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定量检测肝细胞生成素Cn的双抗体夹心ELISA检测方法的建立
目的 建立定量检测肝细胞生成素Cn (HPPCn)的双抗体夹心ELISA方法.方法 利用杂交瘤方法获得8个抗HPPCn单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western印迹对纯化抗体特性进行鉴定.利用镀金芯片法对8个抗体进行配对检测.通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的适工作浓度.以纯化的HPPCn抗原为标准品建立标准曲线.结果 得到了8株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株,分别为Ab 65-29-6,Ab_3-3-3,Ab_9-34-1,Ab_4-8-12,Ab_7-8-10,Ab_2-30-23,Ab_1 1-11-12和Ab_12-27-23.8个抗体均能够特异结合HPPCn抗原,其中Ab_65-29-6与细胞中HPPCn结合的特异性好.经抗体配对检测证实佳配对组合为:Ab_2-30-23和Ab_4-8-12.包被抗体Ab_2-30-23和识别抗体Ab 4-8-12的适工作浓度为2.5 μg/ml,适稀释度为1∶2000,标准曲线检测的线性范围为5.0~60 ng/ml.结论 制备了可特异性检测人HPPCn蛋白的单克隆抗体,并建立了一种可用于定量检测人HPPCn的双抗体夹心ELISA方法.
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兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体的制备及初步鉴定
目的 狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG.方法 HiTrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法( ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定.结果 狨猴和兔抗狨猴血清纯化IgG纯度分别大于95% 、97% ;兔抗狨猴IgG抗血清的效价为1∶64. ELISA和Western blotting鉴定了兔抗狨猴IgG-HRP酶标抗体参考工作浓度为1∶256 000、1∶15 000,特异性明显.结论 制备狨猴IgG-HRP标记抗体并初步鉴定,包括ELISA及Western blotting的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学检测体系储备了资源.
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应用三种方法测定水痘病毒抗体滴度比较
水痘是儿童一种急性、高传染性疾病,建立水痘病毒抗体测定方法,对水痘血清流行病学调查、水痘疫苗免疫效果考核具有十分重要意义.作者应用蚀斑减少中和试验、间接免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验,对22份健康人群血清和2份带状疱疹病人恢复期血清进行了VZV抗体测定.结果24份血清VZV中和抗体、荧光抗体、酶标抗体GMT分别为1:2.38、1:4.36和1:110.07,3种抗体GMT比值为1:1.83:46.25.此结果提示,蚀斑减少中和试验测定VZV抗体敏感性低,与荧光法接近,酶联免疫吸附试验的敏感性高.
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类风湿因子对ELISA法测定抗-HCV的干扰
目前,临床诊断丙型肝炎主要是ELISA法测定血清中的抗-HCV抗体.以往的一些文章报道了类风湿因子(RF)对某些ELISA法检测抗体试验的影响较大,实验中RF与包被抗压中某些不纯物质结合,加入酶标抗体后,RF与抗体的Fe段结合,从而导致了假阳性的结果.同时也有报道在病毒性肝炎患者中,RF的检出率明显偏高,本文探讨了RF对ELISA检测抗-HCV实验的干扰.1 材料和方法1.1 试剂1.1.1 ELISA法测定-HCV试剂盒(沈阳市惠民医药研究所)1.1.2 类风湿因子胶乳液试剂(上海医学化验所)1.2 标本1.2.1 29例类风湿因子阳性血清.1.2.2 5例经临床确诊的丙型肝炎患者血清.1.3 方法1.3.1 RF的测定:按试剂盒说明书操作,在1min内出现明显凝集颗粒者为阳性.
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间接酶免疫法测定抗中性粒细胞胞浆抗体
目的建立检测抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的间接酶免疫方法,并评价其应用价值.方法以中性粒细胞基质片为抗原,以辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG F(ab′)2为第二抗体,经底物显色,普通光镜镜检判断结果;用此法和间接免疫荧光法(IIF)检测了30例正常人和77例相关疾病的患者血清标本共107例.结果两方法的敏感性和特异性无差异,两法符合率为100%.结论间接酶免疫法可替代以往的IIF法,有利于基层单位应用.
关键词: 抗中性粒细胞胞浆抗体 辣根过氧化物酶 酶标抗体 中性粒细胞 -
免疫酶细胞化学技术
免疫酶细胞化学技术,是免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)中常用的方法之一.与抗体特异性反应结合下,借助于酶细胞化学的手段来检测组织工程化构建组织细胞内抗原.上世纪60年代初Nakane、Pierce Avrameas和Uriel等成功地把辣根过氧化物酶(Horseradish-peroxidase,HRP)标记在抗体分子上.从而开创了酶标抗体的新技术.
