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阴阳双补方及各拆方对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用与PLC-γ1-PKCα-PLD信号转导通路的关系
自由基(free radical,FR)是具有未配对电子的原子、原子团、分子或离子.人体内的氧自由基包括过氧化物离子O2-2、超氧化物离子O-3、H2O2等[1].研究发现,多种神经系统疾病及衰老都和自由基损伤密切相关[2].
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PKCα siRNAs有效序列的筛选及其对肺癌A549细胞的作用
目的 探讨人蛋白激酶Cα(PKCα)小干扰RNA(siRNA)对肺癌A549细胞生长增殖及凋亡的影响.方法 设计并化学合成6条PKCα siRNAs,转染A549细胞,通过改良MTY法及RT-PCR筛选;对3条效果较好的PKCαsiRNAs,进一步采用克隆形成抑制实验、Hoechst 33258染色、PI单染和Annexin V/PI双染以及Western blot检测.结果 6条PKCa siRNAs均显著下调了PKCα mRNA水平;除No.5 siRNA外,其他5条siRNA均显著地抑制了A549细胞增殖(P<0.05).3条效果较好的PKCα siRNAs转染组PKCα蛋白的表达显著下调,克隆形成抑制率、亚二倍体百分率和早期凋亡细胞比例均显著高于对照组(P<0.05),并出现了核固缩、边聚和裂解等凋亡形态学变化.结论 本实验发现3条能显著抑制A549细胞增殖并诱导其凋亡的PKCα siRNAs.
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PKCα参与高糖调节大鼠肾小管上皮细胞骨形态发生蛋白-7的表达
目的 观察蛋白激酶Cot(PKCα)对糖尿病(DM)及高糖培养的大鼠肾小管上皮细胞骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达的影响.方法 将大鼠分为对照组(control)和糖尿病组(DM),每组8只,饲养12周处死动物;将体外培养的原代肾小管上皮细胞,随机分为对照组(control)、高糖组(HG)、高糖+PKCα特异性抑制剂G(O)6976 1 μmol/L组(HG+G(O)6976)和高渗组(HM),处理72 h后收集肾小管上皮贴壁细胞,免疫组化及免疫细胞化学观察肾小管上皮细胞BMP-7、PKCα、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和纤维连接蛋白(FN)蛋白表达;Western blot检测BMP-7蛋白的表达;RT-PCR法检测BMP-7、PKCα和FN mRNA水平.结果 对照组大鼠肾小管上皮细胞BMP-7蛋白及mRNA高表达,DM组或HG组BMP-7的表达明显低于对照组(P＜0.05),PKCα、AngⅡ和FN的表达较对照组明显增多(P＜0.05),BMP-7蛋白与PKCα呈显著负相关,HG+ G(O)6976组BMP-7蛋白及mRNA表达则较HG组增多(P＜0.05),Ang Ⅱ和FN则较HG组减少(P＜0.05).结论 PKCα可能参与高糖调节大鼠肾小管上皮细胞BMP-7的表达.
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蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞周期及G1期相关调控因子cyclinD1、cyclinE的影响
目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对人正常肝和肝癌细胞周期的作用和对G1期相关调控因子的影响. 方法通过细胞转染技术将PKCα cDNA正向插入的真核表达质粒PXJ41-PKCα导入正常肝细胞(L-02),并利用本室已构建的表达反义PKCα的BEL-7402细胞(HT6)检测细胞的生长曲线,细胞周期以及细胞对G1期相关调控因子cylinD1和cyclinE的影响. 结果构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型(LT3),过表达PKCα可促进L-02细胞增殖,促进细胞由G1期向S期的过渡;cyclinD1和cyclinE的蛋白水平上升,反之表达反义PKCα的BEL-7402细胞(HT6)增殖被抑制,阻抑细胞由G1期向S期的过渡,cyclinD1和cyclinE的蛋白水平下降. 结论从正反两个方面表明,PKCα可通过作用于G1期相关周期蛋白的水平影响G1/S期的进程.
