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人肝癌P57~(kip2)基因失表达的遗传不稳定性
目的 探讨肝细胞癌(HCC)P57~(kip2) mRNA表达与遗传不稳定性之间的相互关系,以探索P57~(kip2)基因失表达的机制.方法 用原位分子杂交技术检测肝癌组织中尸57~(kip2)mRNA表达,用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳一银染法检测LOH和MSI.结果 在正常肝组织未见P57~(kip2) mRNA表达,癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率均为26.7%(8/30).3个位点均未发生LOH;在2个微卫星位点发生MSI,MSI总阳性率为16.7%.D11Si760位点发生MSI与P57~(kip2) mRNA表达有关联性(P<0.05).结论 P57~(kip2) mRNA表达异常提示其可能在HCC发生过程中起重要作用.MSI可能是肝癌发生过程中P57~(kip2) mRNA表达异常的原因之一.
关键词: 肝癌 P57~(kip2) 遗传不稳定性 杂合性缺失 微卫星不稳定性 -
DNA错配修复和临床肿瘤新进展
DNA复制是一个严谨有序的过程,细胞分裂时,碱基错配的概率约为1/1010~1/109.错配修复系统(MMR)是一个从细菌到真核细胞皆保守的DNA修复途径,它负责修复DNA中错配的碱基,或者DNA聚合酶的校对功能失调而引起的复制错误,插入,遗失碱基,使DNA整体复制的保真度增加50~1000倍.MMR系统失控会导致DNA序列中微卫星序列的不稳定性(MSI)或编码功能蛋白的基因突变,改变正常细胞功能,从而引发肿瘤.
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宫颈癌中RASSF1A基因微卫星的不稳定性
Ras相关区域家族1A(ras association domain family 1A,RASSF1A)基因是新近克隆出来的一种肿瘤抑制基因[1],其在调节细胞周期和细胞凋亡方面具有重要作用.RASSF1A基因失表达见于多种人类肿瘤中.本研究选择RASSF1A基因内的两个微卫星多态标记,对110例宫颈组织进行微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)的检测和分析;同时检测标本中人乳头瘤病毒16(human papillomavirus 16,HPVl6)的感染状态,分析其与RASSF1A基因MSI之间的关系,旨在探讨RASSF1A基因在宫颈癌发生、发展过程中的作用.
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胃癌微卫星不稳定性与幽门螺杆菌感染的关系
目的 研究胃癌中幽门螺杆菌(helicobacter pylori,HP)感染与微卫星不稳定性(microsatellite instablility,MSI)的关系,探讨HP感染致胃癌发生的机制.方法 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染及Warthin-Starry嗜银染色(W-S染色),分别对18例轻度慢性浅表性胃炎、52例胃癌(19例乳头状及管状腺癌、17例低分化腺癌、16例黏液腺癌)进行MSI及HP感染情况的研究.结果 各型胃癌MSI阳性率及HP感染率均明显高于轻度慢性浅表性胃炎组(P<0.05);35例HP感染阳性胃癌组MSI表现阳性19例,阳性率54.3%,22例Hp感染阴性者MSI表现阳性6例,阳性率27.3%,两者比较差异不显著(P>0.05).结论 MSI及HP感染在胃癌发生中均有一定作用,但HP感染诱发胃癌可能不是通过MSI来实现.
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胃淋巴上皮瘤样癌的研究进展
胃淋巴上皮瘤样癌(LELC)是胃癌中的一种罕见类型,预后较好.由Watanabe等在1976年以"富淋巴样间质的胃癌"首次报道,后来又有学者陆续加以报道.近年来随着分子生物学技术的发展,胃LELC的本质逐步得到认识.该文对胃淋巴上皮瘤样癌的研究进展作一综述.
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微卫星稳定性的遗传调控
微卫星DNA(microsatellite DNA)是指广泛存在于真核生物基因组中的简单串联重复序列,以2~6个核苷酸为重复单位.微卫星代表基因组内不稳定的区域,比非重复DNA序列的突变频率高得多.微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)是由于错配修复基因突变而引起的简单重复序列的改变,常表现为重复单位数量的增加或减少.这种不稳定性具重要意义:第一,不稳定性导致多态的等位基因,用于人和其它较高等真核生物的遗传作图研究.第二,基因内或基因附近简单重复序列长度的变化,能改变这些基因的表达或功能[1],在人类,许多遗传疾病反映出简单重复序列的扩增[2].第三,序列不稳定性的增加,可用以诊断某些具DNA错配修复缺陷的肿瘤.本文综述序列不稳定性的机制及序列稳定性的调控及其与人类疾病的联系.
