190 运用单抗酶联免疫检测法对生药和方剂中的芍药苷和白花素进行定量分析

HPV新型夹心酶联免疫检测法的建立及验证

目的 建立一个新型夹心酶联免疫检测系统,为宫颈涂片中高危HPV病毒的检测提供参考.方法 使用兔抗HPV16/18/45 E7蛋白的兔单克隆抗体作为包被抗体,使用生物素化的多克隆山羊抗血清作为第二抗体,利用夹心ELISA分别对HPV 16/18/45 E7重组蛋白、宫颈癌细胞和宫颈涂片裂解液中的HPV进行检测.结果 确定每孔0.5 pg的HPV 16/18/45 E7蛋白含量为检测限.宫颈涂片HPV检测结果显示,15个为阳性(HPV 16:12个;HPV 18:10个),35个为阴性,与其HPV DNA分型一致.结论 本研究建立并验证的新型夹心ELISA法可用来检测3种普遍的宫颈癌高危HPV类型中的E7蛋白,值得在临床检测中推广.

ECLIA法与传统ELISA法检测TNF-α比较

化学发光酶联免疫检测法(ECLIA)是将酶免疫系统与化学发光系统结合起来,通过发光强度(RLU)反映检测样品含量的一种免疫学检测技术[1].本实验建立了ECLIA法,并将其与传统ELISA法在其敏感性上进行对比,结果表明,ECLIA法较ELISA法敏感性提高4倍,报道如下.

血清p53抗体与肺癌早期诊断、判定疗效、预测复发及预后

目的通过对肺癌患者血清p53抗体水平与肺癌的临床指标、病理特征及p53抗体在治疗过程中动态变化的研究,探讨血清p53抗体在肺癌早期诊断、疗效判定及预测预后中的临床意义.方法对76例肺癌患者应用ELISA法检测血清p53抗体滴度,经酶联免疫检测仪测定吸光值E450,计算p53抗体指数.结果76例中有37例阳性,阳性率48.68%;在早期(Ⅰ期)肺癌中,阳性率为65.21%;手术治疗、化疗及未接受治疗的三组肺癌患者的p53抗体水平分别呈现动态降低或升高变化,显示p53抗体与肿瘤负荷、病程及病情恶化程度密切相关(P＜0.01及P＜0.05).结论检测血清p53抗体有助于肺癌的早期诊断;其动态变化有助于监测病情、判断疗效及预测预后.

药品快速分析的研究进展

药品快速分析技术的开展,以其全面、科学、简便快捷的分析方法已在药品分析领域得到越来越广泛的应用.本文阐述了近几年应用于药品快速检验分析比较常用的光谱法、色谱与质谱方法、微生物检查法以及酶联免疫检查法,并对这些分析方法的发展做了展望.

HBsAg和抗-HCV酶联免疫检测与血液病毒核酸筛查技术的关系

目的 探讨丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)酶联免疫检测和血液病毒核酸筛查技术的关系.方法 选取我院采集的血液样本8642份,均展开HBsAg、抗-HCV酶联免疫检测,之后实施血液病毒核酸筛查,分析两种检查方法所得结果的异同.结果 8642份标本行HBsAg酶联免疫检测,阳性148例,再次确认检测时阳性135例;抗-HCV酶联免疫检测阳性者83例,再次确认检测时阳性68例.血液病毒核酸筛查测定显示,HBV DNA阳性者141例,HCV RNA阳性者76例,合并两种因素,HBsAg、抗-HCV酶联免疫检测及再次确认检测的灵敏度为97.86%,特异度为95.49%.结论 HBsAg、抗-HCV酶联免疫检测具有良好的特异度与灵敏度,不过不同试剂盒的检测结果有一定误差,血液核酸筛查技术可避免误检,准确率高.基层医院可实施HBsAg、抗-HCV酶联免疫检测,若条件允许,仍以血液核酸筛查技术为佳诊断方法.

血清p53抗体与判定肺癌疗效及预后的相关性研究

血清p53抗体是机体对突变的p53基因产生的免疫应答的产物[1].p53基因是人体中重要的抑癌基因,p53基因突变是恶性肿瘤中常见的基因改变.已有一些研究表明,p53抗体的生物学意义与p53基因基本相同,它的表达与肿瘤的发生、发展、疗效、肿瘤的复发及预后等密切相关.本研究通过临床检测肺癌患者的血清p53抗体指数,进一步分析和探讨检测血清p53抗体指数在肺癌的疗效判定、观察肿瘤复发及预测预后等指标的临床应用价值及相关性.

