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液相色谱-质谱/质谱法测定鸡肉中恩诺沙星和沙拉沙星残留的国标方法优化
针对国标方法《GB/T 21312-2007动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》中的鸡肉中恩诺沙星和沙拉沙星残留检测存在耗时长和过柱容易堵塞的问题,从检测方法参数如称样重量、离心机转速和离心时间等方面对上述国标方法进行优化.优化后的检测方法有效地解决了国标方法检测过程耗时长和提取的溶液过柱容易堵塞的问题.
关键词： 鸡肉 恩诺沙星 沙拉沙星 离心机转速 液相色谱-质谱/质谱法 -
高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物源食品中3种抗菌类药物残留
利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-ESI-MS/MS)技术，建立了同时测定动物源食品中3种抗菌类药物残留量的分析检测方法。对色谱、质谱条件进行优化，样品采用环己烷-乙酸乙酯（V/V=1：1）提取，无水硫酸钠除水分，正己烷去脂肪，经GPC富集浓缩目标化合物，旋转蒸发后定容。以0.1％甲酸-甲醇溶液为流动相，经Hypersil GOLD aQ色谱柱分离后，LC-MS/MS多反应监测模式分析，外标法定量，结果表明：3种目标化合物在100.00~1000.00 ng/mL 浓度下线性良好（R2≥0.9900），添加低、中、高三个水平浓度时，目标化合物的平均回收率为70.07%～85.36%，相对标准偏差小于9.5%。方法检出限为0.15～0.3μg/kg，定量下限为0.5~1.5μg/kg。
关键词： 高效液相色谱-质谱联用 动物源食品 乙酰甲喹 卡巴氧 恩诺沙星 -
恩诺沙星注射混悬剂的研制及药物含量测定研究
用林可霉素和恩诺沙星为主药,设计出优选的配方,使用分散法配制了恩诺沙星混悬剂,并且用紫外/可见光的光度计来测定恩诺沙星含量.从结果中看出,按照优选的条件配制出的恩诺沙星混悬剂的样品,具有不结块、容易重分散和通针性好的特点.本文中所配制的混悬剂分成2种:①40mg/mL;②80mg/mL.这2种药剂在180°的室温下储存,药剂含量无较大改变.
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残留剂量恩诺沙星对SPF小鼠肠道微生态的影响
目的 通过分析残留剂量恩诺沙星对SPF级小鼠肠道菌群耐药性、定植抗力的影响,评估现行恩诺沙星ADI值的微生物安全性.方法 采用SPF级KM小鼠,通过饮水连续给药恩诺沙星35 d,给药剂量分别为0、0.005、0.05、0.5、5 mg/kg d.实验内容由两个独立的平行实验构成,实验一观察菌群耐药率的变化;实验二在给药恩诺沙星10 d后,灌胃接种白假丝酵母菌,观察小鼠肠道内白假丝酵母菌的清除情况.结果 0.5、5 mg/ks d剂量组的总需氧菌及总厌氧菌的耐药率明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).0.5、5 mg/kg d剂量的恩诺沙星可降低小鼠肠道菌群对外源性白假丝酵母菌的清除力.结论 未观察到0.05 ms/kg d恩诺沙星剂量(对应于现行ADI值)对小鼠肠道菌群的影响,当剂量大于0.05 mg/kg d时,可能对小鼠肠道微生态造成负面影响,说明我国现行恩诺沙星ADI值安全性较好,不会对人体肠道菌群造成负面影响.
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恩诺沙星对鸡细胞色素P450 1A5表达的影响
目的 观察恩诺沙星对鸡细胞色素P450 1A5(CYP1A5)表达的影响,为揭示兽药残留的产生机制以及临床安全联合用药提供理论依据.方法 各实验组分别给予恩诺沙星5 mg/kg(低剂量组)、25 mg/kg(中剂量组)和125me/kg(高剂量组);对照组给予相同体积的生理盐水.给药5 d后检测鸡肝微粒体蛋白含量、CYP450含量、CYP1A5 mRNA及蛋白表达量的变化.结果 中、高剂量组的肝微粒体蛋白含量、CYP450含量、CYP1A5 mRNA及蛋白表达量与对照组相比分别下降14%、36%,5%、5%,9%、20%,37%、49%,差异均有显著性(P<0.05).结论 中、高剂量恩诺沙星对CYP1A5的表达呈现出抑制作用.
