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德国小蠊DNA的提取方法
德国小蠊DNA的提取通常采用破碎细胞方法,包括匀浆法、液氮破碎法、超声波法及生殖细胞冰片法.在提取DNA过程中破碎细胞这一步非常重要,它直接影响到下面的提取步骤和DNA的提取质量.为了提取高质量的DNA,我们对德国小蠊的DNA提取方法做了改进,该方法能相对快速、简洁、方便地提取高质量的德国小蠊基因组DNA.
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高效分离与裂解脑线粒体的方法
在人和动物的整个生命活动中,线粒体是真核细胞内的重要细胞器,在细胞活动中起着非常关键的作用.越来越多的证据[1-4]表明线粒体功能障碍在神经退行性疾病、脑卒中等的疾病发病过程中起着重要作用.因此提取分离高纯度、具有活性的脑线粒体是进一步深入研究线粒体功能变化的关键[5-6].脑组织内含有的脂类很多,用一般传统的蔗糖-差数离心法提取脑线粒体,往往得不到大量高纯度的线粒体,因而限制了许多研究,经比较作者发现美国GENMED(杰美)公司的试剂盒可以达到要求,但说明书仅笼统地作了介绍,在实际的实验操作还存在诸多不便.本实验室经过多次实验,对杰美公司的试剂盒说明书所介绍的操作步骤加以改进,摸索出了一套行之有效的提取分离、保存高浓度小鼠脑线粒体的方法,即组织匀浆法分离裂解脑线粒体的方法,现将具体的操作步骤介绍如下.
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局部外用酞丁安软膏后皮内浓度测定
目的 测定试验动物皮肤给药后的皮内药物浓度,观察受试制剂的经皮渗透及进入皮肤的药物水平.方法 试验乳猪局部外用酞丁胺软膏后,采用匀浆法结合高效液相色谱测定皮内药物浓度.结果 酞丁安软膏外用于皮肤后,有一定量的经皮吸收和渗透,但是吸收量相对较低.结论 本试验结果可为酞丁安人体皮肤药代动力学研究提供参考.
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土鳖虫醇提物制备方法及其制备物对MC3T3-E1成骨细胞促增殖作用活性评价
目的:研究土鳖虫佳醇提物制备工艺.方法:使用浸渍法和匀浆法用50％乙醇以浸提时间(4h～4 d)、温度(4～60 ℃)、料液比(4～12倍)和是否搅拌为因素,以提取物总获得率和蛋白获得率为指标提取土鳖虫;使用正交试验法优化浸渍法和匀浆法的提取条件;使用MTT法体外评价两种制备方法所得土鳖虫醇提物对MC3T3-E1成骨细胞促增殖作用的影响以探索土鳖虫佳醇提物的制备工艺.结果:搅拌因素对两种方法制得提取物的获得率均影响甚微;在不搅拌的状态下浸渍法制得的提取物和总蛋白获得率随温度升高而增加,料液比对匀浆法物质获得率影响较大;正交试验优选浸渍法佳提取方案为以10倍量料液比在60℃条件下静置4d,其总获得率为11％;匀浆法佳方案为:以8倍量料液比在50℃条件下静置12 h,其总获得率为10.2％;匀浆法和浸渍法提取土鳖虫的总获得率无统计学差异,但匀浆法制得的提取物对MC3T3-E1成骨细胞的促增殖作用更明显,当用药浓度均为0.2 mg/mL时,匀浆法和浸渍法制备物的促细胞增殖率分别达到171.59％和48.45％.结论:优化后的两种方法制备物获得率差异不显著,但匀浆法所得提取物对MC3T3-E1成骨细胞的促增殖作用优于浸渍法.
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超声破碎法及匀浆法提取鹿茸多肽的比较研究
目的 探讨从鹿茸中提取鹿茸多肽的佳提取方法.方法 分别采用匀浆法和超声破碎法在新鲜鹿茸中提取鹿茸多肽(velvet antler polypeptiddes,VAP),对提取时间及提取后鹿茸多肽的蛋白质浓度进行比较分析.结果采用胶体磨匀浆法所得数据为:当匀浆6h后,提取得到的鹿茸多肽蛋白质浓度为0.42 mg/mL;采用超声破碎的方法时,当超声40min时,鹿茸多肽蛋白质浓度为1.61 mg/mL,其蛋白质浓度是应用匀浆法提取时的4倍.结论 2种方法相比,采用超声破碎的方法提取鹿茸多肽,不仅可以节约时间,而且提高了鹿茸多肽的提取量,是较为理想的鹿茸多肽的提取方式.
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两种制备供试液的方法对细菌数检测的比较
目的：采用匀浆仪与研钵分别制备药品供试液对检测细菌数进行了对比试验。方法：匀浆法和研磨法。结果：匀浆法测定细菌数大于或相当于研磨法。结论：匀浆法优于研磨法；前者准确、简便、省时、省力。
