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类风湿关节炎免疫吸附剂的临床应用分析
目的：分析类风湿关节炎免疫吸附剂的临床应用效果。方法：收治类风湿关节炎患者56例，接受免疫吸附剂治疗，对比治疗前后疼痛程度、晨僵时间、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)等指标的变化。结果：与治疗前对比，治疗后患者VAS评分下降、晨僵时间缩短、ESR、CRP等指标均下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：采用免疫吸附剂疗法治疗类风湿关节炎疗效确切，可有效缓解疼痛、晨僵症状，减轻炎性反应，在临床中值得广泛应用。
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类风湿因子免疫吸附血液灌流材料的制备及其性能评价
制备一种新型的类风湿因子(RF)免疫吸附剂并研究其性能.通过在氯甲基聚苯乙烯-二乙烯树脂(氯球)的表面接枝苯丙氨酸(PHE),制备出可供临床应用的类风湿因子血液灌流吸附剂(PS-PHE);体外动态灌流实验测定吸附剂的吸附率;体外动态洗脱实验测定RF的脱落量及脱落率;通过体外灌流模拟实验,检测灌流对血液成分的影响来评价吸附剂的选择性;体外凝血酶原时间(PTs)及凝血酶时间(TTs)检测实验验证材料的血液相容性.免疫吸附剂对类风湿因子IgA RF、IgG RF、IgM RF的吸附率分别可以达到45.21％±1.80％、56.02％±1.36％、52.40％ ±2.01％ (n=5),洗脱后脱落率分别为22.10％±1.65％、19.23％±1.06％、21.31％±1.35％ (n=5).全血灌流实验中材料对红细胞、血小板、总蛋白的吸附均在10％以下.同时体外凝血酶原时间(PTs)及凝血酶时间(TTs)测定结果显示PS-PHE能延缓凝血速度.结论PS-PHE对RF具有较高的吸附率及特异性并且表现出优良的血液相容性,在类风湿关节炎的临床治疗方面具有良好的应用前景.
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DNA免疫吸附剂血液灌流治疗系统性红斑狼疮临床应用研究
目的:应用DNA免疫吸附剂,对系统性红斑狼疮(SLE)患者进行血液灌流治疗,以清除致病抗体及其免疫复合物,使血液得到净化以治疗疾病.方法:将患者动脉血液流经血液灌流仪,以保温(38℃±)和保持流速(200ml/min)进入DNA免疫吸附罐,在罐内经吸附后由静脉回输入体内.吸附1次需1.5～2h,使患者体内血液流经3～4遍.结果:32例SLE患者吸附后1～2天发热、乏力、关节痛消失,2周皮损87.5%消失,1周各项检测异常指标皆达正常参考值内.而血中有形成份红细胞、白细胞、血小板则无影响.所治疗32例SLE患者已随访12～44个月,与未用此法治疗的对比组34例SLE患者相比,生活质量明显提高,病死率显著下降(P<0.01).结论:用DNA免疫吸附剂进行血液灌流的净化疗法是特异性强、疗效高、无菌、无毒性、无致热源、无溶血反应、便于应用的一种新疗法.
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琼脂凝胶键连热聚IgG——一种新型类风湿关节炎免疫吸附剂
将热聚IgG固载到琼脂凝胶珠上,制成了一种特异性类风湿关节炎免疫吸附剂.体外吸附实验表明该吸附剂对类风湿因子及其免疫复合物具有强的选择吸附性能,活体动物全血灌流实验证明该吸附剂具有良好的血液相容性和机械强度.