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恩诺沙星C-3上1,2,4-三唑硫基乙酰腙类化合物的合成及抗肿瘤活性
目的 基于氟喹诺酮的作用机制和结构特征设计抗肿瘤氟喹诺酮化合物.方法 1,2,4-三唑杂环作为恩诺沙星C-3上羧基的电子等排体,硫基乙酰腙作为功能修饰侧链,设计合成了新的1,2,4-三唑硫基乙酰腙类氟喹诺酮C-3衍生物(7a-71),其结构经元素分析和光谱数据确证,用MTT[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide]方法评价了体外对SMMC-7721、L1210和HL60共3种癌细胞的抗增殖活性.结果 合成了12个新目标物,对3种癌细胞抗肿瘤活性强于母体恩诺沙星.构效关系表明,2-羟基苯环基或吸电子基取代苯基类化合物的活性强于其他取代基的化合物,其中对SMMC-7721细胞的活性与对照阿霉素相当.结论 硫基乙酰腙功能基修饰的1,2,4-三唑杂环替代氟喹诺酮C-3上羧基有利于提高抗肿瘤活性.
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恩诺沙星噁二唑硫酮曼尼希衍生物的合成及抗肿瘤活性
目的 为发现氟喹诺酮C-3羧基等排体的优化方法.方法 用噁二唑硫酮杂环替代恩诺沙星(1)C-3羧基,以曼尼希碱作为修饰侧链,设计合成了10个新的恩诺沙星C-3羧基等排体——噁二唑硫酮曼尼希碱目标化合物(4a-4j),其结构经元素分析和光谱数据确证.用MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)方法评价了目标化合物体外对SMMC-7721、L1210和HL60 3种癌细胞的生长抑制活性.结果 目标物对3种实验癌细胞的生长抑制活性强于母体化合物1和中间体噁二唑酮3的活性,其中以哌嗪和对氟苯胺为胺供体目标化合物对SMMC-7721细胞的活性高于其他胺供体化合物的活性,其活性与对照阿霉素的活性相当.结论 噁二唑硫酮杂环可作为氟喹诺酮C-3羧基的等排体,用曼尼希碱侧链修饰可显著提高其抗肿瘤活性.
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恩诺沙星噁二唑类化合物的合成及抗肿瘤活性
目的 寻找氟喹诺酮由抗菌活性转化为抗肿瘤活性的结构修饰策略.方法 用噁二唑杂环作为恩诺沙星(化合物1)C-3羧基的等排体,设计合成了12个新的噁二唑类目标化合物(3a-3l),其结构经元素分析和光谱数据确证.用MTT方法评价了目标化合物体外对SMMC-7721、L1210和HL60 3种癌细胞的生长抑制活性.结果 目标物对3种实验癌细胞的生长抑制活性显著强于母体化合物(1)的活性.构效关系表明,苯环带羟基或氟原子或磺酰胺基化合物的活性强于其他取代基化合物的活性,其活性与对照阿霉素的活性相当.结论 氟喹诺酮C-3羧基并非是喹啉酮羧酸类抗肿瘤活性所必需的药效团,用噁二唑杂环替代可显著提高其抗肿瘤活性.
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恩诺沙星β-环糊精包合物的制备
目的:探讨恩诺沙星β-环糊精包合物的制备工艺并对制剂进行质量考察.方法:采用饱和水溶液法制备恩诺沙星β-环糊精包合物,通过L9(34)正交试验设计,以药物的包封率为考察指标,综合评定后确定佳制备工艺.结果:佳包合条件恩诺沙星与β-环糊精比例为1:3、包合时间为1.5h、包合温度为60℃,平均包封率为50.01%.经差示扫描量热分析表明饱和水溶液法制备的恩诺沙星与β-环糊精形成包合物.结论:饱和水溶液法制备恩诺沙星β-环糊精包合物,方法简单、包封率较高、可操作性强.本课题为进一步研究恩诺沙星β-环糊精包舍物提供了依据.
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恩诺沙星微囊的制备
目的:制备恩诺沙星微囊及工艺优化.方法:本实验采用单凝聚法制备恩诺沙星微囊,应用显微镜观察产品的形态,采用紫外分光光度法测定微囊中恩诺沙星的包封率.结果:恩诺沙星微囊在显微镜下观察为圆球形微囊,紫外分光光度法测得产品包封率为48.15%.结论:单凝聚法可成功制备恩诺沙星微囊,方法简单,包封率较高,可操作性强.
