;流式细胞仪分析各研究组细胞的凋亡率;qPCR 与 Western blot分析凋亡标志物的 mRNA、蛋白表达;免疫荧光分析caspase-9的荧光蛋白表达情况.结果 重组腺病毒成功感染MC3T3-E1成骨细胞,KL组和KL+DEX组的KL mRNA与蛋白表达量较非转染组明显升高.CCK-8法检测出DEX的适宜干预浓度为2.0 mmol·L-1.DEX组、GFP+DEX组较其余组细胞存活率明显降低、凋亡率明显增加,Bax、Bcl-2的mRNA与蛋白表达分别表现出增加和降低趋势;KL组细胞存活率、凋亡率,以及 Bcl-2、Bax mRNA 与蛋白表达较DEX组及KL+DEX组均明显改善.结论 大剂量DEX的运用能够诱发MC3T3-E1成骨细胞凋亡,上调KL表达具有抵抗DEX诱导成骨细胞凋亡的作用,提示上调KL表达可改善糖皮质激素诱导性骨质疏松,为大剂量使用糖皮质激素所致医源性骨质疏松的治疗提供新的靶点.
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金属钴、铬离子对成骨细胞增殖及I型胶原蛋白表达功能的影响
目的：观察钴、铬离子对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)的细胞毒性及I型胶原蛋白合成的影响，探讨钴、铬离子对骨代谢功能的影响机制。方法钴、铬离子分别与小鼠成骨样MC3T3-E1细胞体外培养，噻唑蓝(MTT)法测定细胞活力。 ELISA法检测培养上清液中I型胶原蛋白含量、RT-PCR检测成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达。结果 MTT结果显示，与对照组相比，钴、铬离子能明显抑制成骨细胞的细胞活力；成骨细胞暴露在钴铬离子下，与对照组相比，24h、48h后：I型胶原蛋白的分泌分别下降45.3%、49.2%（P<0.05）；I型胶原蛋白mRNA表达分别下降26.8%、32.6%（P<0.05）。结论钴、铬离子可抑制成骨细胞I型胶原蛋白的分泌及其mRNA的表达，提示其对MC3T3-El细胞可能存在细胞毒性。
关键词： 钴 铬离子 MC3T3-E1成骨细胞 I-型胶原蛋白 -
新型根管封闭剂对MC3T3-E1成骨细胞的细胞毒性评估
目的:评估新型根管封闭剂RealSeal sealer、GuttaFlow对MC3T3- E1成骨细胞的细胞毒性,并与传统的AH Plus比较.方法:制备RealSeal sealer、GuttaFlow和AH Plus(固化7d)的材料浸提液,倍比稀释为4种浓度:100%、50%、25%、12.5%；MC3T3-E1细胞于其中分别培养24h和72h,CCK-8法检测细胞存活率,评价不同材料的细胞毒性.结果:在实验期内,RealSeal sealer组的细胞存活率显著低于AH Plus、GuttaFlow(P＜0.05),AHPlus、GuttaFlow和阴性对照组间无显著差异.结论:在本实验条件下,RealSeal sealer对MC3T3一E1成骨细胞的毒性强,而GuttaFlow和AH Plus几乎无细胞毒性.
关键词： 根管封闭剂 细胞毒性 MC3T3-E1成骨细胞 -
新疆马鹿角提取物对MC3T3-E1成骨细胞RANKL/OPGmRNA表达的影响
目的 研究新疆马鹿角提取物对MC3T3-E1成骨细胞核因子-kβ受体活化因子配体(RANKL)/护骨素(OPG)mRNA表达的影响.方法 体外培养MC3T3-E1成骨细胞,分别加入含不同剂量新疆马鹿角提取物的培养液,72 h后分别提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测RANKL/OPG mRNA表达.结果 培养72 h后RANKL/OPG mRNA表达的灰度值(0.312±0.0710),与对照组(2.017±0.1320)比较,新疆马鹿角提取物呈浓度依赖性降低RANKL mRNA的表达,增加OPG mRNA的表达,各剂量组RANKL/OPG mRNA吸光度比值降低.结论 新疆马鹿角提取物可能通过调节成骨细胞RANKL/OPG的基因表达,而抑制破骨细胞介导的骨吸收.
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淫羊藿含药血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖及分化的影响
目的:研究淫羊藿含药血清对体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化的影响.方法:大鼠灌胃给予淫羊藿后制备含药血清.取MC3T3-E1成骨细胞,分别加入正常血清(对照组)和含10％、15％、20％的淫羊藿含药血清(淫羊藿含药血清低、中、高浓度组)的培养基培养,MTT法检测MC3T3-E1成骨细胞增殖情况,ELISA法检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)骨钙素(BGP)活性.结果:与对照组比较,在24、48、72 h时间点淫羊藿含药血清高、中、低浓度组MC3T3-E1成骨细胞增殖程度显著升高(P＜0.05)；与对照组比较,在24、48、72h时间点淫羊藿含药血清高、中、低浓度组ALP活性显著增强,在6、9、12d时间点淫羊藿含药血清高、中、低浓度组BGP活性显著增强(P＜ 0.05).结论:淫羊藿能促进体外培养的MC3T3-E1成骨细胞增殖与骨向分化.
关键词： 淫羊藿 含药血清 MC3T3-E1成骨细胞 增殖 分化