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AChRα211的分泌表达及其对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用
目的在毕赤酵母(P. pastoris)中分泌表达AChRα211,研究其对重症肌无力患者血清中AChRAb的清除作用. 方法以质粒pUC-AChRα211为模板,PCR扩增人AChRα211 DNA 片段,插入真核表达载体pPIC9K中.重组质粒转入P. pastoris GS115后,经甲醇诱导分泌表达AChRα211,用Sepharose Q离子交换柱和Superdex 75分子排阻层析进行纯化.Western blot 和ELISA进行免疫活性分析后,将目的蛋白偶联于CNBr-Sepharose 4B树脂上,研究该免疫吸附剂对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用. 结果双酶切鉴定和序列分析表明,AChRα211 DNA片段已正确插入到pPIC9K载体中.重组菌P. pastoris GS115/pPIC9K-AChRα211经甲醇诱导可分泌表达目的蛋白AChRα211,经阴离子交换柱和分子排阻层析可得95%纯AChRα211,并制备成免疫吸附剂.Western blot 和ELISA分析表明,重组蛋白具有与天然AChRα亚基相似的免疫活性.免疫吸附实验表明该重组蛋白可特异性地去除肌无力患者血清中的AChRAb. 结论在P. pastoris中分泌表达并纯化重组蛋白AChRα211,制备成一种新的免疫吸附剂AChRα211-Sepharose,可清除肌无力患者血清中的AChRAb.
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妊娠合并系统性红斑狼疮患者应用DNA免疫吸附治疗后的妊娠结局
目的探讨DNA免疫吸附治疗用于妊娠合并系统性红斑狼疮(SLE)患者的临床效果.方法对69例妊娠合并SLE患者随机进行免疫吸附治疗35例(治疗组)和常规治疗34例(对照组).将治疗组的动脉血流经DNA免疫吸附剂(罐),然后由静脉回输至体内.比较两组的妊娠结局和并发症发生情况.结果妊娠并发症[妊娠高血压综合征(妊高征)、胎盘功能不全、流产等]发生率:治疗组为28.6%、对照组为85.3%,两组比较,差异有极显著性(P<0.01);胎儿丢失率:治疗组为20.0%、对照组为58.8%,两组比较,差异有极显著性(P<0.01).早产儿发生率:治疗组为8.6%、对照组为26.5%,两组比较,差异有显著性(P<0.05).结论 DNA免疫吸附治疗妊娠合并SLE,临床效果优于常规治疗.
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重症肌无力特异性免疫吸附剂的制备及对患者血清的静态吸附作用
目的制备一种对重症肌无力(myasthenia gravis, MG)致病性乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)具有特异性吸附作用的免疫吸附剂. 方法利用悬浮再生法,用环氧氯丙烷活化羟基,以人乙酰胆碱受体(AChR)主要免疫原区10氨基酸多肽作为配基固定于球型纤维素上制备MG特异性免疫吸附剂,以色氨酸为配基制备非特异性免疫吸附剂.应用酶联免疫吸附试验测定其对MG患者血清的静态吸附率.结果以AChR主要免疫原区10氨基酸多肽为配基的吸附剂对AChRAb的吸附率为(40.33±2.29)%,以色氨酸为配基的吸附剂的吸附率为(22.35±1.47)%. 结论以球型纤维素为载体,以AChR主要免疫原区10氨基酸多肽作为配基的特异性吸附剂对于MG的治疗可能是一种很有前途的方法.
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血液净化治疗重症狼疮性肾炎临床观察
众所周知,重症狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)患者的病死率较高,是系统性红斑狼疮(SLE)主要死亡原因之一[1].SLE病因学至今尚不清楚,但患者血浆中的抗ds-DNA抗体及免疫复合物是诊断该病的重要依据.
