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电针干预痛转化效应及其对背根神经节中蛋白激酶Cε 表达的影响
目的:观察电针对痛觉敏化诱发大鼠机械缩足反射阈值(MWT)及腰椎背根神经节(DRG)中蛋白激酶Cε(PKCε)表达的影响,探讨电针干预痛转化效应的机制.方法:第1部分:SD大鼠随机分为空白组、假敏化组、敏化组,每组6只.于大鼠左后足足底皮下注射1％ 角叉菜胶100 mL,7 d后于该足足背注射100 ng/25 mL前列腺素E 2(PGE 2)建立痛转化模型.分别测量大鼠造模前,第1次注射后4、24、48、72 h和7 d,及第2次注射后1、4、24、48 h患侧足趾MWT.第2部分:SD大鼠随机分为假敏化组、敏化组、电针组、假电针组,每组6只.造模方法同第1部分.电针组于第1次注射后开始电针双侧"足三里""昆仑"穴,每次30 min,1次/d,共10 d.检测MWT时间点同第1部分.Western blot法检测第2次注射后48 h患侧DRG中PKCε蛋白表达.结果:与假敏化组相比,敏化组角叉菜胶注射后4、24、48 h,PGE 2注射后4、24、48 h患侧足底MWT显著降低(P<0.01);与敏化组相比,电针可以显著提升角叉菜胶注射后24、48、72 h及PGE 2注射后24、48 h患侧足底MWT(P<0.05,P<0.01),而假电针无此作用(P>0.05).与假敏化组相比,敏化组腰椎DRG中PKCε表达增多(P<0.01);与敏化组相比,电针组腰椎DRG中PKCε表达减少(P<0.01),而假电针组无明显变化(P>0.05).结论:电针具有良好的镇痛作用并可干预痛转化效应,其机制可能与下调患侧腰椎DRG中PKCε表达有关.
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偏头痛模型大鼠三叉神经脊束核神经元兴奋性增高及蛋白激酶Cε膜转位增加
目的:探讨蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)对偏头痛中枢敏感化大鼠三叉神经脊束核神经元兴奋性的影响.方法:实验选取200～250 g雄性SD大鼠共60只;随机均分为正常组(N组)、假手术组(C组)、偏头痛模型组(M组)、氯仿组(L组)和PKCε抑制剂H-7组(H-7组),每组大鼠12只.进行三叉神经脊束核神经元放电记录和PKCε膜转位水平检测.结果:(1)放电频率变化百分比造模后,三叉神经脊束核细胞外放电频率增加,造模后2h为造模前的(325.88±47.32)％;M放电频率变化百分比高于N组和C组.L组放电频率变化百分比与M相比,差异无统计学意义;H-7组放电频率变化百分比低于M和L组. (2)膜转位水平:M组、L组PKCε膜转位水平高于N组和C组;L组与M组相比,PKCε膜转位水平无明显变化;H-7组膜转位水平低于其余四组.结论:偏头痛中枢敏感化过程中,三叉神经脊束核神经元兴奋性和PKCε膜转位增加,PKCε抑制剂H-7能减少神经元兴奋性和PKCε膜转位,说明PKCε可能参与大鼠偏头痛中枢敏感化的形成.