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结直肠癌DNA错配修复蛋白的表达及临床病理学意义
目的 探讨错配修复蛋白在结直肠癌中的表达及临床病理学意义.方法 采用免疫组织化学法,对55例结直肠癌组织标本进行MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四种错配修复蛋白检测,同时观察其与临床病理学参数关系.采用real-time PCR法对其中10例进行鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)第2号外显子和鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌基因同源体B1 (BRAF)基因第15号外显子突变检测.结果 55例患者中50例四种蛋白均阳性表达,为微卫星稳定(MSS),5例患者蛋白表达有缺失,提示为高频微卫星不稳定(MSI-H),缺失率为9.09%,其中4例MLH1、PMS2联合缺失,1例MSH2、MSH6联合缺失;MSI-H患者肿瘤多发生在右半结肠,与MSS患者相比差异显著(P=0.01),其中3例为黏液癌或伴黏液分化癌,均无淋巴结转移;10例行KRAS及BRAF突变检测的病例中,6例存在KRAS基因突变,1例存在BRAF基因突变且表现为MLH1、PMS2表达联合缺失.结论 MSI-H结直肠癌患者多发生在右半结肠,这类患者有以黏液癌或伴有黏液分化癌多见及淋巴结转移少见为特征的趋势;MSI-H与MSS患者相比,在年龄、性别、肿块大小、肿瘤分级及分期方面无显著差异;发现散发性结直肠癌中具有微卫星不稳定的病例,结合其他检测可进一步指导临床用药,为新的治疗方案提供理论依据.
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结直肠腺癌中神经内分泌细胞微卫星改变和p53基因突变的检测
目的 通过检测结直肠腺癌中神经内分泌(NE)细胞微卫星改变和p53基因突变,探讨结直肠腺癌中NE细胞的克隆性起源.方法 采用激光捕获显微切割(LCM)技术,应用DNA抽提和全基因组扩增,在全基因组范围内选取26个微卫星位点,使用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)-银染色检测30例伴NE分化的结直肠腺癌中腺癌细胞和NE细胞的微卫星不稳定(MSI)、杂合性缺失(LOH)改变情况,联合PCR测序检测p53基因突变发生情况.结果 30例样本MSI总发生率为16.9%,LOH总发生率为8.5%,腺癌细胞与NE细胞的MSI和LOH发生率差异无统计学意义.30例样本中6例微卫星改变完全一致,23例微卫星改变一致性大于不一致性,1例微卫星改变一致性与不一致性相同.微卫星改变一致性与不一致性的差异有统计学意义(t=11.138,P=0.000).p53基因突变发生率为16.7%,腺癌细胞与NE细胞发生一致性改变.结论 结直肠腺癌中腺癌细胞与NE细胞具有相似的微卫星改变和完全一致的p53基因突变,推测两种细胞起源具有一致性.
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DNA去甲基化与肿瘤治疗的研究进展
近年来大量的研究结果显示,肿瘤的发生不但存在遗传学上的改变,而且存在表观遗传学的改变[1].遗传学改变是指基于基因序列改变而导致基因表达水平的变化,如基因突变、杂合性缺失、微卫星不稳定性等.表观遗传学是非基因序列改变所导致的基因水平的变化,如组蛋白修饰、染色质重塑、DNA甲基化等染色质结构上的变异.其中DNA甲基化异常已成为DNA突变、缺失以外导致抑癌基因失活的第三大机制,主要表现为肿瘤细胞中普遍性低甲基化和CpG岛区域性高甲基化.研究提示肿瘤抑癌基因启动子区域性高甲基化是肿瘤抑癌基因失活的重要途径,而抑癌基因的去甲基化已成为近年来研究和开发抗癌药物的新靶点.
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小鼠高低转移性肝癌细胞系基因组不稳定性的研究
肝细胞癌(HCC)的发生和发展过程中涉及染色体杂合性丢失(loss of heterozygosity, LOH)和微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI)、染色体转位、点突变和基因扩增等多步遗传改变[1,2].近交系小鼠由于其具有高度的遗传学稳定性、表型均一性,所有等位基因均为纯合性等特点,为研究肿瘤不同阶段分子遗传学的可比性、可重复性和准确性提供了保证.为此我们应用微卫星多态性标记对小鼠高低转移性肝癌细胞系的基因组不稳定性进行了研究.
