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680型酶标仪仪器操作
酶标仪已被广泛应用于分子生物学、免疫学、细胞学、生物化学、电生理学、高通量药物筛选等多个领域.以美国伯乐公司生产的680型酶标仪为例,阐述一下酶标仪的操作使用、日常管理维护和故障排除.
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中药复方有效成分组相关研究方法的研究进展
中药复方是中医学中的宝贵财富,多成分、多靶点是其优势和特色所在.但由于中药复方成分复杂,作用机理不清,量-效关系缺乏科学的数据支持,严重阻碍了中医药的现代化和国际化进程.中药复方有效成分组是指中药复方中与该复方临床治疗目的 密切相关的所有药理活性成分.随着有效成分组概念的提出,中药复方的有效成分组研究日益受到人们的关注.本文对中药复方有效成分组的基本原理和近几年开展的相关研究方法进行了综述,主要介绍了化合物群分析法,指纹图谱分析,药代动力学,高通量药物筛选等技术在中药复方有效成分组研究中的应用,这不仅有助于推动民族药物的继承和发展,为新药开发提供思路和技术上的参考,同时也有助于促进中医药现代化并终走向世界.
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高通量中药单体筛查方法及应用
随着现代化学、生物学及药学等领域日新月异的进步，相关现代技术在中药现代化的研究中得到了广泛的应用，特别是对中药单体的药效和药代研究的进展，为中药走向国际提供了基础。如何获得目的中药单体成为目前研发的热点和焦点。本文就目前国内外有关中药单体的筛选方法、不同筛选类型原理、局限性及意义进行了阐述。
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高通量药物筛选生物活性分析技术研究进展
在过去的十年中，生命科学的迅速发展，尤其是分子生物学的发展，越来越多的潜在药物作用靶点被人们认识。化学合成技术的进步如组合化学的出现为发现新药提供了更多的化合物［1］，这些进步为大规模的药物筛选创造了物质基础。为了能够应用多种药物作用靶点对大量化合物进行高速、高效、低成本、微量化的筛选，大限度地发现药物，高通量筛选（High throughput screen， HTS）技术也快速发展起来，产生了许多新的实验分析方法，药物筛选的规模和速度也由20世纪90年代中期每天筛选几千个化合物提高到每天可筛选数万甚至更多的化合物，被称之为超高通量药物筛选（UltraHTS）［2］。
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高通量药物筛选在新药研究中的应用
高通量药物筛选技术是20世纪80年代后期形成的寻找新药的高新技术。经过十余年的实践，该技术体系不断发展和完善，成为目前寻找新药的重要手段。应用高通量药物筛选技术寻找新药，不仅改变了人们对药物筛选的认识，同时对药物开发研究的思路也产生了明显的冲击。如何应用高通量药物筛选开发新药，已成为目前药物研究中的重要课题之一。本文根据药物发现的基本规律，介绍高通量药物筛选的发展过程和基本原理方法，探讨高通量药物筛选在新药发现中的作用和应用前景。
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走在药物发现前沿的高内涵药物筛选
高内涵药物筛选已经成为药物发现领域的一个重要部分,在生物医药领域里的重要性日益突显,其广泛应用必然会为药物发现带来新的希望与突破.高内涵药物筛选方法具有许多独特的优势,它使得药物筛选更趋生物化.本文介绍了高内涵药物筛选的发展过程,及其当前和潜在的应用领域,探讨了高内涵药物筛选与其他研发技术手段之间的关系,并就其在新药发现中的作用和前景进行了阐述.
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利用有效成分组理论和高通量技术探索大复方白脉散药效物质基础
传统民族药物大复方药味多、成分复杂,药效物质基础难以阐释.为了解决民族药物大复方的研究难题,本课题组利用高通量制备技术建立全组分样品库,利用二苯基三硝基苯肼自由基清除、原代神经元缺糖缺氧/复供损伤保护等高通量药物筛选模型确定了白脉散抗脑卒中有效成分组(BMECG),进而利用MCAO/R模型对BMECG的活性行了研究,旨在为创新药物开发提供关键资料.后探讨了快速制备技术和高通量药物筛选技术对于大复方有效成分组研究的意义.本文的研究思路有助于推动民族大复方现代化,有助于促进具有自主知识产权创新药物的出现.