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四氢生物蝶呤通过蛋白激酶Cε途径对醋酸脱氧皮质酮—盐型高血压小鼠左心室舒张功能的影响
目的 探讨四氢生物蝶呤(BH4)对醋酸脱氧皮质酮(DOCA)-盐型高血压小鼠左心室舒张功能及蛋白激酶Cε(PKCε)表达的影响.方法 雄性C57BL/6小鼠分为手术组(n=50)与假手术组(n=40),手术组小鼠切除左侧肾脏后在颈部埋入DOCA药片,术后以普通饲料及1.05％NaCl溶液饲养,至术后14 d,排除死亡小鼠6只后随机分为DOCA组(n=22)与DOCA+BH4组(n=22,2.5％的BH4溶液0.1 mL/10 g灌胃7 d),假手术组小鼠仅游离左侧肾脏而不切除,并在颈部埋入安慰剂药片,术后以普通饲料及常规不含盐净化水饲养,然后随机分为假手术组(n=20)及假手术+BH4组(n=20).动物在术后22 d时处死,采用酶联免疫吸附试验、Western-blot以及高效液相色谱法(HPLC)测定心肌组织中环磷酸鸟苷(cGMP)、丙二醛、BH4和PKCε等指标的变化.处死前行鼠尾动脉压、心脏超声及血流动力学检查.结果 与假手术组相比,DOCA组血压升高(P＜0.05),DOCA+ BH4组与DOCA组相比,血压差异无统计学意义(P＞0.05).与假手术组相比,DOCA组二尖瓣舒张早期血流速度与二尖瓣环舒张早期运动速度比值(E/E’)、舒张末期压力-容积关系(EDPVR)及Tau指数增高[分别为(38.49±3.91)比(25.77±5.21),(0.22±0.05)比(0.15±0.02)mm Hg/μL,(14.27±0.79)比(10.60±0.52)ms,均P＜0.05].与DOCA组相比,DOCA+BH4组EDPVR及Tau指数减小[(O.16±0.04)比(0.22±0.05) mm Hg/μL,(12.05±1.35)比(14.27±0.79)ms,均P＜0.05].与假手术组相比,DOCA组超氧化物歧化酶(SOD)及一氧化氮减少,给予BH4干预后,SOD及一氧化氮增多.Western-blot结果显示,与假手术组相比,DOCA组PKCε的表达减少(P＜0.05),与DOCA组相比,DOCA+BH4组PKCε的表达增加(P＜0.05).结论 BH4无明显降压作用,但可改善左心室舒张功能不全,这可能与其通过PKCε途径降低体内氧化应激水平、提高一氧化氮表达等有关.
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PKCε信号通路介导甘青铁线莲活性成分APG抗心肌缺血再灌注损伤的机制研究
目的 研究不同浓度甘青铁线莲活性成分APG对H9C2大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制.方法 体外培养H9C2大鼠心肌细胞,经2 μM/L和4 μM/L的APG预处理24 h后,建立缺氧复氧损伤模型(I/R)(缺氧45 min,复氧3 h).采用CCK-8法检测细胞活力,检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)的释放量、丙二醛(MDA)的释放量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活力;采用Western Blot法检测细胞内蛋白激酶Cε(PKCε)、Caspase-3、Bax和Bcl-2表达情况,使用特异性PKCε抑制剂CHE观察PKCε信号通路在此过程中的作用.结果 I/R处理可抑制H9C2细胞活性,细胞培养基中LDH、MDA含量升高,SOD活力降低(与Control组比较,P<0.05).抑制PKCε表达,上调Caspase-3表达,下调Bcl-2/Bax比例(与Control组比较,P<0.05).2 μM/L和4 μM/L的APG预处理均可发挥细胞保护作用,降低LDH与MDA释放量,提高SOD活力(与I/R组比较,P<0.05).此外,APG处理对抗了I/R损伤引起的PKCε表达下调,抑制Caspase-3表达,提高了Bcl-2/Bax比例(与I/R组比较,P<0.05).CHE处理后细胞活力下降,Caspase-3表达上调,Bcl-2/Bax比例下降,凋亡增加(与APG+I/R组比较,P<0.05).结论 甘青铁线莲中活性成分APG可减轻心肌缺血再灌注损伤,其机制可能是激活PKCε相关信号通路,终抑制心肌细胞凋亡.
