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小鼠高低转移性肝癌细胞系基因组不稳定性的研究
肝细胞癌(HCC)的发生和发展过程中涉及染色体杂合性丢失(loss of heterozygosity, LOH)和微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI)、染色体转位、点突变和基因扩增等多步遗传改变[1,2].近交系小鼠由于其具有高度的遗传学稳定性、表型均一性,所有等位基因均为纯合性等特点,为研究肿瘤不同阶段分子遗传学的可比性、可重复性和准确性提供了保证.为此我们应用微卫星多态性标记对小鼠高低转移性肝癌细胞系的基因组不稳定性进行了研究.
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简便的小鼠皮片移植方法
小鼠皮肤移植模型是研究免疫排异反应及鉴定近交系小鼠的基本方法之一[1].早在1951年,Billingham等[2]就对小鼠皮肤移植的方法进行过详细的描述,以后又不断有在此基础上进行改良的报道[3～5].我们在参考上述文献的基础上,于2001年8月至12月,通过对不同麻醉剂、供皮来源和包扎方法的比较,建立了一种简单易行、经济实用的小鼠皮肤移植方法.
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利用优选的微卫星标记建立常用大小鼠品系的遗传监测体系
目的 利用微卫星位点在不同近交系小鼠、大鼠中可能具有的多态性,分别筛选出可以一次性区别5种常用近交系小鼠和3种常用近交系大鼠的微卫星引物组合,为近交系小鼠和大鼠的遗传监测分析提供高效的微卫星位点与简易可靠的鉴定条件.方法 通过查询相关数据库以及文献报道,按照已有明确的微卫星实验数据记录为原则,进行比对和筛选,组成了小鼠37个和大鼠24个微卫星位点库.通过PCR扩增和5％琼脂糖电泳鉴定,优化筛选出可以区分单一品系和所有品系的微卫星位点组合.结果 小鼠优选出11个位点可用于5种常用近交系的鉴定,并建立了1个包含6个微卫星位点的库可用于5种小鼠品系的遗传监测;大鼠优选出6个微卫星位点,可用于3种常用近交系的监测.结论 成功建立了一套可以区分常用5种小鼠和3种大鼠品系的微卫星监测方法.
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小鼠胚胎移植技术方法比较
以近交系小鼠C57BL/6J、BDF1小鼠作为供体胚小鼠,封闭群昆明种小鼠作为代母,对实验小鼠胚胎移植的三种方法,即:对小鼠受精卵(或2个细胞期胚)经由代母输卵管口移植、经由代母输卵管壁移植及对小鼠进行子宫移植(8细胞期胚)的方法了进行实验研究,并对各方法适于使用的动物对象、实验要求、产仔率、优势与不足等做了进一步的探讨,为今后的实验动物与动物实验提供参考依据.
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实验小鼠胚胎冷冻技术实验研究
本文在建立和引进实验小鼠超排卵技术、卵采集技术、胚胎输卵管移植技术的基础上,应用小鼠初期胚的快速冷冻复苏法对实验小鼠C57BL/6J、BDF1、A/wy及昆明种小鼠进行了初期胚的冷冻保存与仔鼠存活率的研究,并将冷冻复苏胚与非冷冻胚经移植后的生存率作了比较,均取得了重复性的结果,可望为实验小鼠胚胎种子库提供参考依据.
关键词： 近交系小鼠 快速胚胎冷冻(复苏) 输卵管移植 -
近交系小鼠微卫星DNA引物的筛选和Tm值优化研究
目的 通过对近交系小鼠微卫星引物的筛选和Tm值优化研究,以探索小鼠DNA多态性检测方法.方法 随机选用32对位于小鼠不同染色体的微卫星引物,用PCR扩增方法对常用C57BL/6、C3H、BALB/c、DBA/2、129、FVB及SCID近交系小鼠DNA多态性进行扩增和电泳分析,并对其中25对引物的Tm值进行优化.结果 25对引物可稳定扩增,2对引物在不同品系小鼠间表现为单态性,23对引物在不同品系间呈多态性,10对引物呈显著多态性(3～4个态性).结论 所筛选和优化的25对微卫星引物,对不同品系小鼠DNA可稳定扩增,其电泳结果具有较高的DNA多态性,可反映不同品系小鼠的遗传概貌.
