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以合成肽作抗原的酶联免疫吸附法检测抗精子抗体
血清、精浆和宫颈粘液中的抗精子抗体(AsAb)是导致不孕和自然流产的原因之一。现常用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测AsAb,但该法以正常生育者的精子直接或制成包被抗原来包被酶标板[1],受抗原来源限制,且稳定性和重复性不理想。本研究用人工合成的特异性精子肽作包被抗原,以ELISA检测AsAb,取得较满意结果。
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病毒性肝病患者混合感染庚型肝炎病毒临床分析
我们采用酶链免疫吸附试验(ELISA)的方法检测患者血清中HGV-IgG,旨在了解肝病患者混合感染庚型肝炎病毒(HGV)的情况,进而了解其临床表现.由于用特异性的引物进行的反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测方法较为复杂,成本也高,不利于进行临床的普遍检测,国内汪兴太和貌盼勇等[1~2],分别报道用人工合成的多肽作包被抗原,进行抗HGV 抗体的检测,获得较好的效果.ELISA法操作简单,成本低,可作为临床病人的初步检测.我们用ELISA法检测204份血清,其中有51例抗HGV-IgG阳性,我们分析这51例病旨在了解各类肝病患者混合感染GBV-G/HGV的临床表现.现报告如下:
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人精子顶体膜蛋白的纯化及性质的研究
目的:提取和纯化与人卵透明带(HZP)作用更为密切的人精子膜蛋白,为改进精子包被抗原的制备方法和筛选避孕疫苗抗原提供科学依据.方法:将人精子膜蛋白混合液进行SDS-PAGE电泳,然后全胶电洗脱分别收集蛋白溶液30管,以阳性管内的HZP特异精子蛋白溶液包被抗原进行AsAb检测.结果:与HZP结合的人精子膜蛋白有多种成分;全胶电洗脱后以第 14管内成分之特异强,其分子量范围为48~53KD.结论:以电洗脱转移法纯化筛选的人精子膜蛋白是特异的,与HZP具极强相关性,可以用该精子膜蛋白包被抗原进行AsAb研究.
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类风湿因子阳性血清对酶免法丙肝抗体检测结果影响分析
第二代、第三代丙肝抗体酶免疫试验(抗-HCV EIA)诊断试剂的出现,提高了HCV抗体的检出率.由于现用的试剂盒所用包被抗原为合成多肽抗原和基因工程抗原(包括HCV病毒结构区核心抗原和非结构区抗原),增加了试验的敏感性和特异性.类风湿因子(RF)阳性血清对现用试剂盒是否有干扰,是否造成假阳性结果,为此我们进行了初步检测,结果如下.
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反应时间对国产丙肝抗体酶联免疫诊断试剂的影响
目前,绝大部分丙肝抗体酶联免疫诊断试剂,都通过国家标准,但灵敏度低于进口试剂,这主要与包被抗原的质量有很大关系,但反应时间特别是加入样品后的孵育时间对试剂灵敏度的影响不可忽视.
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类风湿因子对ELISA法检测结核抗体的干扰
在以往应用ELISA法检测结核抗体的实践中,作者注意到类风湿因子(RF)对结核抗体的影响较大,原因在于标本中的RF与包被抗原中某些不纯物质结合,加入酶标抗体后,RF与抗体的Fc段非特异性结合,从而导致假阳性的结果。作者通过40例RF阳性血清与30例本院传染科明确诊断为结核病的患者血清进行对比检测来考察RF对ELISA法检测结核抗体的干扰。……
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皮肤病患者血清人疱疹病毒8型特异性IgG抗体检测
为探讨天疱疮等皮肤病与人疱疹病毒8型(HHV-8)的可能相关性,我们以HHV-8开放读码框架(ORF)65和K8.1基因编码寡肽作包被抗原,应用酶联免疫吸附(ELISA)法对29份天疱疮血清、9份大疱性类天疱疮血清、53份寻常性银屑病血清以及109份健康献血员对照血清做了HHV-8特异性IgG抗体检测.
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HCV包被抗原与检测灵敏度关系的研究
我国各血站检验室于1993年起应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测HCV抗体对献血员进行筛选.为了选择优质试剂用于血液筛选,保障安全输血,笔者研究了HCV包被抗原与ELISA试验检测灵敏度的关系.