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恩诺沙星印迹聚合物的制备及体外药物释放
以恩诺沙星为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯为交联剂制备恩诺沙星印迹聚合物,并通过吸附试验优化其合成条件.通过扫描电镜、红外光谱分析和吸附试验表征印迹聚合物的性质,并测定了各印迹聚合物在4种不同pH值介质中的药物释放性能.当模板分子∶功能单体∶交联剂的比例为1∶8∶6时合成的印迹聚合物的吸附性能佳.Scatchard模型分析显示,佳条件下制备的印迹聚合物的大表观结合量为66.8 mg/g.该印迹聚合物重新载药后的体外释放行为呈pH依赖性,但突释现象较严重.
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恩诺沙星在家兔组织中的残留消除规律研究
目的 探讨恩诺沙星在家兔组织中的残留消除规律.方法 选择44只新西兰兔,肌肉注射恩诺沙星注射液,注射剂量为2.5 mg/kg体重,每天2次,连续注射5 d,试验组分别于停药后的第1、3、5、7、9、11、13天,随机处死6只(雌雄各3只),取肌肉、肝脏、肾脏,进行恩诺沙星和环丙沙星残留量测定.结果 停药24 h后,家兔组织中的恩诺沙星和环丙沙星残留总量已低于欧盟和农业部的高残留限量(MRL).结论 本研究可以为制定肉兔合理的休药期提供依据.
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恩诺沙星对小鼠肝微粒体细胞色素P450影响的研究
恩诺沙星(errofloxacin,EF)是动物专用药,有抗菌谱广、杀菌力强、速效等特点,广泛应用于兽医临床[1].细胞色素 P450(P450)是重要的肝微粒体混合功能氧化酶,对阐明药物代谢及相互作用和指导临床用药有重要意义.已有大量研究报道,EF 可抑制鸡、猪、鱼等 P450 [2-3],而对小鼠 P450 研究较少,且 EF 对其 CYP2B6、2C9 的影响尚未见报道.本文以小鼠为研究对象,观察 EF 对小鼠 CYP2B6、2C9 等 P450 酶系的影响,从而揭示药物与机体的相互作用,同时也为临床合理用药提供理论参考.
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鸡蛋中环丙沙星、恩诺沙星残留物HPLC-MS/MS分析
目的 建立鸡蛋中环丙沙星、恩诺沙星残留物液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法.方法 鸡蛋中环丙沙星、恩诺沙星用酸性乙腈提取,正己烷除脂,采用Waters ACQUITY UPLC?BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm)分离,电喷雾离子源在正离子模式下电离,多反应监测(MRM)模式扫描.结果 环丙沙星和恩诺沙星分别在5.194～129.85 ng/ml和2.154～53.85 ng/ml范围内线性关系良好,线性方程分别为Y=1300X+17.7(r=0.9999)、Y=1450X-658(r=0.9993).环丙沙星和恩诺沙星定量限(S/N=10)分别为1.0388μg/kg和0.4308μg/kg.分别添加环丙沙星含量为1.0388,2.597μg/kg,恩诺沙星含量为0.4308,1.077μg/kg的对照品溶液于阴性鸡蛋基质中,回收率分别90.7％～107.6％、80.1％～101.6％和85.0％～105.4％、86.9％～103.6％.结论 该方法简单、灵敏、准确,可以作为鸡蛋中环丙沙星、恩诺沙星的检测方法之一.
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大肠杆菌在恩诺沙星作用下形态的变化
目的 观察大肠杆菌在恩诺沙星作用下菌的形态变化,为临床诊断提供依据.方法 利用荧光染色剂与流式细胞术相结合技术观察丝状菌的情况,利用激光共聚焦扫描显微镜观察丝状菌内的核酸情况.结果 大肠杆菌在恩诺沙星药物作用下,变成丝状菌,且直径也明显增加,随着药物浓度增加,活菌数量明显减少.结论 通过对菌连续的观察和进一步实验,证实了丝状菌的形成过程.丝状菌抗药性明显增加.
