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脂多糖对高糖环境下肝脏Kupffer细胞增殖和分泌及超微结构的影响
目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对高糖环境下肝脏枯否细胞(Kupffer cells,KCs)增殖和分泌功能及超微结构的影响.方法 将小鼠原代KCs培养扩增后随机分为4组:高糖组[(high glucose,HG),25.0 mmol/LD-葡萄糖],正常对照组[(normal control,CON),11.1 mmol/L D-葡萄糖],LPS+高糖组[(LPS+high glucose,LPS-HG),25.0 mmol/LD-葡萄糖],LPS+正常对照组[(LPS normal+control,LPS-CON),11.1 mmol/L D-葡萄糖].培养24 h后,LPS-HG和LPS-CON组分别加入等量LPS,继续培养6h后,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Luminex xMAP技术检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6水平,透射电镜观察KCs细胞超微结构.结果 MTT比色法测定结果显示,KCs经LPS干预6h后吸光度(absorbance,OD)测值显著升高,HG和LPS-HG组的OD测值明显低于相对照的CON组和LPS-CON组(P＜0.05).流式细胞仪技术检测结果显示,KCs经LPS干预6h后G0/G1期细胞分布明显下降,S期+G2/M期细胞分布明显升高(P＜0.01).HG和LPS-HG组的G0/G1期细胞分布显著高于相对照的CON和LPS-CON组,HG和LPS-HG组的S期+G2/M期细胞分布显著低于相对照的CON和LPS-CON组(P＜0.01);Luminex xMAP技术结果显示,KCs经LPS干预6h后TNF-α、IL-1β、IL-6水明显升高,TNF-α和IL-1p的变化更为显著.电镜观察KCs结果显示,HG组可见自噬体形成,CON组个别细胞胞质内仅见少量空泡;LPS-HG组可见大量空泡及自噬体形成,LPS-CON组可见空泡形成而未见自噬体.结论 LPS能激活并强化高糖环境中肝脏KCs的增殖和分泌功能,高糖环境和LPS均可引发肝脏KCs自噬等超微结构改变.
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高糖环境对内皮祖细胞成骨分化能力及其机制探讨
目的 观察高糖环境对内皮祖细胞成骨分化能力的影响,并对其机制进行探讨分析.方法 采用密度梯度离心法分离及培养取得EPCs(内皮祖细胞),通过观察3组(对照组20μg/mL、观察组60μg/mL、实验组80μg/mL)不同浓度高糖干预液对内皮祖细胞迁移、增殖及凋亡等功能产生的影响,并对成骨钙化基因进行相关检测,进而观察高糖环境对内皮祖细胞成骨分化能力所产生的影响.结果 与对照组比较,观察组及实验组可明显抑制内皮祖细胞的迁移及增殖功能,加速其凋亡,可明显促进内皮祖细胞成骨分化,且观察实验组变化为显著(P<0.05).结论 高糖环境能明显抑制内皮祖细胞的迁移及增殖能力,加速其凋亡,可明显促进内皮祖细胞成骨分化;对深入研究糖尿病血管钙化机制有积极作用,为临床干预治疗提供新相关依据.
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高糖环境下血管内皮氧化应激损伤的发生机制
伴随着糖尿病患者的逐年增加,糖尿病并发症所导致的死亡也越来越受到重视.在文中主要就高糖诱发氧化应激损伤引起的血管内皮功能紊乱的发生机制展开分析,以期可以为糖尿病的血管并发症治疗提供借鉴.
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2型糖尿病患者巨噬细胞肝素结合性表皮生长因子mRNA表达的半定量研究
1991年,Higashiyama等[1]首先在巨噬细胞样细胞U937中发现了肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF).HB-EGF属表皮生长因子(EGF)家族,但具有比EGF更强大的丝裂原作用.研究发现,巨噬细胞分泌的HB-EGF可通过促进平滑肌细胞的迁移和增生,在动脉粥样硬化的发生、发展中起重要作用.另外,细胞外高糖环境能增强HB-EGF对平滑肌细胞的丝裂原作用[2].推测HB-EGF可能与糖尿病患者的动脉粥样硬化发生、发展有关.目前,对于巨噬细胞HB-EGF和糖尿病的关系,及糖尿病巨噬细胞HB-EGF表达调节的相关报道很少.本研究拟采用PCR分析糖尿病患者巨噬细胞HB-EGF的mRNA表达水平及与高血糖之间的相关性.