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1050名献血员的庚型肝炎病毒感染状况调查
庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)是近年来新发现的一种新型肝炎病毒,其基因组为单股正链的RNA病毒,主要经血传播,可致急、慢性肝炎和无症状病毒携带状态[1]。GBV-C/HGV感染呈全球分布,我国GBV-C/HGV感染分布较广,流行较为严重[2]。为了解合肥地区献血员中GBV-C/HGV感染情况,我们对合肥市某医院输血科献血员进行调查。1 材料与方法1.1 血清来源合肥市某医院输血科1998年3月~7月的所有献血员,共1110名,取血清1050份;所有血清检测抗-GBV-C/HGV后,剩余部分-40℃冻存备检GBV-C/HGVRNA。1.2 抗-GBV-C/HGV检测包被抗原为人工合成多肽,分别选自非结构区NS3、NS5,进行混合包被,部分序列参见文献[3],EIA法检查血清中抗-GBV-C/HGV。1:20倍稀释血清,临界值=阴性对照平均OD值+0.25,≥临界值为阳性,否则为阴性,连续两次检测阳性者,判为阳性。
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精子顶体膜蛋白的研究
目的:研究提取和纯化与人卵透明带(HZP)作用更为密切的人精子膜蛋白,为改进精子包被抗原的制备方法和筛选避孕疫苗抗原提供科学依据.方法:①悬浮离心法制备人精子膜蛋白混合溶液;②卵子热溶透析法制备HZP溶液;③将人精子膜蛋白混合溶液进行SDS-PAGE电泳,然后全胶电洗脱分别收集蛋白溶液30管;④梅花孔葡聚糖凝胶试验及精卵结合体外实验鉴定出阳性管;⑤以阳性管内的HZP特异精子膜蛋白溶液包被抗原进行抗精子抗体(AsAb)检测.结果:SDS-PAGE电泳、梅花孔葡聚糖凝胶试验及精卵结合体外实验证实,与HZP结合的人精子膜蛋白有多种成分;全胶电洗脱后以第14管内成分之特异性强,与标准蛋白分子量对照,其分子量范围为48~53 kD.结论:以电洗脱转移法纯化、筛选的人精子膜蛋白是特异的,与HZP具极强相关性;以该精子膜蛋白包被抗原用于检测AsAb,其灵敏度更高,交叉反应会明显减少.
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麻疹病毒的纯化及其在麻疹IgG EIA诊断试剂中的应用
目的:摸索纯化麻疹病毒的方法,并以其为包被抗原,制备麻疹IgG酶联免疫(EIA)诊断试剂.方法:将L4株麻疹病毒液先后用超滤、PEG沉淀的方法进行浓缩,再分别用连续和不连续蔗糖密度梯度超速离心法进行纯化,比较不同方法纯化后的效果,终建立制备高纯度麻疹病毒包被抗原的方法,并在此基础上制备麻疹IgG酶联免疫(EIA)诊断试剂.结果:用超滤、PEG沉淀及连续蔗糖密度梯度超速离心纯化后的麻疹病毒的比活性为775.76 HAU/mg,SDS-PAGE及Western-blot证明纯化产物的纯度符合要求,电镜结果显示纯化物中含大量麻疹病毒.以该纯化抗原制备的EIA检测试剂与血凝抑制实验(HI)相比,该试剂的灵敏度为99.46%,特异度为81.82%,一致性为97.58%.与SIGMA麻疹IgG EIA诊断试剂盒的一致率为95.12%.结论:采用超滤、PEG沉淀及连续蔗糖密度梯度超速离心的方法可制备满足麻疹IgG EIA诊断试剂要求的包被抗原.
关键词: L4株麻疹病毒 酶联免疫(EIA) 包被抗原 蔗糖密度梯度超速离心 -
献血者初复检使用不同厂家ELISA抗-HCV试剂组合对实验结果的影响分析
目的 探讨采供血机构使用初复检的抗-HCV试剂组合不同,检测相同献血者标本会导致检测结果表现不同,选择的恰当试剂组合增强血液安全性的方法. 方法 以本血站2012-2013年间所使用两种试剂检测得到的抗-HCV不合格标本,以另两种不同试剂组成的新组合检测,同时采用核酸PCR-荧光法对比检测分析,并对结果异常标本进一步以蛋白免疫印迹分析法加以确认.将不同组合的ELISA试剂抗-HCV检测结果数据进行统计学分析. 结果 70例标本使用A+B试剂组合与使用C+D试剂组合所得出的检测结果存在差异,经核酸检测及免疫蛋白印迹实验,确认实验试剂C+D组合对70例标本中1例确认阳性的标本发生了漏检.试剂A+B组合中两种试剂对相同标本的检测结果分析差异有统计学意义,试剂C+D组合中两种试剂对相同标本的检测结果分析差异无统计学意义. 结论 选择使用恰当的试剂组合有效防止抗-HCV阳性标本漏检,提高血液的安全保障.
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抗恩诺沙星抗血清的制备及其ELISA检测
目的:建立快速、灵敏的恩诺沙星残留酶联免疫检测方法(ELISA).方法:采用混合酸酐法,将恩诺沙星与牛血清白蛋白和卵清蛋白分别合成免疫抗原(Enrofloxacin-BSA)和包被抗原(Enrofloxacin-OVA).通过背部多点免疫法免疫日本大白耳兔,制备抗恩诺沙星的特异性抗血清.结果:利用所获得的特异性抗血清,建立的恩诺沙星ELISA检测方法,其线性范围为5 ng·mL<'-1>.~2.5μg·mL<'-1>(R<'2>=0.9935),且与HPLC方法具有良好的相关性(R<'2>=0.9892,n=9).牛奶、大鼠血浆和尿液中的加样回收率分别为98.4%~105.8%,91.7%~101.2%,97.0%~110.3%.运用所建立的方法,对大鼠体内血浆及药品中恩诺沙星的含量进行了测定.结论:本研究所建立的检测恩诺沙星的ELISA方法具有样品前处理简单,灵敏度高及分析速度快等优点,适合用于恩诺沙星的体内分析及动物性食品中恩诺沙星的残留分析.