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siRNA沉默蛋白激酶Cε基因抑制胆管细胞癌生长及其作用机制
目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默蛋白激酶Cε(PKCε)基因抑制胆管细胞癌的生长及其作用机制。方法分别将PKCε-siRNA及阴性对照（NC）-siRNA转染至人胆管细胞癌QBC939细胞中，设立PKC组和NC组。另设未转染对照组（CTRL组）。采用细胞计数试剂盒（CCK）-8法检测细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测PKCε、survivin蛋白表达情况。3组比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。结果PKC组细胞24、48、72 h的细胞增殖抑制率逐渐增高，分别为（7.52±0.33）%、（15.28±0.20）%和（37.12±0.45）%，与CTRL组比较差异有统计学意义(LSD-t =15.37，27.12，35.05；P<0.05)。PKC组细胞凋亡率（56.9±6.1）%明显高于CTRL组的（12.5±1.3）%(LSD-t=28.55，P<0.05)。PKC组PKCε、survivin蛋白表达水平较NC组、CTRL组降低。结论 siRNA沉默PKCε基因可能通过下调survivin蛋白表达，促进细胞凋亡从而抑制胆管细胞癌的生长。
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蛋白激酶Cε在前列腺癌组织中表达的临床意义
目的 探讨蛋白激酶C ε(PKCε)在不同病理类型前列腺组织中的表达及与前列腺癌病理分级、分期的关系。 方法 正常前列腺(NP)组织标本10例、前列腺增生(BPH)组织标本10例、癌旁(PC)组织标本10例、前列腺癌(PCa)组织标本43例。免疫组化法检测各组织中PKCε的表达情况，分析PKCε表达与不同病理类型及PCa分级、分期的关系。 结果 PCa组PKCε表达阳性27例，BPH组无阳性表达，NP组1例，PC组2例，差异有统计学意义(P＜0.05)。PCa组Gleason评分≥8分组中PKCε表达阳性12/13例，2～4分组4/10例，5～7分组11/20例，组间差异有统计学意义(P＜0.05)。T3期PKCε表达阳性10/12例，T4期9/10例，T1、T2期分别为1/6例和7/15例，高分期与低分期组PKCε表达差异有统计学意义(P＜0.05)。PCa转移组PKCε表达阳性9/10例，未转移组18/33例，组间差异有统计学意义(P＜0.05)。PCa患者血清PSA≤20 ng/ml者PKCε表达阳性7/15例，＞20 ng/ml组20/18例，组间差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论 PCa组织中PKCε的表达率较高，并且与PCa病理分级、分期呈正相关，临床上可考虑作为PCa预后因子之一。
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吗啡预处理对小鼠海马脑片氧糖缺失/复氧复糖时PKCε膜转位的影响
目的 探讨吗啡预处理对小鼠海马脑片氧糖缺失/复氧复糖(OGD/R)时蛋白激酶Cε(PKCε)膜转位的影响.方法 成年近交系BALB/C小鼠40只,体重18～22 g,雌雄不拘,制备海马脑片,将脑片置入无糖无氧的人工脑脊液中,培养20 min后再置于正常人工脑脊液(nACSF)中培养(复氧复糖)2h,以建立小鼠海马脑片OGD/R模型.脑片随机分为5组(n=40),对照组(C组):在nACSF中培养4 h;吗啡预处理组(M组):在含吗啡3μmol/L的nACSF中孵育30 min后用nACSF洗脱,随后制备OGD/R模型;纳洛酮+吗啡预处理组(N+M组):在含纳洛酮50 μmol/L的nACSF中孵育30 min后,加入吗啡至3 μmol/L,孵育30 min,随后制备OGD/R模型;纳洛酮组(N组):在含纳洛酮50μmol/L的nACSF中孵育1h,随后制备OGD/R模型;OGD/R组:制备OGD/R模型.于脑片OGD/R期间测定PKCε膜转位情况和神经元存活情况.结果 与C组比较,其余各组神经元存活率降低,膜相关蛋白中PKCε表达上调,胞溶蛋白中PKCε表达下调(P＜0.05或0.01);与OGD/R组比较,M组神经元存活率升高,膜相关蛋白中PKCε表达下调,胞溶蛋白中PKCε表达上调(P＜0.05),N+M组和N组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,N+M组神经元存活率降低,膜相关蛋白中PKCε表达上调,胞溶蛋白中PKCε表达下调(P＜0.05).结论 吗啡预处理诱导小鼠海马脑片缺血耐受的机制可能与抑制PKCε膜转位有关.
