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炙马钱子对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠免疫调节机制研究
目的:探讨炙马钱子对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠的免疫调节机制.方法:从50只雌性Lewis大鼠中随机留取8只作为正常对照组,剩余的42只采用鼠源乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段免疫方法建立实验性重症肌无力模型,经评估确定建模成功40只.将这40只大鼠随机分为模型对照组,阳性药物对照组,炙马钱子低、中、高剂量组.炙马钱子低、中、高剂量组分别给予75、150、225mg·kg-1·d-1浓度的灸马钱子药液灌胃治疗,阳性药物对照组给强的松4mg·kg-1·d-1,每日1次;正常对照组、模型对照组给予药液等量的蒸馏水灌胃,共治疗28d.给药结束后观察各组EAMG大鼠临床表现和体质量的情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测正常对照组和各组造模大鼠血清中体液免疫指标AChRab及细胞免疫指标TGF-β 1的含量情况.结果:大鼠EAMG模型对照组血清中AChRab和TGF-β 1含量相比正常对照组显著升高(P＜0.01),给药后炙马钱子各组和阳性药物(强的松)对照组的AChRab和TGF-β 1含量相比模型对照组都有所下降.炙马钱子高剂量组AChRab含量比阳性药物对照组降低更显著(P＜0.01);炙马钱子中、高剂量组TGF-β 1含量显著低于阳性药物对照组(P＜0.01);炙马钱子低、中、高剂量组之间,药物剂量越大,TGF-β 1含量越低,差异具有统计学意义(P＜0.01);正常对照组比其余各组大鼠治疗后体质量变化显著(P＜0.05);模型对照组和炙马钱子中剂量组干预后体质量变化值显著高于阳性药物对照组(P＜0.01).结论:炙马钱子可能通过降低EAMG大鼠血清中AChRab含量,调节血清中TGF-β 1水平维持机体免疫激活与免疫抑制的动态平衡,从而来减轻对突触后膜AchR的损害,一定剂量范围内的炙马钱子在改善EAMG体质量、调节免疫功能等方面表现更佳.
关键词： 炙马钱子 重症肌无力 实验性自生免疫性重症肌无力 AChRab TGF-β1 -
AChRα211的分泌表达及其对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用
目的在毕赤酵母(P. pastoris)中分泌表达AChRα211,研究其对重症肌无力患者血清中AChRAb的清除作用. 方法以质粒pUC-AChRα211为模板,PCR扩增人AChRα211 DNA 片段,插入真核表达载体pPIC9K中.重组质粒转入P. pastoris GS115后,经甲醇诱导分泌表达AChRα211,用Sepharose Q离子交换柱和Superdex 75分子排阻层析进行纯化.Western blot 和ELISA进行免疫活性分析后,将目的蛋白偶联于CNBr-Sepharose 4B树脂上,研究该免疫吸附剂对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用. 结果双酶切鉴定和序列分析表明,AChRα211 DNA片段已正确插入到pPIC9K载体中.重组菌P. pastoris GS115/pPIC9K-AChRα211经甲醇诱导可分泌表达目的蛋白AChRα211,经阴离子交换柱和分子排阻层析可得95%纯AChRα211,并制备成免疫吸附剂.Western blot 和ELISA分析表明,重组蛋白具有与天然AChRα亚基相似的免疫活性.免疫吸附实验表明该重组蛋白可特异性地去除肌无力患者血清中的AChRAb. 结论在P. pastoris中分泌表达并纯化重组蛋白AChRα211,制备成一种新的免疫吸附剂AChRα211-Sepharose,可清除肌无力患者血清中的AChRAb.
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血浆置换术抢救重症肌无力危象7例临床观察
重症肌无力危象(mvasthenic crisis,MC)是指重症肌无力(mvasthenic gravis,MG)患者血清中抗乙酰胆碱受体抗体(AchRAb)明显升高,封闭或破坏神经肌肉接头突触后膜上的乙酰胆碱受体,影响信息传递从而导致肌无力.临床上常见的是引起呼吸肌无力,患者一旦出现呼吸麻痹常危及生命.在MG患者中并发MC达15%～20%[1,2].目前本病在临床上尚无特效药物治疗.自2004年7月至2011年2月我们应用血浆置换术治疗7例MC患者获得成功,报告如下.
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全血灌流免疫吸附治疗被动转移型实验性自身免疫性重症肌无力的研究
目的 观察全血灌流免疫吸附治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的疗效.方法 用重症肌无力患者血清中的免疫球蛋白(IgG)建立急性EAMG模型,并进行全血灌流免疫吸附治疗,观察其疗效.结果 以球形纤维素为载体色氨酸为配基的吸附剂治疗2h,能清除49.85%±2.55%的致病抗体,肌无力症状显著改善;重复神经电刺激实验CMAP衰减率从21.875±3.226(3Hz)、22.250±2.815(5Hz)和24.375±1.685(10Hz)恢复到17.875±1.642(P<0.05)、18.750±1.388(P<0.05)和23.250±1.388;单纤维肌电图示MCD值也从23.125±2.997(3Hz)、26.375±4.172(5Hz)和30.375±4.470(10Hz)显著性地缩短至19.250±1.488(P<0.05)、21.750±2.375(P<0.05)和26.125±2.031(P<0.05)MEPP波幅(μV)也从30.54±3.74显著增加至40.43±3.45(P<0.01),频率(次/s)从17.18±2.87显著增加至18.74±2.75(P<0.01);单位面积的神经肌肉接头数从9.825±3.401增加至10.900±2.879(P<0.05).结论 全血灌流免疫吸附治疗能有效清除被动转移型重症肌无力动物体内致病抗体,并相应改善临床症状,提高神经肌肉电传导功能,增加神经肌肉接头处nAChR数量,为临床重症肌无力的血液净化治疗提供了新措施.
关键词： 重症肌无力 全血灌流免疫吸附治疗 AChRab 神经肌肉传递 神经肌肉接头 -
自拟黄芪葛根汤治疗实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的免疫机制研究
目的:探讨自拟黄芪葛根汤治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠的免疫学机制.方法:选取50只健康SPF级8周龄的雌性Lewis大鼠,随机将8只设为正常组,剩余造模成功的32只EAMG大鼠随机分为模型组,阳性药物组和自拟黄芪葛根汤组.自拟黄芪葛根汤组给予含黄芪量为16.2mg·kg-1·d-1的中药灌胃,阳性药物组给予强的松5.4mg·kg-1·d-1灌胃,正常组同模型组给予等量生理盐水灌胃.治疗4周后观察大鼠的肌无力症状,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中AChRab、IL-6的含量.结果:阳性药物组和自拟黄芪葛根汤组肌无力症状与模型组相比明显减轻(P<0.05);阳性药物组和自拟黄芪葛根汤组AChRab含量与模型组比较均明显降低(P<0.05);与自拟黄芪葛根汤组相比,阳性药物组降低的更明显(P<0.05);阳性药物组和自拟黄芪葛根汤组IL-6的含量与模型组相比明显降低(P<0.05),但阳性药物组低于正常组(P<0.05);自拟黄芪葛根组IL-6的含量与正常组相当,两者比较无差异(P>0.05).结论:自拟黄芪葛根汤能明显改善EAMG大鼠的肌无力症状,自拟黄芪葛根汤和强的松均能降低EAMG大鼠血清中AChRab、IL-6的水平,但两者作用机制机理不同,强的松是通过广泛的免疫抑制来达到治疗作用,自拟黄芪葛根汤通过调节体内紊乱的免疫系统功能逐渐恢复正常而发挥作用.