胃癌患者血清P53抗体的临床意义

目的:研究胃癌患者血清P53抗体与临床病理特征之间的关系,以及手术前后血清P53抗体的动态变化规律.方法:采用ELISA方法对原发胃癌患者46例,良性胃部疾病患者和正常人各30例,以及胃癌患者术前和术后7d进行血清P53抗体检测.结果:46例原发胃癌患者中有12例血清P53抗体阳性,阳性率为26.1%.胃癌患者血清P53抗体指数和吸收率与肿瘤的病理分期、淋巴结转移有密切的关系(P＜0.05)与患者性别、年龄、原发肿瘤大小、部位无明显的关系(P＞0.05).术后7d较术前血清P53抗体指数、吸收率和阳性率明显下降,有显著性差异(P＜0.05).结论:血清P53抗体用于胃良恶性疾病的诊断和鉴别诊断,具有良好的特异性.术后血清P53抗体水平明显下降,动态检测血清P53抗体水平,对于判断预后可能有一定的帮助.

改变半抗原与载体蛋白的连接桥对提高水杨酸ELISA灵敏度的影响

目的:探讨水杨酸(SA)与载体蛋白间连接桥的改变对识别SA抗体的产生及SA ELISA灵敏度的影响.方法:将SA、4-氨基水杨酸、5-氨基水杨酸分别用不同的方法与载体蛋白相偶联,从而在SA苯环的C4、C5两个不同位点合成了3种免疫原:SA(C5)-N=N-p-AHA-BSA(A)、SA(C4)-N=CH-(CH2)3-CH=N-BSA(B)和SA(C5)-NH-CH2-NH-BSA(C)及4种包被物:SA(C5)-N=N-p-AHA-OVA、SA(C4)-N=CH-(CH2)3-CH=N-OVA、SA(C5)-N=CH-(CH2)3-CH=N-OVA、SA(C5)-NH-CH2-NH-OVA.免疫新西兰白兔制备抗体,用ELISA法检测.结果:获得针对A和C的两种多克隆抗体,后一种能专一识别游离态水杨酸,改变包被物中连接桥的结构可提高SA ELISA的检测灵敏度,故选用SA(C5)-N=CH-(CH2)3-CH=N-OVA建立了SA ELISA.结论:SA与载体蛋白间连接桥的改变对识别SA抗体的产生和SA ELISA的灵敏度有很大影响.

谷氨酸脱羧酶抗体检测的生物素-链霉亲合素放大ELISA系统构建及其临床应用

目的 建立检测谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)的新方法,即生物素-链霉亲合素放大ELISA系统(ELISA,BAS ELISA),并进行验证及初步临床应用.方法 人脑组织经过破碎、抽提、二次凝胶过滤层析与阴、阳离子交换层析分离蛋白,收集纯化的谷氨酸脱羧酶(GAD)；以链霉亲和素(SA)预包被,使GAD生物素化(bio-GAD),探讨检测GADA的优实验条件,并对BAS ELISA的灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证.然后选择新诊断的成年1型糖尿病患者106例(T1 DM组),以健康体检者98例为对照组,抽取空腹外周静脉血3ml,分离血清冷冻标本,用构建的BASELISA和德国宝灵曼公司Anti-GAD65 ELISA检测血清中的GADA,对比研究并进行统计学分析.结果 成功构建了检测GADA的BAS ELISA新方法；在T1DM组中,BAS ELISA方法测得T1DM的GADA阳性率显著高于anti-GAD65 ELISA方法(82.08％vs 52.83％,P＜0.01)；在对照组中BASELISA方法测得T1DM的GADA阳性率也明显高于anti-GAD65 ELISA方法(10.20％ vs6.12％,P＜0.05).结论 利用生物素-链霉亲合素放大系统可以构建检测GADA的ELISA新方法；生物素-链霉亲合素放大ELISA系统在检测GADA方面具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,提高了GADA检测的阳性率,降低T1 DM的漏检率,为早期检测T1 DM提供新方法.