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线粒体ATP敏感性钾通道在七氟醚预处理对大鼠离体缺血再灌注心脏延迟性保护中的作用
目的 评价线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP通道)在七氟醚预处理对大鼠离体缺血再灌注心脏延迟性保护中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠72只,体重270～350 g,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=12):对照组(CON组)、缺血再灌注组(I/R组)各吸入33％氧气1h；七氟醚对照组(SEVO组)、七氟醚预处理组(SWOP组)各吸入2.5％七氟醚1h;5-羟葵酸+七氟醚预处理组(5-HD+ SWOP组)于七氟醚预处理前30 min腹腔注射mito-KATP阻断剂5-羟葵酸10 mg/kg;5-羟葵酸对照组(5-HD组)腹腔注射5-羟葵酸10 mg/kg,24 h后除CON组和SEVO组,其余组建立大鼠Langendorff离体心脏灌注模型,停止灌注30 min,再灌注120 min.于缺血前即刻(T0)和再灌注120 min(T1)时采用Western blot法检测心肌组织磷酸化的ε型蛋白激酶C(p-PKC-ε)、caspase-8蛋白的表达水平；于再灌注120 min时采用TTC法测定心肌梗死范围,计算心肌梗死体积百分比.结果 与CON组比较,I/R组、SWOP组、5-HD+ SWOP组和5-HD组T1时心肌梗死体积百分比升高,SEVO组和SWOP组T0时,I/R组、SWOP组、5-HD+ SWOP组和5-HD组T1时心肌p-PKC-ε蛋白表达上调,SEVO组T2时caspase-8 蛋白表达下调(P＜0.05)；与I/R组比较,SWOP组和5-HD+ SWOP组T1时心肌梗死体积百分比降低,SEVO组和SWOP组T0时p-PKC-ε蛋白表达上调,SWOP组T1时caspase-8蛋白表达下调(P＜ 0.05)；与SWOP组比较,5-HD+ SWOP组心肌梗死体积百分比升高,T0时p-PKC-ε蛋白表达下调,T1时caspase-8 蛋白表达上调(P＜0.05).结论 mito-KATP通道参与了七氟醚预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的过程,可能与上调缺血前p-PKC-ε蛋白表达水平,从而抑制再灌注时细胞凋亡有关.
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PKCε-Nampt通路调控线粒体自噬防治脑缺血损伤的研究进展
分析近5年来的蛋白激酶Cε(PKCε)-烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)通路调控线粒体自噬防治脑缺血损伤的理论和实验研究,总结PKC￡-Nampt通路调控线粒体自噬防治脑缺血损伤的作用机制,根据目前分子生物学的发展和新技术的应用,提出PKCε-Nampt通路调控线粒体自噬防治脑缺血损伤的研究重点和方法,为脑缺血的线粒体靶向治疗提供新思路.
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灯盏花乙素干预缺血再灌注损伤人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子与蛋白激酶Cε的表达
背景:有关灯盏花乙素的研究多集中在神经细胞、神经元及平滑肌细胞上,但对血管内皮细胞的作用研究尚少.目的:观察灯盏花乙素预处理后对人脐静脉内皮细胞缺血再灌注损伤后血管内皮生长因子与蛋白激酶Cε表达的影响.方法:体外培养的人脐静脉内皮细胞,分别设立对照组,模型组和及灯盏花乙素高、中、低剂量组.将人脐静脉内皮细胞予缺氧缺糖3 h/复氧糖5或24 h;灯盏花乙素高、中、低剂量组分别加1×10-5,1×10-6,1×10-7 mol/L灯盏花乙素孵育30 min,然后予缺血再灌注处理.实验结束后取细胞裂解液用Western blot检测血管内皮生长因子、蛋白激酶Cε的蛋白表达.结果与结论:缺血3 h再灌注5及24 h,较对照组,模型组血管内皮生长因子的表达降低,细胞颗粒部分蛋白激酶Cε的表达明显增加.灯盏花乙素能促进缺血3 h再灌注5 h人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子的表达,尤其以灯盏花乙素高剂量和中剂量组明显,但对蛋白激酶Cε的表达没有影响.
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高糖环境下大鼠DRG神经元中PKCε和TRPV4mRNA的表达
目的 观察高糖环境对大鼠背根神经节(DRG)细胞瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)、蛋白激酶Cε(PK Cε)mRNA表达的影响,明确高糖环境对以上2种受体的调控作用.方法 急性分离新生大鼠DRG细胞,培养48 h后更换培养液并分组.按照培养基含糖量不同分为:对照组(5.5 mmol/L,C组)、高糖1组(17.5 mmol/L,H1组)、高糖2组(35.0 mmol/L,H2组).换液后48 h提取细胞总RNA并进行逆转录.用RT-PCR及实时定量PCR检测TRPV4和PKCε mRNA表达的变化.结果 与对照组比较,PKCε mRNA在H1组表达没有明显变化(P＞0.05),而在H2组表达显著上调(P＜0.05).与对照组比较,TRPV4 mRNA在H1组表达显著上调(P＜0.05),而在H2组表达没有明显变化(P＞0.05).结论 高糖环境可以上调TRPV4/PKCε基因的表达,但是2种基因明显上调时糖浓度不一致,说明TRPV4的激活除了PKCε的调控外还受其它因素调节.
