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陕西西安地区汉族孕龄女性MTHFR基因多态性的分布研究
目的 探讨西安地区孕龄女性亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因多态性构成频率及地域空间分布特征.方法 随机抽取本地区l 966名汉族健康孕龄女性为研究对象,应用全血基因组DNA提取、PCR扩增、芯片杂交和芯片识读仪扫描出患者基因型,统计分析MTHFR C667T位点的基因型频率和等位基因频率,与已报道的其他地区汉族女性的数据进行比较,采用地域经纬度空间分布相关分析,并采用系统聚类法和K-means聚类法分析不同地域的突变频率差异.结果 西安地区汉族孕龄女性MTHFR C677T位点突变型T的频率为53.3％,显著高于我国南方9个地区,但却明显低于北方的山东(63.1％)、河南(60.2％)及河北(57.7％)地区.MTHFR C677T基因型分布在我国北方地区可明显聚为一类,南方地区聚为另一类,我国汉族孕龄女性MTHFRC677T基因型的人群分布存在南北差异,T等位基因频率和中国的地域纬度呈现显著性正相关(r=0.868,P＜0.001),该突变频率随着我国地域纬度的增加而显著性升高.结论 西安地区汉族孕龄女性MTHFR C677T位点突变型T的频率较高,该基因多态性分布具有区域特异性;我国北方地区突变频率高于南方地区,并随着地域纬度的增加而升高.在我国北方地区提高叶酸的干预剂量,将有可能获得更理想的一级预防效果.
关键词： 亚甲基四氢叶酸还原酶 单核苷酸多态性 突变频率 孕龄女性 -
海南省琼中县3392名中学生地中海贫血血细胞参数与基因检测结果分析
目的 研究海南省琼中黎族苗族自治县地中海贫血血细胞参数及基因检测结果,为有效预防和监控该地区地中海贫血提供依据.方法 采集海南省琼中县3392名中学生外周血进行血常规、血红蛋白电泳和脆性试验筛查,阳性样本行基因检测,对基因类型、突变频率及血细胞参数等情况进行分析.结果 3392名受检者中,初筛阳性1439例,经基因检测确认阳性1049例,其中单纯α地贫784例(74.7％);单纯β地贫143例(13.6％);α、β复合型地贫为122例(11.6％).α地贫以αα/-α3.7(33.4％)、αα/-α4.2(31.3％)为主,β地贫中βCD41-42/βN(76.2％)突变常见;除HbA和女性血红蛋白外,其它各血细胞参数在健康组、α地贫、β地贫3组间均存在统计学差异(P<0.05);血常规、血红蛋白成分分析联合初筛效果佳.结论 琼中县α、β地贫携带率及基因型分布符合海南地区的基本特点,各类地贫血细胞参数与基因相关性、适初筛方案均可为该地区的地贫防控工作提供依据.
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非小细胞肺癌与结直肠癌KRAS突变分析
肺癌和结直肠癌都是很常见、发病率很高的恶性肿瘤.肺癌目前是全世界癌症死因的第1名,其中80％为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)[1].结直肠癌是癌症死亡的第3大原因,每年几乎有100万例的发病率,无论在男性还是女性[2].由于很多患者在诊断时已经处于中晚期,常规治疗往往不能达到预期效果.随着分子靶向药物的研发和个体化治疗的发展,使得癌症患者的治疗有了很大改善,如酪氨酸激酶抑制剂的应用.KRAS基因与肺癌和结直肠癌的发生发展有着密切的关系,同时KRAS突变是所有肿瘤中突变频率高的基因,因此成为研究的焦点.KRAS基因是EGFR的下游因子,若基因发生突变,则患者不能从酪氨酸激酶抑制剂中获益.因此KRAS的突变成为靶向治疗的关键.本研究用测序法检测非小细胞肺癌和结直肠癌中KRAS的突变情况,研究其与临床病理特征之间的关系,并横向比较KRAS基因突变在两种癌症间的异同.