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类风湿因子对ELISA法检测结核抗体的干扰
在以往应用ELISA法检测结核抗体的实践中,作者注意到类风湿因子(RF)对结核抗体的影响较大,原因在于标本中的RF与包被抗原中某些不纯物质结合,加入酶标抗体后,RF与抗体的Fc段非特异性结合,从而导致假阳性的结果。作者通过40例RF阳性血清与30例本院传染科明确诊断为结核病的患者血清进行对比检测来考察RF对ELISA法检测结核抗体的干扰。……
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检测PAIg酶标抗体制备中的影响因素探讨
以过碘酸钠法为基础,选用一定实验条件制备酶标抗体,探讨制备过程中影响酶标抗体质量的因素.结果显示,辣根过氧化物酶(HRP)与抗体比例在1:1.5时,其标记率适当,容易获得质量较好的酶标抗体;Sephadex G-200柱层析法纯化交联产物明显优于硫酸铵沉淀法.
关键词: 酶标抗体 辣根过氧化物酶(HRP) 过碘酸钠 -
1996~1998年黑龙江省160例暴露者狂犬病毒抗体水平监测
目前对狂犬病尚无特效的治疗方法,要防治狂犬病除加强疫苗免疫外,对狂犬病的监测是十分必要的,近我们应用DEIA及IFA两种方法对160例暴露者进行血清学监测现将结果报告如下:1 材料与方法1.1 材料硝酸纤维素膜,5%脱脂乳,4-氯一1一萘酚,羊抗人IgG酶标抗体1.1.5 斑点抗原:BHK-21细胞消化后,24~48h形成单层细胞,感染狂犬病毒悬液2ml、37℃吸附1.5~2h,加2%维持液培养5~7天,消化后PBS冲下,冻融3~5次,超声30"/ml,离心300r/min,10min,取上清即为斑点抗原。
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加样间隔时间对ELISA竞争抑制法检测抗-HBe和抗-HBc结果的影响
目的 研究ELISA竞争抑制法待检标本与辣根过氧物酶(HRP)标记的抗体加入间隔时间对抗-HBe和抗-HBc结果的影响.方法 用ELISA竞争抑制法将120份标本(放射免疫法定量检测乙肝标志物全部阴性)分两组检测抗-HBe和抗-HBc.一组加入标本后于室温放置不同时间再加入酶标抗体;另一组是将标本和酶标抗体同时加入,于室温放置不同时间,其余严格按说明书操作,后于酶标仪读取抗-HBe、抗-HBc的结果.结果 加入标本后1、2、5、10、20、30分钟时加入酶标抗体其抗-HBe利抗-HBc的结果分别与0分钟的结果比较,在1分钟组结果无差异(P>0.05).2分钟组结果有差异(0.0l
0.05).结论 加入标本后酶标抗体加入间隔时间越长,假阳性率越高,为了保证抗-HBe和抗-HBc检测结果的准确性,标本加入后应在一分钟内加入酶标抗体;标本和酶标抗体同时加入室温放置时间的长短对检测结果基本无影响.
关键词: 抗-HBe、抗-HBc ELISA竞争抑制法 酶标抗体 假阳性 -
ELISA实验影响因素的研究进展
1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是:①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。本文对影响ELISA实验的因素做一综述。
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酶联免疫吸附试验试剂盒稳定剂的研制与应用
目的:研制酶联免疫吸附试验试剂盒中各组分的稳定剂,使得试剂盒保存期达到国家相关规定。方法采用经验法和正交法相结合的办法,配制一系列稳定剂配方,对酶标板、酶标抗体及标准品等进行处理,通过对照试验,筛选出稳定效果好的配方。结果筛选到一种包被稳定剂(质量分数:牛血清清蛋白0.5%,明胶0.25%,海藻糖5%,PEG40000.1%),一种酶标抗体稳定剂(质量分数:牛血清清蛋白1%,蛋白胨1%,蔗糖10%,海藻糖5%,PEG40000.25%)。结论在稳定剂作用下,酶联免疫吸附试验试剂盒可在4℃条件稳定放置1年。
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乙型肝炎标本物检测中部分模式的抗HBc抗体阳性复检的意义
酶联免疫吸附试验(ELISA)竞争一步法检测乙型肝炎抗HBc抗体试剂盒通常是将乙型肝炎e抗原(HBeAg)包被于反应孔,待测样本中的抗HBc抗体与酶标抗体竞争结合包被的HBcAg,当样本中的抗HBc抗体浓度增高时,酶标抗体竞争结合的HBcAg较少,显色降低呈阳性.由此加样时差很容易导致不公平竞争从而对结果产生影响.