α2巨球蛋白在老年肺结核患者外周血中的表达及临床意义

目的：探讨α2巨球蛋白（α2MG）在老年肺结核患者外周血浆中的表达水平及其对临床诊断与治疗的指导意义。方法收集60岁以上住院肺结核患者34例在抗结核治疗前后的外周血，并收集18例健康对照的外周血，酶联免疫吸附（ ELISA）法检测血浆中α2MG和 C反应蛋白（CRP）的浓度，并检测血沉时间。结果老年结合患者外周血中α2MG的水平明显高于健康老年人（P＜0.01），α2MG浓度为1.61 mg/L，可作为诊断老年肺结核的切点（cut-off）值，其敏感性和特异性分别为85.3％和77.8％。经规律抗结核治疗后老年肺结核患者的血浆α2MG 表达水平明显升高（P＜0.05），且其表达与血浆CRP水平和血沉呈负相关。结论患肺结核后老年人外周血中α2MG表达上调，并可作为诊断和检测结合治疗的生物学标志物。

EV71抗原BA-ELISA检测方法的建立及应用

目的 建立EV71抗原生物素-亲和素酶联免疫(BA-ELISA)检测方法 ,并进行验证及初步应用.方法 以抗EV71抗体为包被抗体,利用生物素.亲和素系统建立双抗体夹心ELISA法,并对其灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证.采用该方法 检测组织培养及临床样品中EV71抗原的含量.结果 所建立的BA-ELlSA法在EV71蛋白含量625～156.25 ng/ml之间线性关系佳,R~2达0.9976,灵敏度为78.125～156.25 ng;与包括Cox A16在内的42种肠道病毒及相关病毒均无交叉反应;检测10份EV71阳性样品和10份阴性样品,结果 符合率均为100%;检测EV71原液和高、中浓度样品的变异系数分别为3.09%、6.69%和6.43%;可检出约10~3～10~4 CCID_(50),的活病毒及手足口病患者的大便悬液和部分咽拭子悬液中的病毒.结论 用生物素标记EV71抗体与亲和素系统建立的双抗体夹心ELISA法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,为临床检验及抗原分析提供了参考.

170例上消化道出血患者幽门螺杆菌产毒株抗体检测分析

我院自1997年6月～1998年6月间,对资料完整的170例上消化道出血住院患者进行幽门螺杆菌总抗体及产毒株抗体检测,其中男115例,女55例.年龄为18～81岁,平均45岁.以定性酶联免疫检测法测定患者血清幽门螺杆菌总抗体和产毒株抗体.试剂由上海晶莹生物技术有限公司提供的Hp-Ab酶免试剂盒和CagA-HpIgG EIA药盒.大部分患者在24～48小时内均作过胃镜检查.结果见表1.

乙型肝炎病毒的液相杂交技术在聚合酶链反应酶联免疫检测的应用探讨

目的 利用液相杂交技术,将核酸杂交技术进行简化,建立乙型肝炎病毒(HBV)的液相杂交的聚合酶链反应酶联免疫检测(PCR-ELISA)方法.方法 以HBV为目的靶DNA,引物P15'端标记Bio-PCR扩增37个循环.PCR扩增产物与5’端标记地高辛的探针呈液相混合,85cC 2.5 min,60C1 min进行杂交,杂交后产物均经过链霉素亲和素酶标板进行固定,经过酶标仪记录抗地高辛标记抗体,结合、显色.结果 液相杂交酶联免疫检测条件的优化:地高辛的探针浓度为2.4 pmol/次,液相杂交时间为2.5min,固相杂交时间为100 min,检测结果差异无统计学意义(P＞0.05)；本试剂对87份“HBsAg+、HbeAg+、抗HBc+”标本的阳性检出率为91.95％; 72例“HBsAg+、抗-Hbe+、抗HBc+”标本的阳性检出率为68.06％,其他免疫检测指标组合标本为16份.结论 HBV的液相杂交技术应用于聚合酶链反应酶联免疫检测(PCR-ELISA),该杂交技术的实验操作简便,快速,适合于临床实验室的检测.

联合检测前S1、前S2抗原在乙型肝炎诊断中的意义

目的 探讨联合检测前S1(Pre-S1)、前S2(Pre-S2)抗原及DNA在乙型肝炎诊断中的意义.方法 采用ELISA双抗体夹心法检测乙肝Pre-S2、Pre-S1抗原阳性及同时阳性标本各100例,并以PCR法检测其DNA含量.结果 Pre-S1抗原阳性样本100份中,检测出乙肝DNA阳性85份,检出率85%;Pre-S2抗原阳性样本100份中,检测出乙肝DNA阳性83份,检出率83%;Pre-S1、Pre-S2抗原均阳性样本100份中,检测出乙肝DNA阳性93份,检出率93%,明显高于单一抗原检测(P＜0.05).结论 乙肝Pre-S1、Pre-S2抗原与其病毒复制有关,两种抗原同时在同一样本中的检出,可作为判断乙肝病毒复制的可靠依据.