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微卫星稳定性的遗传调控
微卫星DNA(microsatellite DNA)是指广泛存在于真核生物基因组中的简单串联重复序列,以2～6个核苷酸为重复单位.微卫星代表基因组内不稳定的区域,比非重复DNA序列的突变频率高得多.微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)是由于错配修复基因突变而引起的简单重复序列的改变,常表现为重复单位数量的增加或减少.这种不稳定性具重要意义:第一,不稳定性导致多态的等位基因,用于人和其它较高等真核生物的遗传作图研究.第二,基因内或基因附近简单重复序列长度的变化,能改变这些基因的表达或功能[1],在人类,许多遗传疾病反映出简单重复序列的扩增[2].第三,序列不稳定性的增加,可用以诊断某些具DNA错配修复缺陷的肿瘤.本文综述序列不稳定性的机制及序列稳定性的调控及其与人类疾病的联系.
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艾滋病病毒感染者体内基因多态性的初步分析
我们近的研究发现,和美国白人及欧洲人群相比,中国普通人群(如汉族、维吾尔族、藏族等)的CCR5Δ32和CCR5m303等位基因突变频率极低,这提示,我国人群对性接触传播的HIV-1病毒株(R5)有较大的遗传易感性.
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汉、蒙古族人MBL基因ExonⅠ54位密码子点突变频率及其血浆含量相关性研究
目的调查健康汉、蒙古族人甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)基因54位密码子点突变的情况,测定健康汉、蒙古族人血浆MBL含量,并对健康汉、蒙古族人MBL基因54位密码子点突变频率与其血浆MBL含量进行相关性分析. 方法 PCR扩增,测定序列并建立MBL基因点突变检测方法,即PCR-RFLP方法(BanⅠ酶切);用ELISA法测血浆MBL含量. 结果 (1) 建立了MBL PCR方法,该方法特异性高,重复性好,低检出量为160pg DNA.(2) MBL的限制性内切酶BanⅠ酶切结果:通过酶切电泳分析结果显示,所扩增标本出现下列3种情况:①MBL 54位密码子野生型纯合子为2条带,对应的相对分子质量为232bp和93bp;②54位密码子突变体纯合子只显示1条约325bp带;③54位密码子野生型突变体杂合子显示325bp、232bp和93bp 3条带.(3) 通过简单数基因计算MBL基因54位密码子点突变的频率,健康汉、蒙古族人基因突变频率分别为0.2321和0.1757.(4) 血浆MBL含量的测定:56例健康汉族人血浆MBL含量的平均值为1998.750μg/L,标准差为1505.152;37例健康蒙古族人血浆MBL含量的平均值为2525.676μg/L,标准差为1955.188.(5) 健康汉族人血浆MBL含量与其编码基因ExonⅠ 54位密码子的点突变频率,经等级资料的相关分析,χ2=48.107,P＜0.001;r＝-0.62;二者呈负相关.健康蒙古族人血浆MBL含量与其编码基因ExonⅠ 54位密码子的点突变频率经等级资料的相关分析,χ2=32.86,P＜0.001;r＝-0.641;二者呈负相关. 结论 (1) 建立的MBL PCR-RFLP测定点突变的方法特异性高、重复性好、灵敏度较高;(2) 健康汉族人、蒙古族人的基因突变频率,汉族人比蒙古族人基因突变频率偏高,差别无统计学意义;(3) 健康汉族人、蒙古族人血浆MBL水平,汉族人含量的平均值比蒙古族人偏低,但均值比较差别无统计学意义;(4) 健康汉、蒙古族人MBL基因ExonⅠ 54位密码子的点突变频率与其血浆MBL含量均呈负相关.
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江西籍肝豆状核变性第八外显子突变的研究
肝豆状核变性又称Wilson's病(Wilson's disease,WD),是一种铜代谢障碍的常染色体隐性遗传病,该基因定位于13q14.3,它含有21个外显子及20个内含子,其基因表达产物为参与铜转运的三磷酸腺苷酶(ATP)7B,故该基因又称为ATP7B基因,ATP7B酶分为三个区,第一区为金属离子结合区,第二区为磷酸化区,第三区为跨膜区.基因突变方式多种,但以点突变为主.因基因突变导致ATP7B酶发生改变,从而不能有效地运输铜而形成铜蓝蛋白,因此使铜在组织器官存积,发生脑、肝、肾等多脏器受损.经国内外学者长期研究表明[1,2],在众多的点突变中,中国人肝豆状核变性以2273位点G→T突变为高发突变热点[3],上海二医大对60例WD患者进行了Arg778Leu突变的检测,突变频率达45.6%,因此我们对12例肝豆状核变性患者采用荧光定量PCR方法检测Arg778Leu基因突变,结果这12例江西籍肝豆状核变性患者中有10例存在该突变,他们均为杂合子.而5例正常体检者均正常.说明Arg778Leu突变为肝豆状核变性的高发突变位点,可作为肝豆状核变性众多突变中的首选.