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TW近交系小鼠的血液生化及毛色基因检测
目的 建立野生来源TW (Tianjin wild,TW)近交系小鼠的体重和血液生化正常范围并检测其毛色基因纯合性.方法 分别选用F23代TW近交系成年小鼠,进行毛色基因测试,并检测动物的体重及血液生化指标.结果 6周龄前,雌雄TW小鼠体重差异无统计学意义(P＜0.05)；6周龄后雄性TW小鼠体重明显高于同期雌性小鼠体重,差异具有统计学意义(P＜0.05).血生化检测指标中,雌雄小鼠的总蛋白和甘油三酯均值不同,差异具有统计学意义(P＜0.05),其他各项差异均无统计学意义(P＞0.05),且与文献报道的其他品系结果不一致.毛色基因测试,F1代小鼠的毛色为白腹野生色,其基因型为AWAWBBccDD.结论 TW小鼠毛色基因已达纯合,且在一些指标上与通用实验小鼠品系不同,具有自身特点.
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辽宁省6种常用近交系小鼠10个微卫星位点的遗传质量检测报告
目的 利用微卫星技术对辽宁省6种近交系小鼠进行遗传质量分析.方法 根据 Mouse GenomeDatabase和相关文献选取10个多态信息丰富的位点和引物,进行PCR扩增和PAGE电泳,对小鼠的遗传多态性进行研究.结果 不同品系小鼠同一位点的扩增结果表现出多态性,同一品系同一位点表现单态性,所有小鼠的10个位点都处于纯合状态;遗传距离分析表明,C57BL/10与C57BL/6J小鼠之间的遗传距离近,为0.1021,遗传距离远的是BALB/c与C57BL/10、C57BL/6J,分别为0.1635和0.1614.结论 运用所筛选的10个微卫星位点可以对近交系小鼠进行遗传质量检测,说明该方法具备可行性.
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微卫星DNA分析国内24个近交系小鼠遗传状况
目的 利用微卫星位点对国内24种近交系小鼠进行遗传状况分析.方法 用前期筛选的富含多态性和等位基因数多的30个小鼠微卫星位点,合成荧光标记引物,对近交系小鼠基因组DNA进行PCR的扩增,经STR扫描对各近交系小鼠品系进行基因分型.结果 在24个近交系小鼠品系中,有16个品系在品系内在30个位点上均具有相同基因型.而在不同品系间同一位点具有多态性,可初步对不同品系进行鉴别区分.其余品系内个别动物存在多态性.结论 所选位点可以参考用于近交系小鼠遗传质量检测分析,并进行初步品系检测鉴定.
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近交系小鼠移植性肝癌模型建立及对比分析
目的：通过对比分析选择建立原位移植性肝癌模型的佳小鼠品系。方法选取C57、C3H和BALB／c各10只小鼠分别作为模型组Ⅰ、模型组Ⅱ和模型组Ⅲ，沿腹中线开腹后将H22细胞接种到各模型组小鼠肝脏实质内。于注射后第15天剖腹探查，观察各组成瘤率，测量腹水量和肿瘤体积，并进行肿瘤病理学分析。结果三组小鼠存活率均为100％，15天后三组小鼠均产生腹水，但三组腹水量之间不具有统计学差异。模型组Ⅰ小鼠肝癌移植成功率为100％，高于模型组Ⅱ的60％和模型组Ⅲ的30％。模型组Ⅰ小鼠肝脏肿瘤全部为大块紧实灰白色病灶，其肿瘤平均体积显著大于模型组Ⅱ和模型组Ⅲ（ P＜0.05）。病理结果证实三组小鼠肝脏的灰白色病灶均为原位肝细胞癌。结论 C57小鼠是复制原位移植性肝癌模型较为理想的实验动物，为今后研究原位肝癌的发病机制提供良好的实验平台。
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BALB/c小鼠遗传质量检测的新方法
目的 比较随即扩增多态性方法(RAPD)、微卫星方法(STR)与生化标记方法对近交系小鼠遗传质量检测的差异,为近交系动物遗传质量控制提供一种分子生物学方法.方法 提取近交系小鼠BALB/c基因组DNA,用6条RAPD引物和20对STR引物对其进行PCR扩增,用生化标记法检测13个位点.结果 在6条RAPD引物中,引物2(p2)、引物3(p3)、引物5(p5)和引物6(p6)这四条引物扩增的条带出现差异,表现为不同的RAPD图谱;在20对STR引物中,引物2、4、10和11,这四对引物扩增的条带出现差异,表现为不同的STR图谱;13个生化标记位点中,过氧化氢酶-2(Ce-2)等6个生化位点发现杂合基因.结论 RAPD和STR可用于验证生化标记方法的实验结果,并用于保证近交系动物的遗传质量.