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高效液相色谱荧光检测法同时测定婴幼儿食用鱼粉中环丙沙星和恩诺沙星残留量
目的:建立用高效液相色谱荧光检测器同时测定婴幼儿食用鱼粉中环丙沙星和恩诺沙星残留的方法.方法:试样经水复原后,由5%乙酸乙腈提取,正己烷脱脂,以0.05 mol/L磷酸三乙胺缓冲液-乙腈(体积比为85:15)为流动相洗脱,荧光检测器定性定量.结果:该方法对测定的两种药物的检出限均为5μg/kg,定量限均为10μg/kg.两种约物在5μg/L～80μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99.在添加水平分别为10μg/kg、20μg/kg和80μg/kg时,两种药物的加标同收率为80.3%～92.6%.相对标准偏差(RSD)为1.2%～3.8%.结论:方法操作简单、重现性好、灵敏度高、分析时间短,适用于鱼粉中环丙沙星和恩诺沙星残留的确证检测.
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高效液相色谱-荧光检测法同时测定鱼肉组织中的诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星残留
目的:应用高效液相色谱法(HPLC),建立起同时测定鱼肉中诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)和恩诺沙星(ENR)残留量的方法.方法:改进前处理方法和优化色谱条件,确定了以丙酮-0.1 mol/L氢氧化钠(10+1)为提取液,以MeCN-20 mmol/L磷酸盐缓冲液(含12 mmol/L溴化四丁铵)(20+80),pH=3.0-为流动相,用Waters XTerra(R) Phenyl色谱柱分析,荧光检测器测定的佳条件.结果:该方法线性关系和重复性良好,样品回收率在84.20%～101.55%之间,变异系数在10%以内,低检出限为0.005 ms/kg.结论:该法提取效果好,操作简便、快捷、灵敏度高、重现性好,能够满足鱼肉中诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星残留量检测的技术要求.
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高效液相色谱荧光检测法测定全血中环丙沙星和恩诺沙星的研究
目的:建立一种灵敏、可靠的全血中环丙沙星和恩诺沙星的高效液相色谱荧光检测方法.方法:样品经磷酸盐缓冲液提取后,用Waters Oasis(R) MAX小柱进行净化,甲醇/乙腈/0.2%甲酸(15/15/70,v/v/v)为流动相,采用Cloversil-C18柱(150 mm ×4.6 mm i.d.,5μm)分离,荧光检测波长λex 275 nm和λem 445 nm.结果:环丙沙星和恩诺沙星在100.0～2500.0μg/L范围内呈良好线性,方法回收率在93.6%～96.2%之间,RSD<7.5%,其检出限为50.0μg/L.结论:本方法简便、灵敏、重现性好、干扰少、特异性好,能满足血液中环丙沙星和恩诺沙星的检测要求.
关键词： 高效液相色谱-荧光法 全血 环丙沙星 恩诺沙星 -
蜂蜜中4种氟喹诺酮残留的高效液相色谱-质谱测定
目的:建立蜂蜜中氧氟沙星、恩诺沙星、双氟沙星、沙拉沙星4种氟喹诺酮残留的高效液相色谱-质谱联用检测方法.方法:样品经磷酸盐缓冲液稀释、溶解后,用Waters Oasis(R) MAX小柱进行净化、提取,Cloversil-C18柱(150 mm×4.6 mm×5 μm)分离;流速:0.5 ml/min;柱温:30℃;流动相:乙腈/0.05%三氟乙酸(25/75,v/v);通过电喷雾电离离子化在选择离子监测(SIM)模式下测定,氧氟沙星、恩诺沙星、双氟沙星、沙拉沙星定量分析离子m/z:362.0[M+H]+、360.1[M+H]+、400.0[M+H]+和386.0[M+H]+,外标法定量.结果:在0.50～100.0 μg/kg范围内4种目标化合物均呈良好的线性关系,平均回收率大于95.3%,RSD均小于3.5%,检出限为0.5 μg/kg.结论:本法简便、灵敏、重现性好、特异性强,是蜂蜜中4种氟喹诺酮残留检测的有效方法.
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恩诺沙星纳米粒的制备及其药剂学性质研究
目的:研制一种新型的恩诺沙星纳米粒制剂.方法:以聚乳酸为载体材料,采用溶剂挥发法制备了恩诺沙星聚乳酸纳米粒,对其形态学、载药量、包封率以及粒径分布等性质进行了研究,并对其进行相关的质量评价.结果:制备的恩诺沙星聚乳酸纳米粒的包封率平均为71.0%,载药量平均为11.3%,平均粒径为66.8 nm,粒径范围为30.0 nm～117.5 nm,电子透射显微镜下观察纳米粒,基本呈较光滑圆整的球形,大小较均匀,且粒径分布较窄.结论:制备工艺可行且制备的恩诺沙星聚乳酸纳米粒包封率相对较高,质量稳定,重现性好.