丙型肝炎病毒血清学检测在临床中的应用

目的 评价丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)和核心抗原(HCV-cAg)的酶联免疫检测结果在临床中的应用,选择适合基层医院开展的丙型肝炎病毒感染的血清学诊断方法.方法 对来自我院的89例拟诊为丙型肝炎的患者同时进行抗-HCV、HCV-cAg双相检测.结果 89例拟诊为丙型肝炎患者中检出87例阳性,检出率为97.7%,84例抗-HCV阳性,53例两项检测同时阳性,5例抗-HCV阴性患者中,3例HCV-cAg阳性,2例HCV-cAg阴性.结论 酶联免疫法联合检测抗HCV和HCV-cAg,简便易行,适合基层医院对丙型肝炎病毒感染的筛查,能减少漏诊,为临床提供可靠依据.

血清中DKK1含量对子宫内膜癌诊断的价值

目的:检测血清中DKK1的含量在子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)患者诊断中的应用价值.方法:应用酶联免疫检测法(EUSA)检测76例健康对照组血清和76例EC患者中DKK1和CA199的含量,并将两者进行比较.探讨DKKl在EC诊断中的应用价值.结果:健康对照组血清中DKK1浓度为(92.25±20.69) pg/ml,EC患者血清中DKK1平均水平为(108.27±27.58) pg/ml,两者有显著差异(P ＜0.000).EC患者血清中DKK1诊断的灵敏度是57.89％,特异度是89.47％,约登指数为0.473 7.健康对照组中CA199为(22.98±2.58) U/ml,EC患者血清中CA199为(60.02±4.51) U/ml,两者有显著差异(P＜0.000).CA199在EC诊断中的灵敏度是53.95％,特异度是85.53％,约登指数是0.394 8.DKK1在EC诊断中的灵敏度和特异度均略优于CA199.EC患者年龄、BMI指数、淋巴结侵犯、脉管浸润、分化程度均与DKK1及CA199的检测水平无显著相关性(P＞0.05),FIGO分期则与DKK1的水平相关(P＜0.05).浸润深度及FI-GO分期与CA199水平相关(P＜0.05).结论:DKK1可作为检测EC的一种新的肿瘤标志物,并有可能与EC患者的预后相关,在EC诊断中有一定的应用价值.

抗恩诺沙星抗血清的制备及其ELISA检测

目的:建立快速、灵敏的恩诺沙星残留酶联免疫检测方法(ELISA).方法:采用混合酸酐法,将恩诺沙星与牛血清白蛋白和卵清蛋白分别合成免疫抗原(Enrofloxacin-BSA)和包被抗原(Enrofloxacin-OVA).通过背部多点免疫法免疫日本大白耳兔,制备抗恩诺沙星的特异性抗血清.结果:利用所获得的特异性抗血清,建立的恩诺沙星ELISA检测方法,其线性范围为5 ng·mL<'-1>.～2.5μg·mL<'-1>(R<'2>=0.9935),且与HPLC方法具有良好的相关性(R<'2>=0.9892,n=9).牛奶、大鼠血浆和尿液中的加样回收率分别为98.4％～105.8％,91.7％～101.2％,97.0％～110.3％.运用所建立的方法,对大鼠体内血浆及药品中恩诺沙星的含量进行了测定.结论:本研究所建立的检测恩诺沙星的ELISA方法具有样品前处理简单,灵敏度高及分析速度快等优点,适合用于恩诺沙星的体内分析及动物性食品中恩诺沙星的残留分析.

PCR产物酶联免疫检测法在临床检验中应用效果分析

目的:探究PCR产物酶联免疫检测法检测的临床应用效果.方法:对PCR产物进行微孔板技术、酶联免疫法、PCR杂交联合检测,分析检测结果对临床疾病的诊断价值.结果:PCR产物检测可以诊断结核分枝杆菌、肺炎支原体、人乳头瘤病毒、百日咳杆菌等多种病菌的引起的疾病,在临床疾病诊断中具有重要作用.结论:PCR产物采用酶联免疫检测法检测操作简单,受主观因素影响小,特异性高,稳定性强,具有较高的临床检验价值.