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突变受阻性扩增系统快速检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的初步研究
利福平(RFP)是结核化疗方案中的一个关键药物,它的应用可明显缩短结核病的疗程.因此,创建快速、简便的检测方法一直是基础研究中的一个重要课题.突变受阻性扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)[1]是一种可以检测任何已知点突变或小基因片段缺失的扩增技术,简便、可靠、无同位素污染.我们选择与结核分枝杆菌(结核菌)RFP耐药相关的rpoB基因中突变频率高的3种突变形式:531 TCG→TTG,526 CAC→TAC,516 GAC→GTC来设计ARMS特异性突变引物,ARMS-聚合酶链反应(PCR)扩增后结合微孔板探针杂交酶免疫技术(EIA)加以检测其扩增产物,进而推断其RFP耐药与否.
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先天性巨结肠症RET和EDNRB基因的突变
目的:了解中国人群先天性巨结肠症(HD)发病与RET基因,EDNRB基因突变的关系,及同一患者是否两个基因同时突变的状况.方法:随机将HD患者分2组,即检测RET/EDNRB组(A组)56例及EDNRB组(B组)40例,同时设二个相同数量对照组(C组).每人采集外周静脉血2-3 mL经盐析法提取DNA后,应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法,对RET基因20个外显子中的第6,13,15,17外显子(E6,13,15,17)和EDNRB基因7个外显子中的第4,5,6外显子(E4,5,6)进行基因突变的检测,将突变样品进行自动测序分析.结果:A组中2例散发性患者的E13,E17扩增片段在SSCP分析时有泳动变位,并经DNA自动测序仪检测为基因多态,CTG→CTT,Leu769→Leu,散发性突变频率为4%(2/48);2例家族性患者的E15扩增片段在SSCP分析有泳动变位,DNA测序1例为错义突变Lys889→Thr,另1例为两个同义突变GTGAAGAGGAGCCA→GTTAAGAGGAGTCA分别在V906和S909密码子上,家族性突变频率为25%(2/8);1例散发性短段型患者EDNRB基因E5在SSCP分析时有泳动变位未能测序;B组中1例散发性短段性患者EDNRB基因的E4在SSCP分析有泳动变位,经DNA测序证实在核苷酸位点831,密码277上G→A的置换,Leu277→Leu为司义突变,突变频率为2.7%(1/37),家族性3例患者未检测出突变.C组未检出RET,EDNRB基因的突变.家族性患者与散发性患者RET突变结果经统计学处理x2=4.95,P＜0.05,OR=8,OR95CI=1.28-49.87.结论:中国人群的先天性巨结肠症发生确实与RET和EDNRB基因突变有关,家族性HD患者RET基因突变达25%,散发性HD患者主要以EDNRB基因突变为主,无1例患者有RET和EDNRB两个基因同时突变.同时显示有家族史比没有家族史发生HD的危险性大8倍,其可信限在95%.
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乙型肝炎、性病和HIV-1感染人群中CCR5,CCR2和SDF1等位基因多态性的研究
目的:研究乙型肝炎、HIV-1感染者和性病患者中CCR5,CCR2和SDF1等位基因的分布及其特点.方法:收集乙型肝炎患者(268例)、艾滋病感染者(130例)和性病(259例)的血液标本共657份,应用QIAGEN全血细胞基因组提取试剂盒,分离纯化人血细胞基因组DNA样品应用PCR或PCR-RFLP分析CCR5,CCR2-641和SDF1-3'A等位基因突变频率和分布特点.结果:在乙型肝炎、性病和HIV-1感染者人群中,CCR5△32的突变频率分别为0.19%、0%和0%.在259例个体性病患者中只有一例男性发生了杂合子突变,而在乙型肝炎和HIV-I感染者人群中没有检测出CCR5△32突变基因.可见,CCR5△32的突变率较低反之,CCR2-641的突变频率较高,与前述三种患者对应的突变频率分别为19.3%、19.6%和20.7%.进而分析发现SDF1-3'A等位基因在乙肝、性病和HIV-I感染人群中的突变率分别为27.8%,27.4%和26.9%.应用X2检测与统计学分析显示在乙肝,性病和HIV-I感染人群中CCR2-641和SDF1-3'A等位基因突变分布之间无连锁关系结论:突变频率很低的CCR5△32基因型在上述3种类型传染病的发病过程中可能不起主要作用;而突变频率较高的CCR2-641和SDF1-3'A基因型的功能及其在上述3种传染病进程中的意义有待进一步研究.
