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定量检测肝细胞生成素Cn的双抗体夹心ELISA检测方法的建立
目的 建立定量检测肝细胞生成素Cn (HPPCn)的双抗体夹心ELISA方法.方法 利用杂交瘤方法获得8个抗HPPCn单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western印迹对纯化抗体特性进行鉴定.利用镀金芯片法对8个抗体进行配对检测.通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的适工作浓度.以纯化的HPPCn抗原为标准品建立标准曲线.结果 得到了8株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株,分别为Ab 65-29-6,Ab_3-3-3,Ab_9-34-1,Ab_4-8-12,Ab_7-8-10,Ab_2-30-23,Ab_1 1-11-12和Ab_12-27-23.8个抗体均能够特异结合HPPCn抗原,其中Ab_65-29-6与细胞中HPPCn结合的特异性好.经抗体配对检测证实佳配对组合为:Ab_2-30-23和Ab_4-8-12.包被抗体Ab_2-30-23和识别抗体Ab 4-8-12的适工作浓度为2.5 μg/ml,适稀释度为1∶2000,标准曲线检测的线性范围为5.0~60 ng/ml.结论 制备了可特异性检测人HPPCn蛋白的单克隆抗体,并建立了一种可用于定量检测人HPPCn的双抗体夹心ELISA方法.
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脑梗死患者S100B蛋白检测的临床意义
脑梗死是临床常见的脑血管疾病,有较高的发病率和病死率,目前主要依靠影像学检查诊断,不能在急性期区别脑梗死是否可逆,临床神经功能检查也不能判断神经症状持续的时间.血液中的S100B蛋白升高可作为中枢神经系统损伤比较特异和敏感的标志物.我们采用抗S100B蛋白单克隆抗体为包被抗体,抗S100多克隆抗体为检测抗体的双抗体夹心(ELISA)法,检测45例脑梗死患者和32例对照者血清S100B蛋白水平,探讨S100B蛋白在脑梗死患者血清的动态变化和临床意义.
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二步夹心ELISA分析中"HD-HOOK"效应的抗体铰链区变构假说
二步夹心ELISA分析是将待测抗原与固相包被抗体反应,洗涤去除未结合成分,然后加入标记抗体与被捕捉的抗原结合,其反应信号通常正比于抗原浓度,当抗原超过一定量时,使固相包被抗体呈饱和结合状态,其剂量反应曲线呈平台状延伸.1974年Miles等[1]在二步夹心ELISA法测定铁蛋白的实验中发现,当抗原浓度达到或超过某一高值时,反应信号呈现降低态势,即二步夹心ELISA分析中"HD-HOOK"效应.
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ACS180PlUS化学发光免疫分析仪故障分析及处理方法
化学发光法是近些年来发展起来的一种先进的检测技术,具有快速、准确、特异性强、灵敏度高、无放射性污染等优点.ACS180是美国Bayer公司生产的化学发光免疫分析仪.它是采用吖啶酯作标记的化学发光分析,它根据吖啶骆在有过氧化氢的弱碱溶液中即可迅速发光的原理,再用类均相的包被抗体的磁性微粒,扩大反应面,加速免疫反应[1].笔者在使用过程中,经过近一年来的摸索和研究,总结积累了一些工作经验和一些常见报警分析及处理的方法,介绍给大家供广大同行参考.