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分泌型糖化终末产物受体与糖尿病并发冠心病的关系
在高糖环境中,蛋白质或脂质经长时间糖化形成晚期糖化终末产物.有研究证实,后者与糖尿病进展及心脑血管并发症关系甚为密切[1].糖化白蛋白(GA)是体内一种早期糖化终末产物,可促进糖尿病血管并发症的发生和发展[2].内源性分泌型糖化终末产物受体(esRAGE)是糖化终末产物受体的一种剪接变体,通过与晚期糖化终末产物结合,中和后者的病理作用[3].本研究旨在探讨esRAGE和GA水平与2型糖尿病并发冠心病及其严重性的关系.
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不同浓度葡萄糖对大鼠颌骨骨髓基质细胞成骨分化的影响
目的:体外观察不同葡萄糖浓度对大鼠颌骨骨髓基质细胞(BMSCs)向成骨细胞分化能力的影响.方法:无菌条件下从4周龄SD大鼠下颌骨获取BMSCs,采用全骨髓贴壁培养法对细胞进行纯化及培养,流式细胞仪检测干细胞表型及进行成骨分化检测,随后选取第4代细胞在不同糖浓度(5.5,16.5,25,35mM)干预下向成骨细胞定向诱导分化,其后对各组进行茜素红染色,碱性磷酸酶染色和活性测定,培养基钙、磷含量测定,并采用Western blot测定骨形成蛋白2(BMP-2)水平以及real-time PCR测定Runx2基因表达变化.组间比较采用单因素方差分析法(SPSS 11.0).结果:随着葡萄糖浓度的升高,茜素红染色钙结节形成逐渐减少,碱性磷酸酶(ALP)活性下降,细胞钙、磷分泌显著降低,差异有统计学意(P＜0.05);BMP-2水平以及Runx2 mRNA表达也明显降低(P＜0.05).结论:在高糖条件下,大鼠颌骨骨髓基质细胞成骨分化能力减弱,而BMP信号通路可能参与其中.
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消渴通痹颗粒对体外高糖环境下EPCs迁移及管腔形成的影响
目的 探究益气活血中药消渴通痹颗粒对体外高糖环境下内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)迁移及管腔形成的影响.方法 选取24只清洁级SD大鼠,随机分为空白组(6只)与给药组(18只).给药组随机均分为3组,分别按消渴通痹颗粒大、中、小剂量给药设为大、中、小剂量组,空白组饲喂等量生理盐水,连续给药7 d后采血并离心制备血清.空白组血清随机均分为2组,一组是加入伊红美蓝培养基-2(eosin-methylene blue medium-2,EBM-2)完全培养液为对照组;另一组是加入30 mmol/L葡萄糖的EMB-2完全培养液为高糖对照组.给药组血清均分别加入30 mmol/L葡萄糖的EMB-2完全培养液;抽取小鼠骨髓,从中分离EPCs,进一步制备细胞悬液,培养后用CD34抗体及DAPI进行染色鉴定并观察不同组培养液中其迁移能力及管腔形成能力.结果 高糖对照组EPCs迁移数低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),大、中、小剂量组EPCs迁移数高于高糖对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);大、中、小剂量组管状形成百分比均高于高糖对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 高糖环境下,消渴通痹颗粒能显著改善EPCs迁移的能力与迁移数,改善EPCs管腔形成的能力.
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糖痹康对高糖环境下大鼠雪旺细胞NF-κB表达的影响
目的 观察中药糖痹康对高糖环境下大鼠雪旺细胞NF-κB表达的影响.方法 采用原代培养的方法建立高糖环境下大鼠雪旺细胞的模型,用高、中、低三种剂量糖痹康含药血清进行干预,以弥可保作为对照,用Western blot检测不同药物干预后的大鼠雪旺细胞NF-κB p65蛋白表达,实时荧光定量PCR技术检测雪旺细胞中NF-κB mRNA的表达.结果 与正常对照组相比,模型组NF-κB p65蛋白相对表达量明显减弱,与模型组相比,各给药组NF-κB蛋白的表达均有所升高,并有统计学意义(P＜0.05);与正常组相比,模型组NF-κBmRNA相对表达量明显减弱,与模型组相比,各给药组NF-κB mRNA的表达均有所升高,并有统计学意义(P＜0.05).结论 糖尿病周围神经病变时NF-κB表达异常增加,中药糖痹康能够减少NF-κB活化,降低NF-κB转录水平,这可能是糖痹康对糖尿病周围神经病变(DPN)神经保护的有效作用靶点之一.