关键词： 瞬时感受器电位离子通道香草素受体4 蛋白激酶Cε 背根神经节 高糖环境 -
TRPV4和PKCε在糖尿病大鼠背根神经节神经元中的表达
目的 探讨糖尿病不同时期蛋白激酶Cε(PKCε)和瞬时性受体电位通道4(TRPV4)在大鼠DRG神经元中的表达及意义.方法 采用经典糖尿病模型,检测不同病程糖尿病大鼠DRG神经元中PKCε和TRPV4的表达.用免疫荧光方法,观察背根神经节(DRG)在痛性糖尿病神经病变(PDN)过程中PKCε和TRPV4阳性细胞的变化.结果 PKCε和TRPV4在正常大鼠的背根神经节中均有表达.在糖尿病大鼠中,PKCε和TRPV4的表达水平都出现先升高后降低的现象.其中,PKCε在糖尿病第4周的表达水平高,TRPV4在糖尿病第1周的表达水平高.结论 高糖慢性刺激可导致DRG神经元PKCε和TRPV4的表达改变,在短期内有明显的增加,但2者高峰出现的时间不同.TRPV4的增加依赖于PKCε,而后者错后的高峰说明其参与更多的细胞内机制.
关键词： 糖尿病 蛋白激酶Cε 瞬时感受器电位香草酸受体4 -
不同糖浓度中大鼠DRG神经元相关蛋白表达及Ca2+浓度的测定
目的 观察高糖对背根神经节(DRG)中瞬时感受器电位香草酸受体4(TRPV4)和蛋白激酶Cε(PKCε)的表达以及细胞内Ca2+浓度的影响,探讨其在糖尿病大鼠神经病理性疼痛形成中的作用机制.方法 培养的新生大鼠DRG神经元分成正常对照组(C组)、中糖组(M组)和高糖组(H组).48 h后通过蛋白质免疫印迹法测定DRG神经元TRPV4和PKCε的表达水平,并通过共聚焦显微镜测定DRG神经元[Ca2+]i的水平.结果 TRPV4、PKCε蛋白的表达上调且呈浓度依赖性.C组、M组、H组TRPV4蛋白分别为0.33±0.05、3.20±0.40和7.69±0.60; PKCε蛋白分别为0.88±0.04、1.08±0.08和1.97±0.35.在TRPV4激动剂4α-PDD的作用下,与C组比较,H组[Ca2+]i显著升高(P＜0.05),且呈浓度依赖.结论 高糖可以上调DRG神经元中TRPV4、PKCε蛋白的表达,增加神经元内Ca2+浓度.TRPV4、PKCε对DRG神经元内Ca2+起到了协同调控的作用.
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化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠PKCδ、PKCθ和PKCε表达的影响
目的 探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠蛋白激酶(PK)Cδ、PKCθ和PKCε表达的影响及其神经保护机制.方法 以改进后的Zea-Longa线栓法制造局部梗死性脑缺血再灌注模型.随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组,中药高剂量组、中剂量组、低剂量组,以Longa评分法进行神经功能评分,免疫组化法观察PKCδ、PKCθ和PKCε的分布及表达.Western印迹法评测其在各组大鼠缺血侧脑组织中的表达量.结果 免疫组化结果显示:与假手术组相比,模型组PKCδ、PKCθ表达升高,PKCε表达降低(P<0.05),与模型组相比,各用药组PKCδ、PKCθ均降低,PKCε表达升高(P<0.05),其中以中药高剂量组及尼莫地平组较为明显(P<0.05).Western印迹法显示:与假手术组相比,模型组PKCδ、PKCθ表达升高,PKCε表达降低(P<0.05),与模型组相比,各用药组PKCδ、PKCθ均降低,PKCε表达升高(P<0.05),其中以中药高剂量组及尼莫地平组较为明显(P<0.05).结论 化浊解毒活血通络方可能通过降低PKCδ、PKCθ的表达、上调PKCε的表达,降低CIRI的程度.