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小鼠2细胞期胚胎移植方法的探讨
目的 以近交系C57 BL/6J小鼠作为供体胚小鼠,封闭群ICR小鼠及昆明鼠作为假孕体,对2细胞期的胚胎移植方法和假孕鼠品系进行对比探讨.方法 经超数排卵的C57 BL/6J雌鼠于正常雄鼠交配,取受精卵,培养到2细胞期,进行输卵管伞移植和输卵管壁移植,妊娠产仔.结果 从KM为假孕鼠,对2细胞期胚胎进行的输卵管壁移植的妊娠数量多18只,90%的妊娠率,产仔数多188只,产仔率达34.8%.结论 输卵管壁移植的技术简单易行具有较高的妊娠率及产仔率.
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用于疫苗研究的感染动物模型的建立及其应用
动物模型在疫苗研究中具有重要作用,利用动物模型可对疫苗的安全性、免疫原性以及保护效力进行评价.本文对用于疫苗研究的感染动物模型的建立方法,包括动物的选择、感染剂量和感染途径、感染结果的描述以及建立感染动物模型的制约因素等作一综述.
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近交系小鼠H-2基因与接种乙型肝炎疫苗后无(弱)应答的相关性分析
目的 分析近交系小鼠H-2基因与接种乙型肝炎疫苗后无(弱)应答的相关性,建立免疫无应答小鼠动物模型,从基因水平和细胞因子水平研究免疫无应答的遗传机制,为乙肝疫苗的研制及人类免疫无应答的研究提供理论依据.方法 采用微量细胞毒法检测不同近交系小鼠(DBA/1、BALB/c、NIH、SJL、C57BL/6、C57BL/10)的H-2单倍型;PCR法检测小鼠的H-2A和H-2E基因.用3种重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母、汉逊酵母、CHO细胞)和治疗性乙型肝炎疫苗(乙克)分别免疫6种不同品系近交系小鼠,采用ELISA法检测抗体水平,流式细胞术检测小鼠CD4+、CD8+、CD19+T细胞和Treg细胞免疫前后的变化.结果 不同近交系小鼠有不同的H-2单倍型.除封闭群小鼠NIH外,近交系小鼠SJL在A基因区内有两条200和500 bp的区带,其余均为1条区带;不同品系小鼠在H-2E基因区段均无异常表现.C57BL/10小鼠对乙肝疫苗表现为免疫无(弱)应答.结论 C57BL/10小鼠可作为免疫无应答实验动物模型,进行乙肝疫苗免疫无(弱)应答的相关性研究.建议在进行疫苗效力检测时先检测所用小鼠的H-2基因型,根据小鼠H-2基因的单倍型与免疫反应的相关性筛选实验用小鼠.
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近交系小鼠数量性状基因的定位克隆策略
许多影响人类健康的重大疾病如高血压、哮喘和肥胖等都是复杂性状相关疾病.模式动物小鼠作为复杂性状研究的重要遗传资源,至今已有2900个数量性状基因座(QTL)在小鼠中被初步定位,然而国内对于小鼠复杂性状相天基因研究的报道并不多.本文埘近交系小鼠在复杂性状研究中的优势以及利用近交系小鼠进行QTL初步定位和精细定位的策略进行了综述,并重点介绍小鼠QTL克隆所面临的挑战,提出利用合作杂交计划和野生小鼠资源解决QTL基因研究费时费力且定位分辨率低等一系列瓶颈问题的新思路.
