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人精子顶体膜蛋白的纯化及性质的研究
目的:提取和纯化与人卵透明带(HZP)作用更为密切的人精子膜蛋白,为改进精子包被抗原的制备方法和筛选避孕疫苗抗原提供科学依据.方法:将人精子膜蛋白混合液进行SDS-PAGE电泳,然后全胶电洗脱分别收集蛋白溶液30管,以阳性管内的HZP特异精子蛋白溶液包被抗原进行AsAb检测.结果:与HZP结合的人精子膜蛋白有多种成分;全胶电洗脱后以第 14管内成分之特异强,其分子量范围为48~53KD.结论:以电洗脱转移法纯化筛选的人精子膜蛋白是特异的,与HZP具极强相关性,可以用该精子膜蛋白包被抗原进行AsAb研究.
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精子顶体膜蛋白的研究
目的:研究提取和纯化与人卵透明带(HZP)作用更为密切的人精子膜蛋白,为改进精子包被抗原的制备方法和筛选避孕疫苗抗原提供科学依据.方法:①悬浮离心法制备人精子膜蛋白混合溶液;②卵子热溶透析法制备HZP溶液;③将人精子膜蛋白混合溶液进行SDS-PAGE电泳,然后全胶电洗脱分别收集蛋白溶液30管;④梅花孔葡聚糖凝胶试验及精卵结合体外实验鉴定出阳性管;⑤以阳性管内的HZP特异精子膜蛋白溶液包被抗原进行抗精子抗体(AsAb)检测.结果:SDS-PAGE电泳、梅花孔葡聚糖凝胶试验及精卵结合体外实验证实,与HZP结合的人精子膜蛋白有多种成分;全胶电洗脱后以第14管内成分之特异性强,与标准蛋白分子量对照,其分子量范围为48~53 kD.结论:以电洗脱转移法纯化、筛选的人精子膜蛋白是特异的,与HZP具极强相关性;以该精子膜蛋白包被抗原用于检测AsAb,其灵敏度更高,交叉反应会明显减少.