关键词： 蛋白激酶Cα L-02细胞 Bel-7402细胞 细胞周期 G1期相关调控蛋白 -
人肺癌细胞中蛋白激酶C亚类与cAMP-PKA系统相关性的研究
为了探讨蛋白激酶Cα(PKCα)及其与环腺苷酸-蛋白激酶A(cAMP-PKA)信号系统的相关性,用六甲撑双乙酰胺(hexamethylene bisacetamide, HMBA)和PKC 抑制剂 Calphostin C 分别处理人肺癌细胞LTEPa-2,统计细胞生长百分数,测定cAMP水平.用斑点杂交方法检测PKCα基因表达,并测定表达反义PKCα的人肺癌LTEPa-2细胞中PKC与PKA激酶活性.结果显示:5μmol/L HMBA处理人肺癌LTEPa-2细胞3d后,细胞增殖明显被阻抑,PKCα基因表达下降,cAMP水平升高.0.15mg/L PKC抑制剂Calphostin C导致人肺癌细胞增殖速度减慢时,cAMP水平也升高.在表达反义PKCα的人肺癌LTEPα-2细胞中,当PKCα基因和蛋白表达被阻抑、PKC活性明显降低的同时,PKA活性则显著升高.结果提示:在人肺癌细胞中PKCα亚类和cAMP-PKA通路显示出拮抗关系.PKCα和PKA两套信号系统相互作用,共同调节人肺癌细胞的增殖和转化.
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PKC在人肾小球系膜细胞IP3R1表达中的作用
目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)对人肾小球系膜细胞(HMCs) IP3R1蛋白和mRNA表达的影响及PKC在此信号通路中的作用,以期为肝肾综合征(HRS)肾小球滤过率下降的发生机制提供理论依据.方法 用实时定量PCR和免疫印迹检测IP3R1 mRNA和蛋白表达的情况,并分别用蛋白激酶C(PKC)激动剂PMA、PKCα、PKCδ特异性抑制剂及HA-DN-PKCα质粒转染干预上述诱导实验检测IP3 R1的表达变化.此外,免疫印迹检测TNF-α对p-PKCα蛋白的表达影响.结果 TNF-α明显上调IP3 R1蛋白和mRNA表达.PMA、PKCα抑制剂Safingol和HA-DN-PKCα质粒瞬时转染预处理HMCs后,均能明显阻断TNF-α诱导IP3 R1蛋白的表达,而PKCδ抑制剂Rottlerin预处理后,对IP3 R1蛋白表达无明显影响.此外,TNF-α刺激HMCs,各不同时间组总PKCα蛋白表达无明显差异,而TNF-α刺激8 h p-PKCα蛋白表达明显增加.结论 TNF-α能上调人系膜细胞IP3 R1蛋白及mRNA的表达,TNF-α活化PKCα是TNF-α上调IP3 R1表达的重要上游信号.
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PKCα对AngⅡ作用的心肌成纤维细胞增殖活性和NO分泌的影响
目的 探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用后的心肌成纤维细胞增殖活性和一氧化氮(NO)分泌的影响.方法 分离培养乳鼠心肌成纤维细胞,分为对照组(正常培养)、AngⅡ组(AngⅡ处理)、实验组(PKCα抑制剂D4681和AngⅡ处理).实时定量PCR和Western blot法测定细胞中的PKCα mRNA和蛋白水平.用PKCα抑制剂和AngⅡ共同处理心肌成纤维细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定细胞增殖活性,硝酸还原法测定细胞分泌的NO水平,酶联免疫吸附(ELISA)法测定培养液中的诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)含量,羟脯氨酸法测定细胞合成胶原蛋白水平,Western blot法测定各组细胞表达基质金属蛋白酶－1(MMP－1)、基质金属蛋白酶－2(MMP－2)、Ⅰ型胶原(COLLⅠ)、Ⅱ型胶原(COLLⅡ)水平.结果 AngⅡ组心肌成纤维细胞中的PKCα mRNA和蛋白水平均明显高于对照组(P ＜0.05).AngⅡ组心肌成纤维细胞增殖活性升高,细胞分泌的NO含量和iNOS活性均下降,细胞合成胶原蛋白水平升高,细胞中的MMP－1、MMP－2蛋白水平下降,COLLⅠ、COLLⅡ蛋白水平升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P ＜0.05).实验组心肌成纤维细胞增殖活性降低,细胞分泌的NO含量和iNOS活性升高,胶原蛋白合成减少,细胞中MMP－1、MMP－2蛋白表达增多,COLLⅠ、COLLⅡ蛋白表达减少,与AngⅡ组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 PKCα在AngⅡ作用后的心肌成纤维细胞中表达升高,抑制PKCα可以减弱AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖作用,促进细胞分泌NO.