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DNA免疫吸附治疗儿童重度活动系统性红斑狼疮近期疗效研究
目的 评价DNA免疫吸附(DNA immunoadsorption,DNA-IA)治疗儿童重度活动系统性红斑狼疮(SLE)的近期疗效.方法 对12例儿童SLE患者进行DNA-IA治疗.所有患儿DNA-IA治疗前系统性红斑狼疮疾病活动度(SLEDAI)评分均＞15分,为重度活动.11例患儿常规行3次DNA-IA治疗,1例行2次治疗.DNA-IA治疗前后行抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(ds-DNA)抗体、红细胞沉降率、免疫球蛋白、补体、血常规、肝肾功能、24 h尿蛋白定量等检查.结果 DNA-IA治疗后患儿症状体征明显好转,SLEDAI评分明显下降,ANA滴度明显下降,抗ds-DNA抗体明显下降,补体C3明显上升,红细胞沉降率和血清IgG明显下降,尿蛋白定量明显下降,与治疗前比较差异均有统计学意义(P＜0.05);血清IgA、IgM、补体C4、血常规、肝肾功能等无明显变化.DNA-IA过程中无一例出现严重并发症.结论 DNA-IA是治疗儿童重度活动SLE的有效方法,还需进一步的对照研究观察其远期疗效.
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类风湿关节炎免疫吸附剂的临床应用
目的探讨免疫吸附剂治疗类风湿关节炎(RA)的临床效果.方法将67例RA患者随机分为RA免疫吸附剂治疗35例(治疗组)和非吸附治疗32例(对照组).将治疗组患者动脉血流经RA免疫吸附剂,吸附后由肘静脉回输入体内.随访8～30个月,比较两组疗效.结果治疗组经1～2次吸附治疗,有效率97%(34/35),较对照组69%(22/32)差异有显著性(P＜0.01).完全缓解率治疗组83%(29/35),较对照组50%(16/32)差异有显著性(P＜0.01).其中病史＜2年并关节功能状态Ⅱ级者22例,完全缓解率100%(22/22),较对照组病史＜2年并关节功能状态Ⅱ级者20例,完全缓解率70%(14/20)差异有显著性(P＜0.01).病史≥2年治疗组完全缓解率54%(7/13),较对照组17%(2/12)差异有显著性(P＜0.01).关节功能状态Ⅲ级者治疗组完全缓解率58%(7/12),较对照组18%(2/11)差异有显著性(P＜0.01).结论免疫吸附剂治疗RA,优于非吸附疗法.
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琼脂凝胶球载体吸附剂清除免疫球蛋白E的性能特征
目的:观察以琼脂凝胶球为载体的吸附剂对血浆中多余免疫球蛋白E的清除效果.方法:实验于2002-04/2004-09在南开大学完成.①高免疫球蛋白E患者血清由天津市长征医院免疫室提供.琼脂粉(北京益利精细化学品有限公司,批号20000810).环氧氯丙烷(天津津达精细化学品厂,批号20010502).②以20～40目的琼脂凝胶微球为载体,经环氧氯丙烷活化,键联配基色氨酸及手臂制得免疫球蛋白E免疫吸附剂,进行体外静态吸附测试.吸附结果采用酶标法免疫球蛋白E试剂盒检测.③连接手臂的琼脂-色氨酸吸附剂进行血液相容性测试,检测吸附前后血清中免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、免疫球蛋白A以及C3,C4含量的变化.全自动血球计数分析仪检测白细胞、红细胞、血小板数目的变化.结果:①不同配基对吸附剂吸附效果的影响:琼脂凝胶载体连接色氨酸配基后对免疫球蛋白E的吸附性能好,对其吸附主要是一种非极性作用力.②不同缓冲体系及pH值对吸附效果的影响:pH=5～6的范围内色氨酸的饱和溶解度低,键联量也很低.pH=6～8的磷酸盐缓冲体系,磷酸根离子参与环氧基的开环反应,降低载体的活化效率,同时可键联的活性氨基酸配基的量也相应减少.Tris-HCI和碳酸钠-碳酸氢钠缓冲体系,对色氨酸的饱和溶解度也不是很高.相对来说,pH=7～8的硼酸-硼砂缓冲体系效果较好.③不同手臂对吸附剂吸附效果的影响:与连接前比较,连接丁二酸酐、邻苯二甲酸酐手臂后的吸附剂对免疫球蛋白E的吸附能力均有所提高(56.02%,68.00%,60.87%).④以色氨酸为配基、丁二酸酐为手臂的琼脂凝胶吸附剂吸附动力学实验:吸附剂在37℃对免疫球蛋白E的吸附率为70.73%.⑤吸附剂的血液相容性实验结果:经过2 h的体外全血静态吸附后,吸附剂对5种组分的吸附率为免疫球蛋白A＞免疫球蛋白G＞C4＞C3＞免疫球蛋白M,而对大的免疫球蛋白A的吸附率也仅为26.17%,远低于对免疫球蛋白E的吸附率70.73%.吸附剂对全血细胞有一定的破坏性,静态吸附2 h后,白细胞下降27.3%,红细胞下降2,4%,血小板下降6.9%.结论:以琼脂凝胶微球载体,通过交联、活化和固定配基色氨酸成功制备免疫球蛋白E免疫吸附剂.此吸附剂对免疫球蛋白E有较高的清除率,同时具备较好的血液相容性,适用于临床血液灌流治疗支气管哮喘疾病.