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黄芪甲苷对高糖环境下人肾小球系膜细胞的氧化应激损伤的保护作用及机制
目的 研究黄芪甲苷对高糖环境下肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用及机制.方法 将肾小球系膜细胞分为模型组、对照组和低、中、高剂量实验组.模型组用25 mmol·L-葡萄糖处理,低、中、高剂量实验组在模型组的基础上分别给予25,50,100 μmol·L-1黄芪甲苷,对照组则用等量生理盐水处理,干预后各组继续培养48 h.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况;用荧光探针法检测各组细胞活性氧(ROS)水平及荧光强度;用蛋白免疫印迹法检测细胞Akt/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况.结果 低、中、高剂量实验组肾小球系膜细胞增殖抑制率分别为(6.79±0.12)％,(17.05 ±0.15)％,(28.31 ±0.23)％,且随黄芪甲苷作用浓度增大呈升高趋势(P＜0.01).对照组、模型组和低、中、高剂量实验组肾小球系膜细胞ROS相对表达水平分别为0.02±0.01,0.07±0.01,0.06±0.02,0.04 e0.03,0.02±0.02;磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白相对表达量分别为0.25±0.03,0.57±0.02,0.46±0.02,0.31±0.04,0.27±0.03;p-IκBα蛋白相对表达量分别为0.44±0.03,0.16±0.01,0.21±0.02,0.26±0.02,0.33±0.02.与对照组比较,模型组肾小球系膜细胞ROS相对表达水平、荧光强度及p-Akt蛋白相对表达量均显著升高(P＜0.01),p-IκBα蛋白相对表达量显著降低(P＜0.01);与模型组比较,实验组肾小球系膜细胞相对表达ROS水平、荧光强度及p-Akt蛋白相对表达量显著降低,且均随黄芪甲苷作用浓度增大呈逐渐降低趋势(P＜0.01);p-IκBα蛋白相对表达量显著升高,且随黄芪甲苷浓度增大呈逐渐升高趋势(P＜0.01).结论 黄芪甲苷可显著调节高糖环境下肾小球系膜细胞ROS表达水平,抑制氧化应激反应,其作用机制可能与下调Akt/NF-κB信号通路p-Akt蛋白表达,上调p-IκBα蛋白表达相关,且具有显著的剂量依赖性.
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黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的影响
目的 探讨不同剂量的黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响,以期探索黄芩苷防治DN的药效机制,为中医药防治DN提供新的视角和实验根据.方法 体外培养大鼠肾小球系统细胞(GMC)并分为9组:正常组(LG 5.5mmol/L)、模型组(HG 25mmol/L)、黄芩苷1组(HG 25mmol/L+黄芩苷3.125μmol/L)、黄芩苷2组(HG 25mmol/L+黄芩苷6.25μmol/L)、黄芩苷3组(黄芩苷(HG 25mmol/L+黄芩苷12.5μmol/L)、黄芩苷4组(HG25mmol/L+黄芩苷100μmol/L)、黄芩苷5组(HG 25mmol/L+黄芩苷50μmol/L)、黄芩苷6组(HG 25mmol/L+黄芩苷100μmol/L)和PKC抑制剂组(HG 25mmol/L+ PKC抑制0.5 nmol/L),每组设平行6孔,培养24h、48h、72h后,应用MTT比色法检测各组GMC增殖情况,倒置显微镜下观察各组GMC生长情况,评价黄芩苷对GMC生长的影响.结果 从各时间点测得的OD值可见,用药组与高糖组比较差异有统计学意义(P<0.05),黄芩苷组与PKC阳性药组比较差异均有统计学意义(P<0.05).从抑制率可见,24h时,除了黄芩苷6组(即给药剂量为100μmol/L)对高糖刺激后GMC增殖有抑制作用之外,其余各组对高糖刺激后GMC增殖均无抑制.48h、72h随着时间增加,各组对高糖刺激后GMC增殖的抑制率逐渐升高,且随着黄芩苷浓度增加抑制率逐渐增高.结论 高糖环境下,体外培养GMC存在异常增殖现象,黄芩苷对高糖刺激GMC增殖有抑制作用,且具有一定剂量效应关系.即抑制率随着黄芩苷浓度的增高而升高,尤其是25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L三组的时间剂量依赖关系更加明显,且在72h的时间点抑制率高,抑制效果佳.