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子宫内膜癌PTEN及p53蛋白的表达
在子宫内膜癌的研究中已经确定了的、较为常见的分子生物学改变有p53突变、K-ras突变和微卫星不稳定性,大约各占子宫内膜癌的20%~30%[1]. 已发现子宫内膜癌中PTEN抑癌基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)突变率为32%~55%,是迄今为止子宫内膜癌中所发现的突变率高的基因改变[2-4].我们拟通过观察子宫内膜癌PTEN及p53蛋白表达的情况来探讨其与子宫内膜癌的发生、发展和预后的关系.
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结直肠癌 Lynch 综合征 MMR 蛋白和微卫星不稳定性检测分析
结直肠癌的发生是一系列复杂的基因疾病的结果。基于基因不稳定性的不同表现方式[1-3],一般可以将结直肠癌分成3组:(1)约70%的结直肠癌与染色体不稳定( CIN)有关,而CIN是由于染色体局灶等位基因失衡、染色体扩增或易位等原因造成的;(2)约15%的结直肠癌存在微卫星不稳定性( MSI),即通常由移码突变和碱基对替换所致的短串联重复核苷酸序列的改变;(3)其余15%的结直肠癌未显示存在CIN或MSI。 CIN结直肠癌是非整倍体的,与药物耐药和预后较差有关,而大多数MSI结直肠癌是二倍体,具有相对较好的总体生存期。就表观遗传学特征而言,大约1/3的结直肠癌存在CpG岛甲基化表型( CIMP)。 MSI和CIMP在肿瘤中有重叠,约60%高CIMP的肿瘤存在MLH1启动子的甲基化,从而导致MSI。遗传学上异源基因的结直肠癌分子分类对临床结直肠癌个体化治疗可能具有重要影响。结直肠癌的分子检测正越来越多地应用于临床实践中,本文着重介绍Lynch综合征的错配修复( MMR)蛋白检测和MSI分析在结直肠癌的风险评估、诊断、预后和指导个性化治疗中的作用。
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微卫星不稳定与大肠癌发生发展及预后的关系
微卫星不稳定(MSI)是指 DNA 序列中简单重复序列的碱基长度发生变化,其发生主要由于错配修复基因失活引起,是结直肠癌发病的重要分子生物学途径之一。MSI大概占所有大肠癌的15%,其中3%与遗传性非息肉病性结直肠癌有关,其余12%见于散发性结直肠癌。MSI的大肠癌有以下特征:发生部位大多位于右半结肠;分化程度多为低分化,同时伴有淋巴细胞浸润;组织类型多为黏液型或者印戒细胞类型。MSI的发现增加了对大肠癌多样性的认识,并且对于患者的相关治疗及预后有一定的启示。
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体内微核实验检测结直肠癌患者遗传不稳定性
大多数人类肿瘤都具有基因组遗传不稳定的物质基础.其表达在细胞水平上为染色体不稳定性和微卫星不稳定性[1-3],这种遗传与环境风险因子相互作用对体细胞基因组稳定性的影响,为目前肿瘤细胞遗传学和分子流行病学研究提供了新的思路.微核作为染色体损伤的生物学标记物,反映了机体遗传不稳定性状态或受到环境诱变剂和致癌剂暴露作用的影响,在肿瘤的遗传易感性检测及肿瘤防治研究中已广泛运用[4-5].本研究随机在临床抽取一组结直肠癌患者,进行人外周血淋巴细胞微核检测,以探讨患者体内自发淋巴细胞微核形成与结直肠癌基因组遗传不稳定的相关性.
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食管癌早期诊断的分子生物学标志物
肿瘤相关基因产物及肿瘤标志物的检测用于食管癌的早期诊断,已显示出可喜前景.核抗原Ki67、P53、P21、p27、c-myc蛋白和Bcl-2蛋白过量表达,cyclin D1基因蛋白表达及DNA倍体的定量检测,抑癌基因FHIT缺失、P16基因点突变,血清癌胚抗原(CEA)、鳞状上皮细胞癌相关抗原(SCC)、P53抗体的联合检测,微卫星不稳定性与D3S4513、D5S2501等标志物,iNOS,Cox-2蛋白,TSGF,端粒酶,Egr-1 mRNA和蛋白,脂肪酸合酶,TGFβ1和TGFβR Ⅱ,维甲酸受体RAR β等在食管癌的早期诊断中均不同程度的显示出自身的价值,对食管癌早期诊断的研究有重要作用.