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TNFα通过TNFR1/PKCα和TNFR2信号通路诱导人肾小球系膜细胞IP3R1的表达
目的:探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)对人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)IP3R1蛋白和mRNA表达的影响及PKC和肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)在此信号通路中的作用,以期为肝肾综合征(hepatorenal syndrome,HRS)肾小球滤过率下降的发生机制和防治思路提供理论依据.方法:用实时定量PCR和免疫印记法检测IP3R1mRNA和蛋白表达的情况,并分别用PMA耗竭内源性蛋白激酶C(endogenous protein kinase C,PKC),PKCα特异性抑制剂Safingol和PKCδ特异性抑制剂Rottlerin及HA-DN-PKCα质粒转染干预上述诱导实验.同时,用免疫印记法检测TNFα对PKCα和p-PKCα的表达的影响.此外,免疫印记法检测TNFR对PKCα的活化及IP3R1蛋白表达的影响.结果:TNFα.作用HMCs后,IP3R1蛋白和mRNA表达均明显增加.PMA、PKCα抑制剂Safingol,HA-DN-PKCα质粒转染均能明显阻断TNFα诱导的IP3R1蛋白的上调,而PKCδ抑制剂Rottlerin无明显阻断作用.TNFα刺激HMCs,各不同时间组总PKCα蛋白表达无明显差异,而TNFα刺激8 h p-PKCα蛋白表达明显增加.TNFR1抗体+TNFα组和TNFR2抗体+TNFα组,IP3R1蛋白表达均有明显的不同程度的下降.TNFR1抗体+TNFα组p-PKCα蛋白表达明显下降,而TNFR2抗体+TNFα组,p-PKCα蛋白表达无明显变化.结论:TNFα能上调HMCs中IP3R1蛋白及IP3R1mRNA的表达.活化的PKCα可能在TNFα上调IP3R1的表达中起重要作用.TNFα可能通过TNFR1/PKCα途径及TNFR2途径上调IP3R1的表达.
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高糖对血管内皮细胞蛋白激酶Cα和δ表达及功能的影响
以高糖培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)研究显示,高糖可诱导血管内皮细胞(EC)功能紊乱,凋亡增加,NO浓度降低,可溶性细胞间黏附分子1水平增加;高糖可诱导HUVECs 的蛋白激酶C(PKC)α及PKCδ表达位置转移,PKCδ表达增强,但对PKCα表达影响不明显.高糖所致EC功能异常,可能部分是通过PKCα及PKCδ途径来实现的.
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miR-216b通过靶向调控蛋白激酶Cα基因的表达抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭
目的 明确miR-216b是否通过靶向调控蛋白激酶Cα(PKCα)基因的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭.方法 构建PKCα 3'非编码区(UTR)-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告系统检测miR-216b对PKCα 3'UTR-荧光素酶活性的影响.将miR-216b模拟物转染鼻咽癌细胞CNE2,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测PKCα mRNA和蛋白的表达水平.将PKCαsiRNA转染CNE2细胞,通过MTS细胞增殖实验和Transwell侵袭实验观察PKCα基因表达下调对CNE2细胞增殖和侵袭的影响.将PKCα重组质粒与miR-216b模拟物共转染CNE2细胞,通过MTS细胞增殖实验检测CNE2细胞的增殖能力.结果 双荧光素酶报告检测结果显示,miR-216b能特异性地与PKCα mRNA的3'UTR结合,下调荧光素酶活性,其活性约为转染对照模拟物细胞的62.4％.过表达miR-216b的CNE2细胞中PKCα mRNA和蛋白的表达水平均降低,与对照细胞比较,分别降低49.1％和55.7％.siRNA干扰PKCα表达能抑制CNE2细胞的增殖和侵袭能力,能部分模拟miR-216b的抑瘤功能.过表达PKCα能部分逆转miR-216b对CNE2细胞的增殖抑制作用.结论 miR-216b通过靶向调控PKCα基因的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭.