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高糖对豚鼠膀胱ICCs细胞电生理的影响
目的 观察高糖环境下豚鼠膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)内钙离子荧光的改变,探讨糖尿病膀胱(diabetic cystopathy,DCP)的发病机制.方法采用酶消化法原代培养,激光共聚焦技术观察5、10、15 mmol/L葡萄糖浓度下培养24、72 h的ICCs,扫描记录每个时间点胞内的钙离子荧光强度值.结果 糖浓度增高培养时间延长,ICCs内钙离子荧光值升高(P ＝ 0.00),只有15 mmol/L的24 h组降低(P ＝ 0.00).结论高糖环境对豚鼠膀胱ICCs电生理学造成显著影响,这种改变可能是造成DCP发病的重要原因之一.
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高糖中膀胱ICCs的变化
目的 观察高糖环境下豚鼠膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)内钙离子荧光及其超微结构的改变,探讨糖尿病膀胱(DCP)的发病机制.方法 采用原代培养,激光共聚焦、透射电镜观察5、10、15 mmol/L葡萄糖浓度培养24、72 h的ICCs,扫描记录胞内荧光强度值,观察其超微结构.结果 糖浓度增高培养时间延长,ICCs内钙离子荧光值升高,胞内线粒体大小不等、数量减少、空泡样变甚至溶解,胞质广泛溶解,突起消失.结论 高糖环境对豚鼠膀胱ICCs电生理学、超微结构造成显著影响,这种改变可能是造成DCP发病的重要原因之一.
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高糖中膀胱ICCs超微结构的变化
目的 观察高糖环境下豚鼠膀胱Cajal间质细胞超微结构的改变,探讨糖尿病膀胱(DCP)的发病机制.方法 采用酶消化法原代培养,透射电镜观察不同葡萄糖浓度下培养的ICCs超微结构.结果 随糖浓度增高和培养时间延长,ICCs内细胞器明显减少,线粒体大小不等、数量减少、肿胀、空泡样变甚至溶解,内质网扩张、空泡样变,胞质广泛溶解,突起消失.结论 高糖环境对豚鼠膀胱ICCs超微结构造成显著影响,这种结构破坏可能是造成DCP发病的重要原因之一.
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治疗糖尿病合并尿路感染的抗生素选择
糖尿病人尿路感染的易感性强,近年来,糖尿病的发病率逐渐增高,糖尿病引起尿路感染与高血糖有着密切的关系,长期高血糖状态有利于细菌的感染,从病例调查中可发现病人的血糖高出正常人2～3倍,且尿糖均在(++)～(+++)尿液的高糖环境,可成为细菌的良好培养基,所以易发生感染.
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高糖环境对小鼠肝脏枯否细胞增殖及分泌功能的影响
目的：探讨高糖环境下枯否细胞( kupffer cells, KCs)增殖及分泌功能的变化。方法将小鼠原代KCs培养扩增后,参照文献随机分为正常对照组(11.1 mmol/L D-葡萄糖)、低糖组(5.6 mmol/L D-葡萄糖)、中糖组(12.5 mmol/L D-葡萄糖)和高糖组(25.0 mmol/L D-葡萄糖),培养24、48和72 h后,血球计数板进行细胞计数,流式细胞仪检测细胞周期,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖,并收集细胞上清液,应用Luminex xMAP技术检测肿瘤坏死因子-α( tumornecrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β( interleukin-1β, IL-1β)和 IL-6水平。结果培养24、48和72 h时,高糖组和低糖组KCs扩增数量、OD值明显低于对照组和中糖组(P<0．01,P<0．05)。培养24 h时高糖组和低糖组G0/G1期明显高于对照组和中糖组,S期和G2/M期明显低于对照组和中糖组(P<0．01)。培养24、48和72 h时高糖组TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显低于对照组(P<0．05)。结论高糖环境下KCs活性明显下降,增殖及分泌功能受到抑制。
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脂联素对高糖环境下心肌细胞中TGF β1/Smads传导通路的影响
