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藻毒素免疫抗原的制备及鉴定
目的为建立藻毒素(MC-LR)免疫学检测方法,制备具免疫功能的MC-LR完全抗原.方法根据MC-LR分子中的羧基和蛋白质分子中的氨基,利用"活泼酯法"和"碳二亚胺法"分别制备MC-LR-KLH(匙孔血蓝蛋白)免疫抗原和MC-LR-BSA(牛血清白蛋白)检测抗原.结果用紫外光谱法(UV)和Bradford蛋白含量测定法鉴定,结合物中MC-LR与KLH、BSA的结合摩尔比为9.1∶1和9.4∶1.采用"皮下注射法"用MC-LR-KLH免疫新西兰大白兔15周,取血清,用"间接酶联免疫吸附法"(id-ELISA)鉴定抗MC-LR多克隆抗体效价,高达1∶25600.结论证明制备的MC-LR-KLH具有免疫性.
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日本血吸虫感染对幽门螺杆菌所致胃黏膜萎缩的血清学影响
幽门螺杆菌(Hp)是一种引起慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌以及黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的主要致病菌[1].Hp的cag致病岛(PAI)[2]和其中的一个免疫抗原CagA所产生的IgG抗体已经证明和Hp感染引起的胃黏膜萎缩和胃癌有关[3].我国的日本血吸虫感染人群中也存在一定数量的Hp感染者,这些共感染人群是否存在特殊的临床后果尚不清楚.本研究通过现有的血清学资料,检测是否日本血吸虫感染调节了针对Hp的体液免疫反应,并延缓萎缩性胃炎的发生.
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实验性自身免疫性重症肌无力模型构建方法进展
重症肌无力（Myasthenia gravis，MG）是在细胞免疫依赖性补体参与下，由乙酰胆碱受体抗体（ Ace－tylcholine receptor antibody ，AChR Ab）介导而产生的自身免疫系统疾病。位于神经肌肉接头（ Neuromuscular junction ， NMJ ）处的 AChR 是导致MG的自身免疫抗原。其发病原因及治疗方法仍有待进一步研究探讨，所以研究实验性自身免疫性重症肌无力动物模型（ Experimental autoimmune myasthenia gravis ， EAMG ）十分有必要。1973年Patrick等［1］首次从电鳗电器官提取纯化AChR免疫家兔后建立了EAMG模型。随着研究深入，越来越多建模方法被应用到MG动物模型上。本文对国内外各种建模方法综述如下。
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乌头碱免疫抗原及多克隆抗体的制备
乌头碱与戊二酸酐反应得半抗原乌头碱-3-基戊二酸单酯,并采用活泼酯法使其与牛血清白蛋白(BSA)结合,制得乌头碱免疫抗原(AC-GH-BSA),经MALDI-TOF质谱分析其蛋白偶联率为18.以此抗原免疫新西兰兔,制得的多克隆抗体能够特异性结合乌头碱,并采用间接酶联免疫吸附法测定抗体效价.结果显示,制备的乌头碱多克隆抗体效价为1;1 280 000.
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大鼠新基因PMP22CD的克隆以及多克隆抗体的制备
目的:通过PCR克隆PMP22CD基因,构建原核表达载体PET-32a(+)/PMP22CD,表达并纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究该基因的功能奠定基础.方法:通过PCR的方法克隆PMP22CD基因,选择抗原性较强的C-端,构建原核表达载体PET32a(+)/PMP22CD,在大肠杆菌BL21(DE3 Lysis)中诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白以包涵体的形式存在,应用电洗脱的方式获得重组蛋白,免疫新西兰大白兔,获得抗血清,通过琼脂糖双扩和Western Blot检测抗血清效价和特异性.结果:经测序鉴定成功克隆PMP22CD基因,并构建PET-32a(+)/PMP22CD重组质粒,表达融合蛋白,免疫新西兰大白兔,获得PMP22CD多克隆抗体.结论:得到了纯化的PET-32a(+)/PMP22CD融合蛋白,获得了效价高、特异性强的抗体.
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新基因ZNFD的克隆及其多克隆抗体的制备
目的:PCR扩增得到新基因ZNFD(Znf domain containing protein),构建pET32a-ZNFD原核表达载体,诱导蛋白表达及制备多克隆抗体.方法:通过PCR的方法克隆新基因ZNFD,选取部分抗原免疫原性较高的部分ORF序列,克隆到原核表达载体pET32a上,利用大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)表达系统表达ZNFD融合蛋白.纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体.通过琼脂糖双向扩散实验和Western blot鉴定其效价和特异性.结果:经测序鉴定已成功克隆ZNFD基因.通过构建原核表达载体pET32a-ZNFD,在大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中使用IPTG诱导表达,得到相对分子质量约为45 kD的融合蛋白.纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫特异性.结论:得到纯化的ZNFD蛋白,制备的多克隆抗体达到了一定的效价,且具有高特异性,为进一步研究ZNFD的功能奠定了实验基础.