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黄芪甲苷诱导NO生成并激活PKCε对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的:研究黄芪甲苷(As IV)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,阐明其作用机制.方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、再灌注模型组、阳性药尼可地尔(10 mg·kg~(-1))组、AsⅣ(5 mg·kg~(-1))组及AsⅣ+氯化白屈莱赤碱(CHE)(3 mg·kg~(-1))组,每组6只,结扎左冠状动脉前降支 30 min,松扎再灌注120 min制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,检测AsⅣ对其血清中LDH、MDA和SOD以及NO的影响,同时光镜下观察心肌细胞病理组织形态学变化,Western blotting法检测心肌细胞胞浆及胞膜PKCε蛋白表达.结果:AsⅣ组与模型组比较,LDH漏出量降低 (P<0.05),MDA含量明显降低 (P<0.01),SOD活力增强 (P<0.01),NO含量增加(P<0.01).HE染色组织形态学观察,与模型组比较,AsⅣ组心肌细胞形态有明显的改善,炎细胞浸润也有减轻.Western blotting 法检测,AsⅣ组心肌细胞胞膜PKCε表达量高于模型组 (P<0.05).CHE减弱了ASⅣ的这种保护作用;与AsⅣ组比较,AsⅣ+CHE组LDH漏出量升高(P<0.05),MDA含量升高 (P<0.01),SOD活力降低 (P<0.01),PKCε胞膜表达量降低 (P<0.05),心肌细胞水肿明显、胞质着色较浅.结论:AsⅣ通过诱导NO的生成对大鼠心肌缺血再灌注损伤产生保护作用,PKCε的激活可能是AsⅣ保护心肌细胞信号传导通路的组成部分.
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益气健脾抗癌法对结肠癌组织PKC及亚型PKCδ、PKCε蛋白表达的影响
目的:探索益气健脾抗癌法对大肠癌组织蛋白激酶C(protein kinase C;PKC)及亚型PKCδ、PKCε表达的影响及其作用机制.方法:建立人大肠癌细胞HT-29裸鼠皮下移植瘤模型后,随机分为模型组、益气健脾组和益气健脾抗癌组.益气健脾中药由太子参、茯苓、白术、甘草、半夏、陈皮等组成,益气健脾抗癌中药由益气健脾中药加山慈菇、土茯苓、浙贝母和白花蛇舌草等组成.给药14 d后,应用Real-time PCR和Western blotting法检测肿瘤组织PKC及其亚型PKCδ、PKCε的mRNA及蛋白的表达.结果:益气健脾抗癌法治疗后,移植瘤组织中:(1) PKC mRNA和PKC蛋白表达低于模型组和益气健脾组[(0.412±0.040) vs(0.596±0.021)、(0.540±0.015)和(0.261 ±0.019) vs (0.665 ±0.016)、(0.498±0.018),P＜0.05或P＜0.01];(2) PKCδ mRNA和PKCδ蛋白表达高于模型组和益气健脾组[(0.410±0,030) vs (0.233±0.025)、(0.261±0.034)和(0.516±0.029) vs (0.301 ±0.041)、(0.361 ±0.044),均P＜0.01];(3) PKCε mRNA和PKCε蛋白表达低于模型组和益气健脾组[(0.215±0.021) vs (0.362±0.021)、(0.314±0.031)和(0.224 ±0.029) vs (0.368±0.044)、(0.359±0.029),均P＜0.01).结论:益气健脾抗癌法对大肠癌组织PKC、PKCε的抑制及PKCδ的促进作用,可能是益气健脾抗癌法治疗大肠癌的作用机制之一.
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蛋白激酶Cε与胰岛β细胞分泌功能
蛋白激酶Cε(PKCe)是PKC家族中的一员,属于nPKC亚家族.抑制PKCε后可以降低肝胰岛素清除率,增强功能缺陷的胰岛β细胞对葡萄糖刺激的反应,增加胰岛素分泌,从而使胰岛β细胞分泌功能得到根本的改善.本文就蛋白激酶Cε与胰岛β细胞分泌功能做一综述.