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上海地区常用近交系小鼠品系的单核苷酸多态性分型研究
目的 比较上海地区常用近交系小鼠单核苷酸多态性(SNP)位点分型情况.方法 采用多重PCR-LDR检测技术,选取上海地区2家单位的10个近交系小鼠,对21条染色体上的44个SNP位点进行分型检测,同时,随机选取上海地区2个近交系品系作为双盲样本,对分型方案进行验证,差异位点利用测序法进行验证.结果 同一来源的10个近交系小鼠,同品系间SNP分型结果完全一致;不同种群来源6个品系SNP分型结果提示,BALB/c,FVB,DBA/2和C3H/He在44个位点上分型结果均相同,CBA和C57BL/6分别在7个和2个位点存在差异;差异位点经测序验证结果与SNP分型方案一致.结论 上海地区常用近交系小鼠中,同一来源的品系中SNP遗传质量具有良好稳定性和一致性,不同种群来源的相同品系间SNP分型存在差异.
关键词： 近交系小鼠 遗传监测 单核苷酸多态性(SNP)分型 -
单核苷酸多态性(SNP)在近交系小鼠遗传检测中的应用
目的 利用单核苷酸多态性(SNP)位点构建多重聚合酶链反应和链接酶反应(PCR-LDR)方案,为近交系小鼠的遗传检测提供一种快速、简便的方法.方法 在SNP公共数据库中挑选51个SNP位点,该51个位点分布于每条常染色体和性染色体,共分为5组,进行多重PCR-LDR方案构建,并将该方案作为遗传质量检测方法对采集的7个近交系样本进行检测.结果 在送检的7个近交系小鼠样本中,纯合度都为100％,相同来源相同品系小鼠的遗传背景一致,但在不同单位的近交系小鼠中,某些SNP位点有差异,CBA/Ca/BK1和CBA/JSlac在a9、a10、b5、b9、c1、c12、e1、e2位点的遗传检测结果不同,C57BL/6/BK1和C57BL/6JS1ac在c7、c10位点的遗传检测结果不同.另外,两家公司各有5个位点在所有品系中基因型相同,因此有效位点数各为46个.结论 构建的多重PCR-LDR方案能有效对两家动物生产单位的近交系小鼠进行检测,可用于常见近交系小鼠快速、高通量的基因分型,有利于大规模遗传质量检测和品系鉴定.
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125 I粒子照射T739小鼠膀胱癌的实验研究
笔者在建立T739近交系小鼠低分化移行细胞膀胱癌动物模型的基础上,通过125I粒子植入肿瘤的实验,观察肿瘤的生长、组织学变化,了解125I粒子照射治疗膀胱癌的生物学效应,为临床应用125I粒子治疗膀胱癌提供实验依据.
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近交系小鼠不同供受体组合对移植心脏存活期的影响
目的:在小鼠异位心脏移植模型中观察近交系小鼠不同品系的供受体组合对于移植心脏生存时间的影响.方法:采用腹腔异位小鼠心脏移植模型,术后通过扪诊评估移植心功能,比较C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J常见近交系小鼠六种不同供受体组合生存时间的差异,并进行组织病理评分.结果:C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J六种不同供受体组合的受体心脏存活时间无统计学差异,中位生存时间均为7～8 d,而且组内生存时间差异小;移植心脏组织病理检查发现所有标本均表现为严重的排斥反应,各组间无明显差异.结论:C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J不同供受体组合均能符合移植免疫研究的要求,但是综合考虑手术难度、术后检测、喂养以及感染等因素,C57BL/6J和C3H/HeJ适合作为供体小鼠,而Ba1b/c更适合作为受体小鼠.
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三个品系小鼠的遗传监测
目的 检测新培育的IRM-1近交系小鼠的基因纯合性,并与IRM-2、615近交系小鼠进行比较,确定其遗传特性.方法 按照国家标准GB/T14927.1-2001、GB/T14927.2-2001遗传检测操作规程,对IRM-1近交系小鼠进行Akpl等25个遗传生化标记基因纯合度、组织相容性基因纯合度的测定,用同系异体间进行移植试验;以及毛色基因测试.结果 IRM-1近交系小鼠的25个遗传生化标记基因均为纯合体,其中有5个生化标记基因多态性位点与IRM-2近交系小鼠不同,有8个生化标记基因多态性位点与615近交系小鼠不同;皮肤移植100d后,未见排斥现象;毛色基因测试,F1的毛色全部为野生色,基因型为aaBBCCDD.结论 IRM-1小鼠遗传纯合度已达国家标准,是基因位点高度纯合的近交系小鼠.