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一氧化氮合酶抑制剂和增强剂的高通量筛选
目的建立一氧化氮合酶(NOS)活性的高通量检测方法,筛选调节NOS活性的药物.方法通过NADPH荧光值的变化,间接反映NOS活性.通过对反应体系的优化,调整各反应底物(NADPH,L-Arg,NOS)及抑制剂(L-NNA)的浓度,建立高通量筛选模型并对5 600个样品进行筛选.结果方法简便、容易操作、灵敏度高、结果稳定,发现了一批对NOS具有抑制或增强作用的化合物.结论此法适用于高通量药物筛选.
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以GLP-1受体为靶点的药物筛选细胞模型的建立和应用
建立以GLP-1信号通路为靶点的药物筛选细胞模型,用于筛选GLP-1受体激动剂类的新型抗糖尿病药物.首先构建GLP-1受体信号通路调控的特异应答元件(RIP-CRE)多拷贝序列及报告基因E-GFP的重组载体.将该载体转染胰岛NIT-1细胞株,以检测转染细胞对GLP类似物的反应性和特异性,并通过稳定转染和单克隆培养,获得对GLP-1类似物特异应答的单克隆细胞株.该细胞模型在GLP-1类似物Exendin 4刺激下激活表达报告基因,激活作用可以被GLP-1受体阻断剂Excndin 9-39完全阻断,且激活途径非cAMP-PKA依赖,具有GLP-1受体特异性.构建该细胞模型,可以对肽类或非肽类GLP-1类似物进行高通量筛选.
关键词： GLP-1受体激动剂 高通量药物筛选 细胞模型 糖尿病 -
基于JAK/STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型的建立
目的建立基于JAK/STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型,筛选调节免疫系统、造血系统和抗肿瘤药物.方法构建以串连的多个STAT的DNA结合序列为调控序列,以荧光酶基因作为报告基因的表达载体.通过将该载体分别转入体外培养的不同细胞系中使之稳定表达,建立具有激活STAT活性的药物筛选模型,并利用多个抗过敏和抗肿瘤药物样品进行检测.结果建立多株药物筛选细胞模型,筛选方法简便,操作容易,灵敏度高,结果稳定.结论本细胞株可以用于大规模高通量药物筛选.
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维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型的建立
目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的以维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型,用于筛选治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、银屑病、痤疮以及肿瘤的新型药物.方法用分子生物学的方法,构建含有8个串连维甲酸受体应答元件(RARE)并连接报告基因E-GFP的重组载体.将体外培养的细胞株用该重组载体进行稳定转染,然后进行单克隆培养,终挑选出敏感、高效、稳定表达的单克隆细胞,用于筛选针对维甲酸受体的小分子有机药物.结果建立了高效的药物筛选细胞模型.此模型筛选方法简便,适用范围广,灵敏度高,结果稳定.结论挑选出的细胞株作为药物筛选模型可用于大规模高通量药物筛选.
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基于COL1A1启动子的抗肝纤维化药物高通量筛选模型的建立及应用
为了有效筛选潜在的抗肝纤维化药物,本实验室建立了基于COL1A1启动子的高通量筛选细胞模型.该细胞模型在TGF-β1的刺激下,激活COLlA1启动子及荧光素酶报告基因的表达,而该激活作用可以被候选化合物抑制.作者首先构建COL1A1启动子和荧光素酶报告载体pGL4.17的重组质粒.采用双荧光素酶报告基因检测系统对该启动子的活性进行检测,发现重组质粒比对照组荧光素酶活性高15.98倍.该质粒转染到人肝星状细胞株LX2中,用无限稀释法得到单克隆细胞株,并利用活体成像仪筛选出稳定表达COL1A1启动子的单克隆细胞株LX2-COL.经TGF-β1诱导后检测该单克隆细胞株LX2-COL对候选化合物(S1～S7)的反应性,其中S7对启动子活性抑制作用强.Real-time RT-PCR和Western blotting验证了经该细胞模型筛选得到的化合物S7能够抑制Ⅰ型胶原mRNA和蛋白水平的表达.结果表明,该细胞模型的建立能够实现对潜在的抗肝纤维化化合物的高通量筛选.