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汉族人IL-12b和IL-10启动子区基因多态性与HBV感染的相关性
目的:我国是一个乙型肝炎大国,乙型肝炎感染及其转归显然有人种、人群差异.本研究对我国汉族人群中乙型肝炎病毒(hepatitis virus B,HBV)感染和发病与白介素-12 p40(interleukin-12 p40,IL-12b)、白介素-10(interleukin-10,IL-10)启动子区基因多态性之间的关系进行了探讨.方法:利用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析(restricted enzyme-fragmentlength polymorphisms,PCR-RFLP)的方法对非相关人群的健康人群与HBV感染患者(轻、中度慢性肝炎、重度慢性肝炎)和HBV感染家系中的HBV携带者、既往HBV感染者、健康人群的IL-12b,IL-10启动子区-540C、-592A(IL10-5'A,IL12-5'C)单碱基多态性(SNP)进行了分析,并且对两个突变位点进行了基因测序.使用SAS统计软件进行统计分析.结果:IL10-5'A、IL12-5'C在非相关人群中的分布技符合Hardy-Weinberg平衡.非相关人群IL10-5'A、IL12-5'C突变等位基因在HBV患者中的频率近似于健康人群(IL10-5'A,HBV患者42.08%,健康人41.9%,P＞0.05;IL12-5'C,HBV患者55.8%,健J康人64.6%,P＞0.05).IL10-5'A与IL12-5'C基因分布在慢性肝炎(轻中)和慢性肝炎(重)两组无显著性差异(P＞0.05).提示IL10-5'A,IL12-5'C单碱基多态性(SNP)对乙型肝炎病情轻中无影响;HBV感染家系中IL10-5'A,IL12-5'C单碱基多态性在携带者、健康人群以及既往感染者三组间均匀分布,IL12-5'C突变频率与非相关人群相似(非相关人群-540T 55.3%,相关人群-540T 55.9%);IL10-5'A突变频率与非相关人群有显著性差异(非相关人群-592C42.0%,相关人群-592C 19.5%,P＜0.01).结论:IL10-5'A突变比IL12-5'C突变在HBV感染家系中可能起到更重要的作用,或影响相关人群对HBV的易感性.
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p53与胰腺癌及其基因治疗的研究进展
p53基因是人类肿瘤细胞中突变频率高的基因.大量研究表明,p53功能失活的肿瘤细胞更具有侵袭性,并对放、化疗更不敏感.胰腺癌中普遍存在p53基因异常[1],p53对胰腺癌的发生、发展及其对放、化疗敏感性的作用引起消化界的广泛关注.近年来,恢复肿瘤细胞的野生型p53基因表达已成为一种有效的基因治疗途径.本文对p53基因与胰腺癌的关系以及胰腺癌p53基因治疗的研究近况综述如下.
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结核分枝杆菌katG S315T突变频率及突变株特征的研究
近年来分子遗传学研究表明,异烟肼(INH)耐药机制复杂,涉及多个基因,至少包括katG、inhA、kasA以及ahpC等基因[1-3].研究表明,INH耐药与编码过氧化氢酶-过氧化物酶的katG基因突变的联系强[4,5],其中katG基因的一种特定替换,315位密码子的AGC→ACC(Ser→Thr,或katG S315T)颠换报道多.