目的：探析脂联素对高糖环境下心肌细胞中转化生长因子β1(TGF β1)/Smads传导通路的影响及作用机制。方法将培养的心肌细胞分为对照组、观察 A组(高糖培养)、观察 B组(脂联素干预),对3组心肌细胞的 Smad 3、Smad 7表达情况、细胞上清液转化生长因子β1以及骨形成蛋白(BMP 7)的含量进行回顾性评价。结果观察 A组 Smad 3、TGF β1含量均高于对照组,且 Smad 7及 BMP 7的含量低于观察 A组(P<0.05)；观察 B组的 Smad 7及BMP 7的含量高于观察A组,Smad 3、TGFβ1含量低于观察 A组(P<0.05)。结论脂联素对高糖环境下心肌细胞中 TGF β1/Smads传导通路具有一定的影响作用,TGFβ1/Smads活化可能是导致此种现象的主要机制。
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藕节对高糖环境下足细胞nephrin和podocin蛋白表达的影响
目的:观察藕节含药血清对高糖环境下足细胞nephrin和podocin蛋白表达的作用,从而探讨藕节对足细胞发挥保护作用的机制.方法:足细胞分化成熟后随机分为7组:正常糖组(NG:5.5 mmol/L Glu)、高糖组(HG:30 mmol/Lglu)、高渗组(MA:NG+24.5 mmol/L甘露醇)、藕节低剂量组(RL:HG+藕节1.5g·kg-1·d-1含药血清)、藕节中剂量组(RM:HG+藕节3.0 g·kg-1·d-1含药血清)、藕节高剂量组(RH:HG+藕节6.0g· kg-1 ·d-1含药血清)、贝那普利组(BP:HG+贝那普利含药血清).培养48 h后用CCK-8检测各组足细胞的增殖情况;Western Blot检测各组足细胞上nephrin和podocin蛋白表达的变化.结果:与NG组比较,HG组OD值明显降低(P＜0.05),nephrin和podocin蛋白表达明显减少(P＜0.05);与HG组比较,RM、RH、BP组OD值均显著增高(P＜0.05);RH、BP组nephrin、podocin蛋白表达较HG组显著增加(P＜0.05);且RH组与BP组比较差异无统计学意义.结论:藕节含药血清可能通过上调足细胞上nephrin和podocin蛋白的表达,进而发挥保护足细胞的作用.
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高糖环境下肝细胞生长因子对血管内皮细胞增殖及c-met mRNA表达作用的研究
糖尿病患者中动脉粥样硬化性疾病的患病率高、发病年龄轻、病情进展快、多脏器同时受累较多.糖尿病以慢性高血糖为主要共同特征.高血糖致血管内皮细胞受损是形成动脉粥样硬化的重要原因之一,因而保护血管内皮细胞可抑制动脉粥样硬化,减少糖尿病患者心血管病患病率.肝细胞生长因子(HGF)是由间质来源细胞分泌的多效性生长因子,具有促进多种类型的细胞增殖、迁移和新生血管形成的作用.HGF通过与c-met结合而发挥其生物学作用,HGF对血管内皮细胞的促有丝分裂作用在各种血管生长因子中是强的[1].
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高糖环境下脂联素对人肾小管上皮细胞凋亡率及Bax Bcl-2表达的影响
目前糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)属于糖尿病常见的微血管并发症,由于其患病率逐年升高和较高的病死率,越来越被人们所重视.DN可以使肾小管基底膜增厚、动脉硬化等,这些改变严重影响肾小管的营养供应,引起肾小管细胞凋亡,从而导致肾间质纤维化.脂联素(ADPN)是脂肪细胞分泌的一种多功能的蛋白质激素,可以调节脂代谢、减轻动脉粥样硬化病变,抑制肿瘤坏死因子(TNF)的生成与释放,具有一定的抗炎症作用、增加胰岛素敏感性、降低血糖等作用.脂联素是否可以在高糖环境下保护肾小管上皮细胞,发挥抗纤维化作用,从而保护肾脏功能是本研究的目的所在.
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肝细胞生长因子对高糖环境下肾小管上皮细胞增殖及转化生长因子β1表达的影响
糖尿病肾病(DN)是糖尿病的常见微血管慢性并发症之一,是导致慢性肾功能不全的重要原因.转化生长因子β1(TGF-β1)被认为是DN中促小管间质病变的重要的因子之一,TGF-β1可促进肾小管细胞向成纤维细胞的转分化.肝细胞生长因子(HGF)是一种多效性生长因子,它介导上皮-间质和内皮-间质之间相互分化,不仅与器官发育形成和再生修复有关,而且也可作为负性调节因子,在肝硬化、肺纤维化中起重要的抗纤维化作用;HGF还是一种促细胞修复因子,在DN肾修复过程中可能起着一定的作用.本研究通过体外细胞模型,探讨HGF对高糖环境下肾小管上皮细胞的作用.