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实验性变态反应性脑脊髓炎的细胞免疫研究
在实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的发病及病情演化过程中,涉及到多种影响因素的作用.除了广泛研究的免疫抗原和T淋巴细胞外,近年来研究显示NKT细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、肥大细胞也起着必不可少的作用.
关键词： 实验性变态反应性脑脊髓炎 免疫抗原 免疫细胞 -
TRAIL及其受体在红斑狼疮中的作用及机制研究进展
红斑狼疮(lupus erythematosus LE)是一种病因不明、调控机制复杂且可累及多系统、多脏器的慢性自身免疫系统紊乱型疾病.通过深入研究表明红斑狼疮发病机制之一为凋亡/坏死细胞清除失效导致大批自免疫抗原细胞成份暴露在细胞表面而引发免疫应答扩大,因此如何合理调控或阻断凋亡途径已经成为有效治疗SLE的一个重要研究焦点,而(tumornecrosisfactor,TNF)超家族成员在参与细胞凋亡中发挥重要作用.肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是TNF超家族一员,TRAIL对LE中包括细胞凋亡异常、发病机制以及疾病活动等都起着相关作用.
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脑膜炎球菌疫苗的开发
诺华疫苗公司为预防侵袭性脑膜炎球菌性疾病进行了长期的研究与开发。从初的获得单价C群脑膜炎球菌性糖结合物疫苗即Menjugate溍的许可证，这一应对在英国出现的有毒C群ST-11株的疫苗到近期开发出的获得了四价脑膜炎球菌 ACWY糖结合疫苗，Menveo溍的许可证，诺华公司承诺开发更有效的控制脑膜炎球菌性疾病的疫苗。 Menveo疫苗是目前在50多个国家被批准用于青少年和成人的疫苗，并且从Ⅲ期临床研究结果显示，人们对这种疫苗具良好耐受性，并且在出生后2个月开始接种的婴儿中就具有高度的免疫原性。控制脑膜炎球菌病的圣杯（“holy grail”）是一种能够抵抗B群细菌的具有广谱保护作用的疫苗，更可取的是一种能够保护包括婴儿在内的所有年龄人群的疫苗。由于B群脑膜炎球菌荚膜的免疫原性不佳，所以过去40多年人们的努力集中在细菌表面表达的保守蛋白的鉴定上。它们可激发杀菌抗体。诺华公司研究人员已着手解决这一问题，他们借助于基因组技术鉴定满足这些标准的蛋白，这一工艺目前称作“反向疫苗学”。这项工艺技术已经使多组分 MenB 疫苗（4C MenB）研制成功，这项MenB疫苗是由4种主要的免疫原性组分［3种亚荚膜MenB 蛋白加外膜囊泡（ OMVs）］所构成。它们本身提供多种亚荚膜抗原，其中一种优势免疫抗原就是PorA。所有这些抗原都能诱导针对抗原的杀菌抗体，而这些抗原在决定脑膜炎球菌的活存、功能与毒力方面都是重要的。4C MenB疫苗的Ⅱ期临床研究结果表明，这种疫苗在抵抗脑膜炎球菌参考株方面具有高度免疫原性，对从临床研究中获取的接种疫苗后的人体血清也通过许多不同的B群菌株进行了检测，以期支持脑膜炎球菌抗原分型系统（ MATS ）的开发，这是一种预测疫苗株覆盖方面的工具。这篇综述的意图是根据Menveo和4C MenB疫苗临床开发项目的主要临床资料作一较为宽泛的介绍。
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福氏志贺群7因子血清免疫方法的探讨
为了提高福氏志贺菌免疫的群7因子的血清效价和优化免疫方法,以两种免疫原成分,按两种浓度、剂量免疫动物后定期采集血清.用凝集试验检测血清抗体效价,比较新法和传统方法免疫家兔体内的抗体水平.结果显示,传统方法免疫的家兔所产生的抗体1∶1280,而新法免疫中高剂量组可使福氏志贺群7因子血清效价达到1∶2560的水平,完全可以用于常规生产.
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抗恩诺沙星抗血清的制备及其ELISA检测
目的:建立快速、灵敏的恩诺沙星残留酶联免疫检测方法(ELISA).方法:采用混合酸酐法,将恩诺沙星与牛血清白蛋白和卵清蛋白分别合成免疫抗原(Enrofloxacin-BSA)和包被抗原(Enrofloxacin-OVA).通过背部多点免疫法免疫日本大白耳兔,制备抗恩诺沙星的特异性抗血清.结果:利用所获得的特异性抗血清,建立的恩诺沙星ELISA检测方法,其线性范围为5 ng·mL<'-1>.～2.5μg·mL<'-1>(R<'2>=0.9935),且与HPLC方法具有良好的相关性(R<'2>=0.9892,n=9).牛奶、大鼠血浆和尿液中的加样回收率分别为98.4％～105.8％,91.7％～101.2％,97.0％～110.3％.运用所建立的方法,对大鼠体内血浆及药品中恩诺沙星的含量进行了测定.结论:本研究所建立的检测恩诺沙星的ELISA方法具有样品前处理简单,灵敏度高及分析速度快等优点,适合用于恩诺沙星的体内分析及动物性食品中恩诺沙星的残留分析.