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BRAF突变提示转移性结直肠癌患者转移灶切除术后预后不良
BRAF突变发生于5％～11％的转移性结直肠癌患者。该研究分析了BRAF突变患者转移灶切除术后的临床病理因素、PIK3CA突变频率以及预后情况。研究通过回顾性的对2009年至2012年单中心1941例转移性结直肠癌患者行KRAS／BRAF突变检测，共检出92例患者含BRAF突变。2011年423例BRAF野生型转移性肠癌患者作为对照组。
研究发现在转移性大肠癌中，与BRAF野生型组相比，BRAF突变型与确诊时高龄、女性、肿瘤位于右侧以及低分化、粘液组织形态更加相关。 BRAF突变更多出现于肠癌分期III期、T4期患者。 PIK3C与5％的BRAF突变共存，与17％的KRAS突变共存，与4％的BRAF／KRAS共突变共存。 BRAF突变的患者一般不只局限于肝转移，更容易出现腹膜转移。研究人员进一步研究发现合并BRAF突变的转移性肠癌患者转移灶相对不容易切除，即使切除后总生存期也较短。 -
妊娠高血压综合征和肾素-血管紧张素系统的基因研究进展
妊娠高血压综合征(妊高征)是一种常见的妊娠并发症，是导致孕产妇和围产儿死亡的主要原因之一。多年来人们对其病因及发病机理进行了大量研究，发现妊高征是一种多因素疾病，环境与遗传因素在其发病中有重要作用。临床研究表明，妊高征具有家族遗传倾向，属于单基因遗传性疾病［1］。 妊高征的基本病理生理改变是全身小动脉痉挛，临床主要表现为高血压、水肿、蛋白尿。肾素-血管紧张素系统 (renin-angiotensin system，RAS)在血压和体液调节中具有重要作用，并且已发现RAS中某些成分，如血管紧张素原 (angiotensinogen，AGT)，血管紧张素转换酶 (angiotensin conver- ting enzyme，ACE)的某些分子变异与妊高征的发病有关。现就妊高征和RAS的基因研究进展作一阐述。 一、肾素基因与妊高征的关系 肾素是RAS中的限速酶，其功能是将AGT转化为血管紧张素I（angiotensin I，AngI）。肾素基因全长12 kb，含9个外显子和8个内含子。动物实验发现，肾素基因限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphisms，RFLP）与高血压有关［2］。Arngrimsson等［3］调查了9个爱尔兰家庭，每个家庭2～3代中至少有3例妊高征患者，运用内切酶消化及Southern杂交技术检测结果显示，妊高征患者及其配偶间RFLP无统计学差异，由此推测肾素基因RFLP与妊高征的发生无相关性。对人类的原发性高血压与肾素基因RFLP的相关性研究也得出相同结论。 二、AGT基因突变与妊高征的关系 在RAS中，AGT是肾素作用的唯一底物，其浓度变化可限制RAS的转化速度，因此在这一系统中占重要地位［4］。人血管紧张素原基因（angiotensinogen gene，AOG）是单拷贝基因，位于染色体1q4，与肾素基因位于同一区域，二者具有一定的相关性。该基因由12～13 kb组成，含5个外显子及4个内含子［5］。Jeunemaitre等［6］研究发现，AOG第2外显子704位上的碱基T突变为C，导致AGT第235位的蛋氨酸（Met，M）被苏氨酸（Thr，T）替换，即M235T与原发性高血压的发生有关。由此推测，M235T可能与妊高征的发生也存在相关性。 Ward等［7］分别对美国犹他州的白种人群和日本人群进行了调查，测定妊高征患者和正常初孕妇女血中AGT浓度及基因型，研究结果显示，妊高征患者中T235突变频率（0.65）高于正常初孕妇女(0.4)，且差异有统计学意义；同时妊高征患者AGT浓度也高于正常初孕妇女。另外，该研究结果还显示，在不同人种间T235的突变频率也不一样：日本人群（不论妊高征患者还是正常妊娠妇女）中T235出现的频率均明显高于白种人。Kobashi等［8］对日本妇女中M235T和妊高征的相关性进行病例-对照研究，将139例妊高征患者和278例正常妊娠妇女按年龄、产次配对后，用聚合酶链反应（PCR）技术检测血管紧张素原基因型，结果显示，妊高征患者中T235突变频率（0.80）明显高于正常妊娠妇女（0.56）。这就证实了，在日本妇女中T235与妊高征的发生具有一定的相关性。 但是，Morgan等［9］对英国Nottingham地区48例妊高征患者和84例正常妊娠妇女的研究发现，两组T235等位基因的频率均为0.48。Guo等［10］对澳大利亚和中国（广州，武汉地区）两组人群进行妊高征病例-对照研究，结果提示，虽然在两个不同群体中，T235频率差异有极显著性（澳大利亚人群中T235频率为0.38，而中国为0.75，χ2=31.57，P<0.000 1），但均与妊高征的发生无关。这可能是由于样本量太小，不能保证检验效能；也可能是T235初被发现与原发性高血压的发生有关，而原发性高血压和妊高征在发病机理及病理生理上并不一样。因此认为，T235可能仅与妊高征的一种类型有关，而原发性高血压是这一类型的诱因。 然而M235T在妊高征发病中确切的作用机理并不清楚，他是否对妊高征的发生有直接作用，抑或仅作为其他至今仍未认识的分子变异的标志。