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一种新型吸附剂去除IgE以治疗过敏性哮喘的可行性探讨
哮喘是一种常见且较难治愈的气道慢性反应性疾病.近年来的研究,虽然对其发病机制有新的发现,但IgE仍是介导哮喘变态反应的主要抗体.患者血清中的总IgE水平明显高于正常人[1,2].因此,控制患者血液中总IgE水平将会对哮喘患者的病情有很大改善.血液净化可有效地清除血液IgE,而免疫吸附疗法在清除IgE、治疗哮喘病方面具有更加明显的优势和广泛的应用前景.本文应用一种新型免疫吸附剂处理患者血清,观察其总IgE水平的变化情况,为新型吸附剂的开发和应用提供有价值的实验数据.
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免疫吸附剂治疗系统性红斑狼疮临床疗效观察
系统性红斑狼疮(SLE)患者的抗DNA抗体水平与病情严重程度密切相关.笔者采用DNA免疫吸附剂对有明显脏器损害(如心、肺、肾、骨等),且病情处于进展期的SLE患者进行治疗,现将资料完整的11例患者治疗情况报告如下.
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免疫吸附联合非清髓性CD34+细胞自身移植治疗难治性SLE三例
目的 观察免疫吸附联合非清髓性化疗结合CD34+细胞分选的自体外周血干细胞移植治疗难治性SLE的疗效.方法 难治性SLE 3例,均经肾活检确诊为狼疮性肾炎Ⅳ型,狼疮处于活动期,病情进展,常规治疗无效;应用以葡萄球菌A蛋白作为免疫吸附剂的吸附柱进行免疫吸附,一个疗程共6次,每次吸附血浆3 L;随后采用异环磷酰胺加重组人粒细胞集落刺激因子动员、Baxter CS-3000血细胞分离机采集外周血,获取单一核细胞,通过CD34+细胞分选仪分别得到2.6×106/kg、2.1×106/kg、2.4×106/kgCD34+细胞,采集物中分别含3×105/kg、2.1×105/kg、2.0×105/kg CD3+细胞,预处理为回输前6 d,每日应用氟达拉滨50 mg/d 共5 d,回输前3 d始每日应用抗胸腺细胞球蛋白90 mg/kg共5 d.结果 ①3例患者吸附后血浆中抗dsDNA、ANA抗体、lgG均明显下降,补体C3明显卜升.②3例患者均于移植后2～3 d获得造血重建.③移植后3例患者临床症状均明显缓解.SLEDAI评分均<3分.④移植后6个月,患者血浆中抗dsDNA、ANA抗体均转阴性,补体C3升至正常,尿蛋白转阴性,肾功能恢复正常.结论 移植治疗难治性SLE近期疗效满意.
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ELISA实验影响因素的研究进展
1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。本文对影响ELISA实验的因素做一综述。