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miR-200b靶向调控PKCα表达对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响
目的 观察miR-200b能否通过靶向凋控蛋白激酶Cα(PKCα)的表达而抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭能力,探讨miR-200b的抑瘤分子机制.方法 构建PKCα3'-UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶活性检测观察miR-200b对PKCα 3'-UTR-荧光素酶活性的影响.将miR-200b模拟物转染胶质瘤细胞U87,采用Western blotting检测PKCα表达水平.将PKCα siRNA转染U87细胞,通过MTS法和Transwell侵袭实验观察细胞生长和侵袭能力的变化.结果 双荧光素酶检测显示,miR-200b能特异性地与PKCα mRNA的3’-UTR结合,抑制其荧光素酶活性.过表达miR-200b的U87细胞PKCαmRNA及蛋白表达水平降低.siRNA干扰PKCα表达可抑制U87细胞的增殖和侵袭能力.结论 miR-200b可通过靶向调控PKCα的表达而抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力.
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牛磺酸通过抑制PKCα抗心肌成纤维细胞增殖的作用
观察牛磺酸(taurine,Tau)在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngII)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblast,CFb)增殖过程中对细胞周期调控蛋白p27、Cyclin D1及核因子-κB (NF-κB)p65的影响,以探 讨牛磺酸抑制CFb增殖的途径.胰酶消化法分离培养新生大鼠CFb,用Ang II诱导促进其增殖,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;Western blotting法检测p-PKCα含量;流式细胞仪检测细胞周期调控蛋白p27表达;免疫细胞化学染色检测Cyclin D1蛋白表达;免疫荧光细胞化学染色法检测NF-κB p65蛋白的核表达.牛磺酸(80和160 mmol·L-1)可明显抑制p-PKCα的蛋白表达.牛磺酸(80 mmol·L-1)可增加p27的蛋白表达(P<0.05);明显抑制NF-κB p65的核转位,与Ang II模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01),而以上作用均是通过抑制PKCα在胞膜的表达而实现的,且PKC抑制剂与Tau合用呈现协同作用.牛磺酸通过抑制p-PKCα的表达而增加p27的蛋白表达、抑制NF-κB p65的核转位,从而抑制CFb的增殖.
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红芪多糖对糖尿病肾病db/db小鼠肾脏保护作用及其对肾组织PKCα与VEGF表达的影响
目的 通过研究红芪多糖(HPS)对糖尿病肾病(DN) db/db小鼠肾组织中蛋白激酶Cα(PKCα)与血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,初步探讨HPS对DN小鼠肾脏的保护机制.方法 将50只12周龄的雄性db/db小鼠随机分为5组:HPS高、中、低剂量组,依那普利阳性对照组,模型对照组；正常组为10只同周龄的db/m小鼠.给药8周.于给药前及给药后第2、4、6、8周末检测小鼠血糖浓度,第8周末收集小鼠24 h尿,检测24 h尿蛋白排泄量后处死小鼠,眼球取血并分离血清,检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)等,并采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(Western blotting)检测肾组织PKCα及其下游因子VEGF mRNA和蛋白的表达.结果 经HPS治疗8周后,db/db小鼠的血糖较模型组偏低,但无统计学差异(P ＞0.05)；Scr、BUN和24 h蛋白尿排泄量与模型组相比均明显降低(P＜0.05).HPS低剂量组PKCα蛋白及VEGF蛋白的表达与模型组无显著差异(P＞0.05),其余各治疗组较模型组均有显著下降(P＜0.05),且HPS高剂量治疗组改善更明显(P＜0.01).结论 HPS具有治疗db/db小鼠2型糖尿病肾病的作用,其治疗作用不依赖于降血糖,可能是通过抑制PCKα及其下游因子VEGF的过度表达,进而减缓糖尿病肾病的病程进展.
