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TRPV4离子通道在RANKL诱导的破骨细胞分化中的作用
破骨细胞(osteoclast,OC)来源于血液单核-巨噬细胞系统,其以多核细胞形式发挥作用.破骨细胞在分化过程中受多种信号通路的调控,其中,由核因子受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)及其配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)以及骨保护素(osteoprotegefin,OPG)组成的RANK-RANKL-OPG系统起到关键作用,而该通路的调控效应主要通过Ca2-NFATc1信号轴实现.瞬时感受器电位香草酸受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)是瞬时感受器电位通道(transient receptor potential,TRP)超家族的成员,该通道介导的钙离子内流维持了破骨细胞内钙离子浓度,确保了RANKL介导的NFATc1调控的基因转录,在破骨细胞的终末期分化中发挥着关键作用.因此,全面了解TRPV4离子通道将有助于临床更好地分析各种骨代谢性疾病的病因及发病机制,进而为治疗提供理论依据.
关键词： 破骨细胞 瞬时感受器电位香草酸受体4 钙离子 -
TRPV4和PKCε在糖尿病大鼠背根神经节神经元中的表达
目的 探讨糖尿病不同时期蛋白激酶Cε(PKCε)和瞬时性受体电位通道4(TRPV4)在大鼠DRG神经元中的表达及意义.方法 采用经典糖尿病模型,检测不同病程糖尿病大鼠DRG神经元中PKCε和TRPV4的表达.用免疫荧光方法,观察背根神经节(DRG)在痛性糖尿病神经病变(PDN)过程中PKCε和TRPV4阳性细胞的变化.结果 PKCε和TRPV4在正常大鼠的背根神经节中均有表达.在糖尿病大鼠中,PKCε和TRPV4的表达水平都出现先升高后降低的现象.其中,PKCε在糖尿病第4周的表达水平高,TRPV4在糖尿病第1周的表达水平高.结论 高糖慢性刺激可导致DRG神经元PKCε和TRPV4的表达改变,在短期内有明显的增加,但2者高峰出现的时间不同.TRPV4的增加依赖于PKCε,而后者错后的高峰说明其参与更多的细胞内机制.
关键词： 糖尿病 蛋白激酶Cε 瞬时感受器电位香草酸受体4 -
不同糖浓度中大鼠DRG神经元相关蛋白表达及Ca2+浓度的测定
目的 观察高糖对背根神经节(DRG)中瞬时感受器电位香草酸受体4(TRPV4)和蛋白激酶Cε(PKCε)的表达以及细胞内Ca2+浓度的影响,探讨其在糖尿病大鼠神经病理性疼痛形成中的作用机制.方法 培养的新生大鼠DRG神经元分成正常对照组(C组)、中糖组(M组)和高糖组(H组).48 h后通过蛋白质免疫印迹法测定DRG神经元TRPV4和PKCε的表达水平,并通过共聚焦显微镜测定DRG神经元[Ca2+]i的水平.结果 TRPV4、PKCε蛋白的表达上调且呈浓度依赖性.C组、M组、H组TRPV4蛋白分别为0.33±0.05、3.20±0.40和7.69±0.60; PKCε蛋白分别为0.88±0.04、1.08±0.08和1.97±0.35.在TRPV4激动剂4α-PDD的作用下,与C组比较,H组[Ca2+]i显著升高(P＜0.05),且呈浓度依赖.结论 高糖可以上调DRG神经元中TRPV4、PKCε蛋白的表达,增加神经元内Ca2+浓度.TRPV4、PKCε对DRG神经元内Ca2+起到了协同调控的作用.
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瞬时感受器电位香草酸受体4型通道蛋白在气道压力诱导大鼠气道黏液高分泌中的作用
目的 探讨机械通气产生的气道压力对大鼠气道黏液高分泌的影响及机制.方法 48只SD大鼠分为4组,实施麻醉和气管切开后接小动物呼吸机进行机械通气.①对照组(8只):大鼠气管插管后自主呼吸;②机械通气组:对大鼠采用压力控制通气模式机械通气,根据气道压力水平再分10、20、30 cmH2O 3个亚组,每个亚组8只大鼠,机械通气6 h;③钌红干预组(8只):施加机械通气前鼠尾静脉注射瞬时感受器电位香草酸受体4型通道蛋白(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)非特异性阻断剂钌红(ruthenium red,RR)进行预处理;④4α-PDD干预组(8只):机械通气前鼠尾静脉注射4-α-佛波醇-12,13-二癸酸(4-α-Phorbol-12,13-didecanoate,4α-PDD) 进行预处理.实验完毕后收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本.采用ELISA法检测BALF中MUC5AC蛋白含量,RT-PCR法检测大鼠肺组织MUC5AC mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,机械通气组MUC5AC在蛋白及转录水平表达均增加,呈压力依赖性.30 cmH2O 亚组MUC5AC蛋白及mRNA转录水平分别为[(0.71±0.10)、(6.23±0.54)]明显高于对照组[(0.29±0 05)、(1.68±0.35)](P<0.01).在30 cmH2O压力水平下MUC5AC的表达增加可被RR干预减弱[(0.41±0.06)、(4 15±0 22)](P<0.05),被4α-PDD干预增强[(1.12±0.09)、(8.47±0.35)](P<0.05).结论 机械通气产生的气道压力可以通过作用于TRPV4诱导MUC5AC表达增加,这可能是压力诱导气道黏液高分泌的调节机制之一.
关键词： 黏蛋白类 机械通气 瞬时感受器电位香草酸受体4 气道 大鼠