通过对人、鼠AGT以及其他血清蛋白酶抑制物如α1-抗胰蛋白酶、血栓素III等的分子序列比较发现，第235位上氨基酸残基的保守性很差，而且该位点远离肾素作用的位点。对体外培养的哺乳动物细胞研究发现，T235突变并不引起RAS反应动力学的改变［11］。因此，人们开始寻找其他的突变位点。Inoue等［12］对48例妊高征患者DNA样本进行检测，发现在1例重度妊高征患者中存在AOG的另一种变异——L10F，即在第二外显子28位上的碱基C突变为T，导致AGT第10位上的亮氨酸(Leu，L)被苯丙氨酸(Phe，F)替代，而这正是肾素作用的位点；并且L10F突变能产生相应的编码蛋白质进入血液，说明有L10F突变的AGT是有功能的。进一步对含L10F突变的RAS动力学研究发现，L10F突变明显提高了肾素和ACE的催化反应效能，故认为L10F与妊高征的发生有直接关系。另外Inoue等［12］又对200例高危产妇及其新生儿进行DNA检测，发现2例新生儿含L10F，其母亲均患有妊高征；而对巴黎245例高血压患者DNA检测，仅发现2例杂合型L10F；日本的研究未发现L10F，估计其发生率不到1%［13］。而且L10F对RAS动力学影响的研究仅限于体外实验，其确切的作用有待于进一步的活体试验来证实。 Inoue等［14］还发现，在AGT近端启动子中，转录起始部位上游第6位上的碱基G被A替代，即A（-6）对基因的基本转录有重要作用，能提高AOG的转录活性。而含G（-6）的启动子与反式作用因子优先结合导致转录活性下降。同时，该突变与T235存在明显的连锁不平衡，即携带T235的基因中97%～99%存在A（-6）。因此，虽然M235T不引起RAS动力学的改变，但由于T235与A（-6）存在紧密连锁，故T235转录活性高于M235。虽不能证实其因果关系，但说明转录水平上的细微差异可能引起生理上的改变，从而导致原发性高血压或妊高征的发生。这从转录水平上分析了T235和A（-6）在妊高征发生中的作用。 AGT的相对分子质量为55×103～60×103，通过凝胶过滤发现的相对分子质量为350×103～500×103的AGT，称为高分子量AGT(high molecular angiotensinogen，HMA），主要存在于羊水和胎盘中，是胎盘中RAS的主要成分。有研究表明，HMA在不同人群中的含量不同（按其占血中总AGT的百分比表示）：男性及生育期妇女为5%，使用雌激素类避孕药妇女为9.6%，正常妊娠妇女为16%，妊高征患者为25%～28%。这说明HMA是妊娠状态下RAS的主要成分，提示它与妊高征的发生有关［15］。HMA可能是由AGT与嗜酸性细胞主要基础蛋白前体（proform of eosinophil major basic protein，proMBP），或二者与补体C3dg以2∶2∶2比例分别通过二硫键共价结合而成。Paule等［16］研究发现，在18、138、232、308位上各含有1个半胱氨酸残基（Cys），其中只有Cys232能与proMBP中的Cys形成二硫键，这是合成HMA所必需的，并且其要受235位上残基的影响。体外实验显示，当232位上的Cys突变为丙氨酸（C232A）时，如果存在M235，则生成的AGT显著下降；如存在T235，则其生成不受影响。而肾素对AGT的水解效能是HMA的1.9倍，说明肾素对HMA的水解效能低。因此可以认为HMA是AGT的贮存形式，尤其是在孕期，可抑制蛋白水解活性，减少AngI的生成。研究还发现，M235T对HMA的产生也有影响，M235生成的HMA［（71.9±3.5）%］比T235高［（57.7±2.8）%］。可以认为M235T在妊高征发生中的作用不是改变肾素反应的动力学参数，而是影响血中HMA的含量从而直接影响AGT的功能。与纯合型T235相比，纯合型M235产生的HMA明显增加；由于肾素对其水解效能低，释放AngI少，从而适应妊娠生理变化，减少妊高征发生的可能性［13］。 目前多数学者认为，M235T与妊高征的发生有关，但其作用机理不清。可能是其他分子变异的一个标志，如A（-6）与T235存在明显的连锁不平衡，前者能提高AOG转录活性。T235远离肾素作用的位点，并不改变肾素反应的动力学参数；而另一突变位点L10F正好处于肾素作用点，使肾素、ACE催化效能提高2倍多。由于HMA的发现，认为T235可能通过直接影响AGT的功能而引起妊高征的发生；M235产生的HMA高于T235，而肾素对HMA的水解效能低于AGT，故有关T235的作用机理仍需进一步研究。
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Duchenne肌营养不良患儿抗肌萎缩蛋白基因突变的检测
Duchenne肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是X连锁隐性遗传引起的严重的神经肌肉疾病,男性新生儿的发生率为1/3500.临床表现以进行性肌肉无力和萎缩为特征,通常在12岁左右不能行走,20岁左右死于呼吸或心脏衰竭.目前认为DMD是由于基因突变致dystrophin(抗肌萎缩蛋白)表达障碍引起的.Dystrophin基因是人类大的基因之一,定位于Xp21,全长约2.5 Mb,编码79个外显子,具有突变频率高且突变形式多样的特点[1].通常使用的方法实施高效、准确及快速诊断较为困难.