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蛋白激酶C α结构及其组织分布
蛋白激酶C (protein kinase C,PKC)是1977年在鼠脑的胞质成分中发现的一种依赖磷脂和钙的蛋白激酶,是细胞信号转导途径中重要的物质.PKC由多种具有不同生物学特性的同工酶组成,不同的PKC同工酶有着不同的酶学特性,在组织中的表达不同,在细胞信号传递中的作用也有着显著差别.近年来由对PKC整体功能的探索逐步转向到对PKC家族成员进行分别研究.本文就PKCα这种亚型的结构及其在正常组织和肿瘤组织的分布作一综述.
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慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺动脉内蛋白激酶Cα的膜转位和蛋白表达量的影响
目的 通过观察慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺动脉内蛋白激酶Cα(PKCα)的膜转位和蛋白表达量的影响,初步探讨PKCα在慢性低氧诱导大鼠肺动脉高压的发生和发展过程中所起的作用.方法 采用慢性常压低氧[氧浓度(10±0.1)％]大鼠肺动脉高压模型,将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14 d和21d组,检测大鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),肺组织苏木精-伊红(HE)染色,应用蛋白免疫印迹和免疫组织化学的方法检测PKCα膜转位和蛋白表达水平的变化.结果 ①低氧1d、3d、7d、14 d和21d组与正常对照组相比,RVSP和RV/(LV+S)比值均明显增加(P＜0.05),低氧暴露3d、7d、14 d和21 d后大鼠肺动脉壁明显增厚;②PKCα的蛋白表达量在慢性低氧1d、3d、7d和14 d后比正常对照组明显下降(P＜0.05).结论 PKCα蛋白表达量的下调可能参与了慢性低氧诱导的大鼠肺动脉高压的发生和发展过程.
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PKCα/HO-1信号通路在内毒素诱发大鼠肺泡巨噬细胞损伤中的作用:与Mfn1的关系
目的 评价蛋白激酶Cd(PKCα)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路在内毒素诱发大鼠肺泡巨噬细胞损伤中的作用及其与线粒体融合蛋白-1(Mfn1)的关系.方法 将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞以1×104个/ml密度接种于96孔板中.采用随机数字表法分为5组(n=15):对照组(C组)、内毒素攻击模型组(E组)、PKCα抑制剂Go6976组(G组)、PKCα激动剂PMA组(P组)和二甲基亚砜组(D组).采用给予10 μg/ml LPS刺激NR8383细胞的方法制备肺泡巨噬细胞内毒素攻击模型.G组、P组和D组于LPS刺激前30 min分别给予5μmol/L Go6976、100nmol/L PMA、0.1％二甲基亚砜预处理30 min,冉给予10 μg/ml LPS,各组均孵育24 h后收集细胞,检测丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用Western blot法及q-PCR法检测PKCα、HO-1和Mfn1的表达.结果 与C组比较,E组、G组、P组和D组MDA和ROS含量升高,SOD活性降低,PKCα、HO-1及其mRNA表达上调,Mfn1及其mRNA表达下调(P＜0.05);与E组比较,G组MDA和ROS含量升高,SOD活性降低,PKC α、HO-1、Mfn1及其mRNA表达下调,P组MDA和ROS含量降低,SOD活性升高,PKCα、HO-1、Mfn1及其mRNA表达上调(P＜0.05),D组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PKCα/HO-1信号通路激活后促进Mfn1表达是内毒素诱发大鼠肺泡巨噬细胞损伤时的内源性保护机制.