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Epac1对大鼠内脏高敏感的调控作用及其机制
目的：探讨环磷酸腺苷活化交换蛋白1（ Epac1）对大鼠内脏高敏感的调控作用及其机制。方法选择雄性SD大鼠45只，随机分为对照组、模型组、CE3F4组、每组15只。模型组、CE3F4组建立内脏高敏感模型，对照组不建模。标准环境下饲养至出生后第8周，对照组、模型组鞘内注射生理盐水25μL，CE3F4组鞘内注射0．2 nmol／μL CE3 F4溶液25μL。鞘内注射第4天采用球囊扩张法扩张结直肠，分别于20、40、60、80 mmHg压力下行腹壁收缩反射（ AWR）评分，同时测量疼痛感觉阈值、大容量感觉阈值时的压力。应用qRT-PCR及蛋白印迹法检测支配结肠的L5～S1节段背根神经节（ DRG） Epac1、蛋白激酶C（ PKC）εmRNA和蛋白表达。结果与对照组比较，模型组40、60、80 mmHg压力时AWR评分升高，疼痛感觉阈值与大容量感觉阈值时的压力下降（P均＜0．05），提示成功建立内脏高敏感模型。与模型组比较，CE3F4组在40、60 mmHg压力时AWR评分显著下降（P均＜0．05）。模型组在疼痛感觉阈值、大容量感觉阈值时的压力较对照组明显降低（ P均＜0．05），而CE3 F4组较模型组明显升高（P均＜0．05）。与对照组比较，模型组DRG的Epac1、PKCεmRNA和蛋白表达均显著升高（P均＜0．05）。与模型组比较，CE3F4组Epac1 mRNA和蛋白表达无明显变化（P均＞0．05），但PKCεmRNA和蛋白表达显著降低（P均＜0．05）。结论 Epac1可能参与大鼠内脏高敏感的调控，其机制与下游PKCε活化有关。
关键词： 肠易激综合征 内脏高敏感 环磷酸腺苷活化交换蛋白1 蛋白激酶Cε 大鼠 -
结肠腺癌中蛋白激酶C亚型的表达及意义
目的 探讨蛋白激酶C(PKC)α、β Ⅱ、ε、ζ在结肠腺癌中的表达及与结肠腺癌发生、发展及转移的关系.方法 选择2010年4月至2012年8月大庆油田总医院收治的82例原发性结肠腺癌患者的手术切除标本,其中管状腺癌52例,黏液腺癌30例;淋巴结转移39例,无淋巴结转移43例.采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法检测癌组织标本中PKCα、β Ⅱ、ε、ζ蛋白的表达.结果 52例结肠管状腺癌中,PKCα、β Ⅱ、ζ3个亚型的阳性表达率在高、中、低各分化组之间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);而PKCε亚型的阳性表达率在高、中分化组之间以及中、低分化组之间比较差异均无统计学意义(P＞0.05),但高分化组的阳性表达率显著低于低分化组(x2=31.523,P＜0.05).黏液腺癌组织中PKCα、β Ⅱ的阳性表达率显著低于管状腺癌组织(P＜0.05),而PKCε的阳性表达率则显著高于管状腺癌组织(P＜0.05);黏液腺癌组织与管状腺癌癌组织中PKCζ的阳性表达率比较差异无统计学意义(P＞0.05).原发性结肠腺癌患者中无淋巴结转移者癌组织中PKCα的阳性表达率显著高于有淋巴结转移者(P＜0.05);无淋巴结转移者癌组织中PKCβ Ⅱ、ε、ζ的阳性表达率与有淋巴结转移者比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PKC各亚型在结肠腺癌发生、发展和转移中的作用不同,PKCε在结肠管状腺癌中的表达与分化有关,PKCε可能参与了黏液腺癌的黏液分泌,PKCα、βⅡ可能与结肠管状腺癌的细胞增殖有关;PKCα与结肠腺癌淋巴结转移有关.
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小干扰RNA介导的蛋白激酶Cε基因沉默对肾透明细胞癌769P细胞增殖及迁移侵袭的影响
目的 观察下调蛋白激酶Cε(PKCε)基因对肾透明细胞癌细胞株769P细胞的生长、侵袭及迁移能力的影响.方法 用脂质体将PKCε小干扰RNA (siRNA)转染至769P细胞中,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分析PKCε基因及蛋白的表达；噻唑蓝(MTT)及单细胞克隆试验测定细胞的生长；划痕及侵袭试验检测细胞的侵袭和迁移能力.结果 通过siRNA下调769P细胞中PKCε的表达后,细胞的增殖能力下降明显(P＜0.05)；同时,细胞的侵袭和迁移能力较正常细胞降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PKCε可影响人肾透明细胞癌细胞株769P细胞的生长及细胞侵袭、迁移能力.