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刺芒柄花素调节血脂代谢及改善动脉粥样硬化病变的实验研究
目的:研究刺芒柄花素上调SR-BI蛋白表达和影响血脂代谢、肝脏脂肪化及动脉粥样硬化病变作用.方法:利用高通量筛选模型评价刺芒柄花素对CLA-1/hSR-BI蛋白基因的转录激活效用.通过高脂饲料喂养金黄地鼠21 d,建立实验性高脂血症动物模型.给予不同剂量的刺芒柄花素,28 d后测定血浆总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白一胆固醇(HDL-C)含量.组织切片HE染色观察肝脏病变,胸主动脉硬化情况.结果:刺芒柄花素可以在一定程度上降低高脂血症金黄地鼠血清TC,TG和LDL-C,升高HDL-C;改善肝脂肪化、减轻炎性细胞浸润;抑制胸主动脉壁内膜下泡沫细胞形成和中膜平滑肌增生.结论:刺芒柄花素具有调节体内血脂代谢,抑制肝脏脂肪沉积和预防动脉粥样硬化效果.
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转人M受体亚型基因CHO细胞系在新
综述了转人M受体亚型基因CHO细胞系在M受体亚型选择性新药筛选中的应用以及应用过程中应注意的问题，并对已筛选出的M受体亚型选择性激动剂和拮抗剂作简要介绍。
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靶向G蛋白偶联受体高通量药物筛选技术研究进展
G蛋白偶联受体(GPCR)是临床广泛应用药物的主要靶点之一.靶向GPCR的高通量药物筛选新技术不断涌现,为发现高效、高选择性、低毒的药物提供可能,并使选择合理的GPCR药物筛选策略显得尤为重要.本文综述了靶向GPCR药物高通量筛选相关技术及策略的研究进展,主要包括基于GPCR受体配体结合、第二信使、β-arrestin、调控元件报告基因、内化、聚合体及变构调节剂等方面的高通量药物筛选技术,以及相关技术的代表性商品化产品以供参考.
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新的抗癌药物作用靶点甲硫氨酰氨肽酶-2
夫马洁林是目前已知的有潜力的天然血管生成抑制剂之一.该类药物通过共价抑制甲硫氨酰氨肽酶-2的活性,而特异性地抑制血管内皮细胞的生长和增殖.根据甲硫氨酰氨肽酶-2的结构以及催化和抑制机制,可以设计和合成新型的血管生成抑制剂;通过新发展的活性检测方法,可以建立高通量药物筛选模型,以期找到新一代高选择性、高亲和性、高生物利用度的甲硫氨酰氨肽酶-2的小分子抑制剂,用于抗癌新药的开发.
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创新药物研究与高通量筛选
根据新药研究的资料,讨论了创新药物的特点和开发研究的规律,总结了创新药物的类型,论述了创新药物的发现、研究的关键技术问题和思路.根据实际工作内容,介绍了高通量药物筛选的概念、原理、方法和步骤,分析了高通量药物筛选技术在创新药物研究中的优势和不足,论述了高通量药物筛选技术在创新药物研究中的地位和应用前景.
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高通量药物筛选活性数据的计算机处理
目的:论述高通量药物筛选生物活性数据处理过程中,为完成活性数据的处理所进行的数据采集、加工、存贮及其管理原则与方法.方法:以光诱导法筛选抗氧化剂为例,对中国医学科学院药物研究所国家药物筛选中心的高通量药物筛选的活性数据的处理过程及方法进行论述,阐述药物筛选活性数据的处理方法.结果:明确了处理药物筛选活性数据的着眼点及一般过程,为提高数据处理的效率、增加其科学性提供了一条切实可行的措施.结论:生物活性数据的准确、快速处理是通过高通量药物筛选快速发现药物的需要,其正常进行解决了高通量药物筛选大量数据处理的技术问题.
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细胞水平的高通量药物筛选技术研究进展
目的 介绍细胞水平的高通量筛选技术研究进展.方法 根据近年来文献,综述细胞水平的高通量技术发展趋势和使用技术进展.结果 细胞水平筛选是在活细胞自然条件下,接近体内的生化过程,且可以做到多靶点、多指标检测,满足在药物发现早期对药物的综合评价,缩短药物发现周期.结论 细胞水平的高通量筛选技术具有广阔前景.
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难溶性药物的增溶及其缓/控释制剂研究进展
目前由高通量药物筛选而得的活性物质约有40%是水难溶性的[1],难溶性药物(poorly water-soluble drug)因其在水中溶解度小,药物难以被机体吸收,体内消除速度较快,血药浓度容易出现峰谷现象,口服制剂生物利用度低,且难以实现剂型的多样化.