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P KCα-Nrf2-HO-1信号通路在内毒素休克诱发兔急性肺损伤中的作用
目的：评价蛋白激酶 Cα（PKCα）?核因子 E2相关因子2（Nrf2）?血红素氧合酶1（ HO?1）信号通路在内毒素休克诱发兔急性肺损伤中的作用。方法健康清洁级雄性新西兰大白兔30只，2月龄，体重2．0～2．5 kg，采用随机数字表法分为3组（ n＝10）：对照组（ C组）、急性肺损伤组（ ALI组）和PKC抑制剂白屈菜赤碱组（ CHE组）。 CHE组腹腔注射白屈菜赤碱8 mg∕kg（溶于0．5 ml二甲基亚砜），30 min后，ALI组和CHE组耳缘静脉注射LPS 5 mg∕kg（溶于2 ml生理盐水）制备内毒素休克诱发急性肺损伤模型。静脉注射LPS或生理盐水6 h时，处死大鼠，取肺组织，光镜下观察病理学结果，并行肺损伤评分，测定肺组织湿重∕干重（ W∕D）比值，采用荧光定量 PCR 法测定 Nrf2 mRNA和HO?1 mRNA的表达水平，采用Western blot方法测定Nrf2和HO?1的表达水平。结果与C组比较，ALI组和CHE组肺损伤评分和W∕D比值升高，肺组织Nrf2、HO?1及其mRNA的表达上调（ P＜0．05）；与ALI组比较，CHE组肺损伤评分和W∕D比值升高，肺组织Nrf2、HO?1及其mRNA的表达下调（ P＜0．05）。结论 PKCα?Nrf2?HO?1信号通路是内毒素休克诱发兔急性肺损伤时机体的内源性保护机制之一。
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蛋白激酶Cα在电针减轻内毒素休克诱发兔急性肾损伤中的作用:与Nrf2/HO-1通路的关系
目的 评价蛋白激酶Cα(PKCα)在电针减轻内毒素休克诱发兔急性肾损伤中的作用及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的关系.方法 健康清洁级雄性新西兰大白兔80只,2月龄,体重1.5 ～ 2.0 kg,采用随机数字表法分为8组(n=10):假手术组(S组)、内毒素休克致急性肾损伤组(AKI组)、PKCα抑制剂-白屈菜赤碱+AKI组(CHA组)、白屈菜赤碱组(Che组)、溶媒-二甲基亚砜组(D组)、电针刺激穴位+AKI组(EA组)、电针刺激非穴位+AKI组(SEA组)和电针刺激穴位+白屈菜赤碱+AKI组(CEA组).EA组和CEA组于模型制备前1-4 d及模型制备过程中电针刺激双侧足三里和肾俞穴,疏密波,频率2/15 Hz,刺激电流1～2 mA,波宽0.2～0.6 ms,刺激强度以兔肢体出现轻微肌颤为宜,1次/d,30 min/次.SEA组以同样方法电针刺激足三里和肾俞穴旁开0.5 cm非经非穴处.AKI组、CHA组、EA组、SEA组和CEA组采用耳缘静脉注射脂多糖5 mg/kg的方法制备内毒素休克致急性肾损伤模型,S组、Che组和D组给予等容量生理盐水.于模型制备前30 min,CHA组和CEA组静脉注射白屈菜赤碱5 mg/kg(溶于0.5 ml 0.1％二甲基亚砜),Che组给予等量白屈菜赤碱,D组给予二甲基亚砜0.5 ml.静脉注射脂多糖或生理盐水后6h时,采集颈内动脉血样,检测血清BUN和Cr浓度,处死大鼠后取肾组织,行病理学观察并进行评分,测定肾组织MDA含量及SOD活性,检测肾组织PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白中Nrf2的表达水平.结果 与S组比较,AKI组、CHA组、EA组、SEA组和CEA组血清BUN和Cr浓度升高,肾组织MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织病理学评分升高,PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白Nrf2的表达上调(P＜0.05);与AKI组比较,EA组血清BUN和Cr浓度降低,肾组织MDA含量降低,SOD活性升高,肾组织病理学评分降低,PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白Nrf2的表达上调,CHA组和CEA组血清BUN和Cr浓度升高,肾组织MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织病理学评分升高,PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白Nrf2的表达下调(P＜0.05);与EA组比较,CEA组血清BUN和Cr浓度升高,肾组织MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织病理学评分升高,PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白Nrf2的表达下调(P＜0.05);与CEA组比较,CHA组血清BUN和Cr浓度升高,肾组织MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织病理学评分升高,PKCα、HO-1蛋白、核蛋白及总蛋白Nrf2的表达下调(P＜0.05).结论 PKCα介导电针足三里和肾俞穴减轻内毒素休克诱发兔急性肾损伤的作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路有关.