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错配修复缺陷,微卫星不稳定与胃癌
人类错配修复系统可以识别并纠正DNA复制过程中出现的错误.错配修复系统缺陷使这些错误往往无法消除,导致恶性肿瘤的发生.患者经常表现出微卫星不稳定性.目前发现与人类恶性肿瘤发病有关的错配修复基因包括hMSH2、hMSH3、hMSH6、hMLH1及hMLH3.这些基因的突变在遗传性非息肉病性结直肠癌中的作用已得到广泛证实.临床上很大一部分胃癌患者表现出微卫星不稳定性,提示错配修复缺陷在胃癌的发病中亦起到重要作用.众多的研究发现错配修复基因的突变在胃癌中并不常见,而由于hMLH1启动子甲基化及失活所引起的错配修复缺陷成为胃癌发病机制中一条重要途径.这些患者常具有微卫星不稳定性及独特的临床特征.
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散发性结直肠癌46例微卫星不稳定性的研究
结直肠癌可以分为遗传性的和非遗传的,遗传性结直肠癌有两种,一种是家族性腺瘤样息肉病(familial adenomatous polyposis,FAP);另一种是遗传性非息肉样结直肠癌(hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC).非遗传性结直肠癌即为散发性结直肠癌.
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兰州胃癌及异型增生组织微卫星不稳定性的检测
目的: 研究兰州地区胃癌与微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI)的关系, 从基因组不稳定的角度探讨河西地区胃癌高发可能的发病机制.方法: 采用苯酚-氯仿法分别提取43例胃癌和21例胃异型增生及相应对照组织DNA. 应用银染PCR-SSCP检测技术检测Bat25、Bat26、D2S123、D5S346及D17S250微卫星位点, 并对胃癌及癌前病变组织中MSI进行分析.结果: 43例胃癌患者中MSI检出28例, 检出率为65.1%. 其中MSI-H为8例, MSI-L 20例, 分别为28.6%和71.4%;21例胃异型增生组织中MSI检出6例, 检出率为28.6%. 其中MSI-H 2例占33.3%;MSI-L 4例占66.7%.结论: 兰州地区胃癌患者中MSI检出率很高,MSI可能是该地区胃癌高发的另一种分子致癌机制, 并可以作为胃癌诊断的一个较为敏感的指标.
关键词: 胃癌 微卫星不稳定性 聚合酶链式反应-单链构象多态性分析 -
基因不稳在胃癌发生中的作用
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其发病机制尚未完全明了.基因不稳在肿瘤的发生、发展中起重要作用,亦是导致胃癌发生、发展的分子基础.研究表明,基因不稳可以分为2种不同的途径,即染色体不稳和微卫星不稳.染色体不稳涉及到抑癌基因的大片段丢失和重排,由此导致了大量的异倍体细胞.而微卫星不稳则涉及到错配修复基因的突变,由此导致了广泛的微卫星不稳定性.卫星不稳定性胃癌常常伴有甲基化的异常改变.近年发现线粒体基因不稳亦参与了肿瘤的发生,本文结合我们自己的工作,重点讨论了染色体不稳、微卫星不稳、甲基化异常及线粒体基因不稳在胃癌发生发展中的作用.
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毛细管电泳法检测肝细胞癌微卫星不稳定性的影响因素
目的:探索适用于肝癌大规模基因组扫描的自动化微卫星不稳定性基因分型实验方法.方法:应用6对高度多态性微卫星标记物对56例肝细胞癌基因组进行PCR扩增,产物通过MegaBACE 500毛细管电泳测序仪进行电泳,采用Genetic Profiler软件进行基因分型,摸索不同PCR条件以及PCR体系残留混合物对分型结果的影响.结果:通过1次PCR和电泳能得到48个样品的分型结果,常见的等位基因表型包括杂合子、纯合子、杂合子丢失、微卫星不稳定性和等位基因失衡等几种模式,其中微卫星不稳定性基因表型呈多种特征;MSI的频率为32.1%(18/56),10例(18.2%)出现高频MSI;PCR反应体系残留混合物(dNTP、引物和盐离子的浓度等)对基因分型的结果有明显不利影响,可使等位基因片段大小分析结分错误导致结论错误;样品浓度对分析结分影响较小,在50 mg/L时比较合适.结论:少数肝细胞癌存在MSI,表明其在HCC发生中作用较小.应用MegaBACE 500毛细管电泳测序仪和GeneticProfiler分析软件进行微卫星基因组扫描效率高,结果可靠,但测序体系中必须维持佳盐离子的浓度和样品浓度.