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放疗对肿瘤患者外周血淋巴细胞hprt基因位点的影响
目的了解放疗对肿瘤患者外周血淋巴细胞hprt基因位点的影响,探讨hprt基因突变分析作为放疗致机体辐射损伤监测的可行性.方法采用多核细胞法研究放疗对人外周血淋巴细胞hprt基因位点的影响及其突变频率的变化.结果放疗可诱发人外周血淋巴细胞hprt基因位点突变,突变频率随放疗累积剂量的增加而升高.在同一剂量点,鼻咽癌病人与乳腺癌病人的hprt基因突变频率统计学上没有显著差异.肿瘤病人的hprt基因突变频率均较正常对照组高.结论 hprt基因位点突变频率分析可作为放疗致机体辐射损伤监测的生物学标志.
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表没食子儿茶素没食子酸酯影响慢性紫外线辐射诱导的人皮肤成纤维细胞凋亡和突变的研究
目的 研究紫外线(UV)照射对人皮肤成纤维细胞的细胞凋亡率、细胞周期变化和次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因位点突变频率的影响以及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的干预作用.方法 采用一定剂量的中、长波紫外线(UVA和UVB)慢性照射培养的新生儿包皮成纤维细胞.通过流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,HPRT突变分析法检测突变频率.结果 慢性UVA组引起的细胞凋亡率低于UVB组(P<0.05),而HPRT基因位点突变的频率是UVB组的4.79倍.EGCG干预组与单纯UV辐射组相比,成纤维细胞的凋亡率增加,HPRT基因位点突变的频率降低.结论 慢性照射日常剂量UVA,其损伤性高于UVB.EGCG可以升高慢性UV照射引起的细胞凋亡率,降低UV照射引起的突变频率,提示EGCG可以诱导不可逆损伤细胞的凋亡,从而减少突变细胞.
关键词： 紫外线 成纤维细胞 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG) 细胞凋亡 突变频率 -
悬浮点阵技术用于分析β地中海贫血基因突变类型
现已知人类β地中海贫血(β珠蛋白合成障碍性贫血,β地贫)突变种类有170多种,突变类型和突变频率随地域和人种变化很大,其中中国大陆人群常见的突变频率较高的突变类型有十几种.目前,临床上检测β地贫突变类型为常用的方法是PCR反向点杂交(PCR-RDB).20世纪90年代末,伴随着信息技术和"生物芯片"技术的发展,一种新的适于临床应用的高通量、自动化的诊断分析技术平台--液态悬浮点阵检测技术的诞生,使复杂基因突变分析实现自动化、高通量化成为可能.通过对8种已知β地贫基因突变类型(大约占中国大陆人群突变发生频率的93.2%)的检测分析[2],初步探讨液态悬浮点阵检测系统在临床β地贫基因突变检测的应用前景.
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146株肠球菌的药敏试验结果分析
近年来,随着新一代广谱抗生素的广泛使用及不合理的应用,使得肠球菌的耐药性也不断增强,为了探讨肠球菌的耐药特性,以便给临床治疗提供可靠的依据,笔者用万古霉素等14种抗生素测定了146株肠球菌的低抑菌浓度(MIC)并检测了肠球菌对万古霉素的耐药突变频率.