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PICK1在瑞芬太尼诱发幼鼠脊髓背角神经元AMPA受体微小兴奋性突触后膜电流及AMPA受体表达中的作用
目的 评价蛋白激酶Cα相互作用蛋白1(PICK1)在瑞芬太尼诱发幼鼠脊髓背角神经元使君子酸(AMPA)受体微小兴奋性突触后膜电流(mEPSCs)及AMPA受体表达中的作用.方法 出生14～18d雄性SD幼鼠36只,体重50～ 60 g,麻醉后处死取腰段脊髓,随机取18只幼鼠腰段脊髓,制备400 μm厚脊髓切片108张(用于全细胞膜片钳检测),余腰段脊髓,制备5μm厚脊髓切片108张(用于免疫荧光检测),分别采用随机数字表法分为3组(n=36):空白对照组(C组)在人工脑脊液中孵育90 min;瑞芬太尼组(R组)在含终浓度4 nmol/L瑞芬太尼的人工脑脊液中孵育90 min;瑞芬太尼+PICK抑制剂组(R+PICKi组)在含终浓度4 nmol/L瑞芬太尼及50 μmol/L PICK抑制剂FSC231的人工脑脊液中孵育90 nin.采用全细胞膜片钳检测AMPA受体介导的mEPSCs的振幅与时间间隔,采用免疫荧光法检测AMPA受体的表达.结果 与C组比较,R组和R+PICKi组mEPSCs的振幅增大、时间间隔缩短,GluR1和GIuR3表达上调,GluR2表达下调(P＜0.05);与R组比较,R+PICKi组mEPSCs的振幅减小、时间间隔延长,GluR3表达下调,GluR2表达上调(P＜0.05),GluR1表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PICK1参与了瑞芬太尼诱发幼鼠脊髓背角神经元AMPA受体mEPSCs及AMPA受体表达的过程,可能是瑞芬太尼诱发痛觉过敏形成的机制.
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瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏时脊髓和背根神经节神经元PICK1表达的变化
目的 评价瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏时脊髓和背根神经节神经元蛋白激酶Cα相互作用蛋白1(PICK1)表达的变化.方法 雄性SD大鼠32只,体重240 ～ 260 g,42～49日龄,采用随机数字表法,将其分为4组(n=8):对照组(C组)、切口痛组(Ⅰ组)、瑞芬太尼组(R组)和瑞芬太尼+切口痛组(R+Ⅰ组).R组和R+Ⅰ组静脉输注瑞芬太尼1.2 μg· kg-1·min-160 min,C组和Ⅰ组静脉输注生理盐水0.12 ml·kg-1·min-1 60 min.R+Ⅰ组与Ⅰ组分别于制备切口痛模型的同时静脉输注瑞芬太尼和生理盐水.分别于生理盐水或瑞芬太尼输注前(T0)、停止输注后2、6、24和48 h(T1-4)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).于T4时测定痛阈结束后处死大鼠,取L4-6节段脊髓和左侧背根神经节,采用实时定量PCR法测定PICK1 mRNA表达水平,采用Western blot法测定PICK1表达水平.结果 与C组比较,R组和R+Ⅰ组MWT降低,TWL缩短,脊髓和背根神经节PICK1及其mRNA表达上调,Ⅰ组MWT降低,TWL缩短(P＜0.05),脊髓和背根神经节PICK1及其mRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05);与Ⅰ组比较,R+Ⅰ组MWT降低,TWL缩短,脊髓和背根神经节PICK1及其mRNA表达上调(P＜0.05);与R组比较,R+Ⅰ组MWT降低,TWL缩短(P＜0.05),脊髓和背根神经节PICK1及其mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏形成的机制可能与脊髓和背根神经节神经元PICK1表达上调有关.
