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酶标荧光-97检测中性粒细胞碱性磷酸酶活性的新方法
目的 用一种新试剂酶标荧光-97(ELF-97)检测人血中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)活性,观察NAP阳性细胞数及阳性颗粒形态和分布.方法 用Ficoll为介质的等密度沉降分离法从全血中分离出中性粒细胞,固定后以ELF-97为底物进行酶细胞化学反应,荧光/微分干涉相差显微镜观察并摄片.结果 荧光显微镜下可见中性粒细胞内有明亮的黄绿色荧光颗粒,颗粒在细胞内的分布均匀,大小不一,51例健康成人血样NAP阳性率为(94.102±3.133)%.结论 ELF-97荧光检测法操作简便,灵敏度高,产物不容易扩散,重复性好,结果精确,可作为不同用途的碱性磷酸酶检测手段.
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实验性肝癌周淋巴结淋巴细胞酶超微结构定位
以DEN与AFB1诱发大鼠肝癌为模型,应用电镜酶细胞化学方法对癌周淋巴结淋巴细胞酶定位并与正常组对比酶活性变化.结果显示:(1)ATP酶反应颗粒主要定位在质膜的内侧,G-6-P酶反应颗粒定位在内质网及线粒体等膜相结构,5′-ND反应颗粒定位在细胞膜外表面.(2)肝癌模型组ATP酶与G-6-P酶活性明显下降,5′-ND活性明显增强.(3)此结果与人肝癌癌周淋巴结淋巴细胞酶超微结构定位及活性变化结果相同.结果提示:实验性肝癌周淋巴结淋巴细胞酶活性变化可作为研究肝癌免疫功能的客观指标.
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胃癌康对SGC-7901人胃癌细胞株酶活性影响的研究
目的:通过胃癌康方对人胃癌细胞株酶活性影响,探讨该药作用机制.方法:以人胃腺癌细胞株SGC-7901为受试对象,利用血清药理学和酶细胞化学染色法,观察胃癌康对SGC-7901人胃腺癌细胞株Mg2+-ATP酶和G-6-P酶的活性影响.结果:(1)Mg2+-ATP酶与G-6-P酶在细胞株内定位准确.(2)中药组,Mg2+-ATP酶和G-6-P酶的酶反应颗粒变小,数量减少,活性下降,明显低于对照组(P＜0.01).结论:胃癌康降低胃癌细胞株Mg2+-ATP酶和G-6-P酶的活性可能是体现其抗肿瘤作用机理之一.
关键词： 胃癌康 SGC-7901人胃癌细胞株 酶细胞化学 -
益肠泰对人大肠癌细胞株CCL229细胞增殖和酶活性的抑制作用
目的 研究中药复方益肠泰对人大肠癌细胞株CCL229 Mg2+-ATP酶,G-6-P酶活性的影响,探讨其抑制大肠癌细胞增殖的抗癌机制.方法 采用血清药理学方法,制备药物血清.应用MTT法测定细胞增殖抑制率,通过酶细胞化学方法观察Mg2+-ATP酶,G-6-P酶活性的变化.结果 药物血清作用CCL299细胞株24 h,中药小剂量组未见明显抑制作用,其余各组均表现出不同程度的抑制作用,中药大剂量组抑制率达54.78%.药物血清作用CCL299细胞株48 h,中药小剂量组出现抑制作用,各药物血清组随着作用时间的延长抑制更明显,中药大剂量组抑制率达65.60%,抑制效应呈时间依赖性.药物血清作用48h,Mg2+-ATP酶、G-6-P酶活性明显受到抑制.结论 益肠泰具有抑制人大肠癌细胞株增殖的作用,降低Mg2+-ATP酶,G-6-P酶的活性是益肠泰抑制大肠癌细胞增殖的重要抗癌机制之一.
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人胚胎骨髓间充质干细胞的初步培养及鉴定
目的分离培养并鉴定人胚胎骨髓间充质干细胞。方法抽取流产胎儿股骨骨髓，梯度离心，取含有骨髓间充质干细胞的低密度血小板层进行培养；免疫细胞化学法鉴定细胞膜抗原；酶细胞化学法测定细胞碱性磷酸酶活性。结果培养的细胞呈现纺锤形外观；细胞膜抗原 CD29、 CD44有阳性表达， CD34、 CD45呈阴性表达；碱性磷酸酶检测呈阴性反应。结论培养的细胞不是骨髓中的造血干细胞，是处于未分化阶段的骨髓间充质干细胞。
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肝癌患者外周血淋巴细胞酶超微结构定位与活性研究
目的探讨肝癌患者外周血淋巴细胞酶超微结构定位与活性.方法采用电镜酶细胞化学技术对39例肝癌患者外周血淋巴细胞-三磷酸腺苷酶(Mg2+-ATPase)与葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)进行酶的定位与活性研究.结果 (1)Mg2+-ATPase 与G-6-Pase在淋巴细胞内的定位准确;(2)两种酶的阳性率在肝癌患者组明显低于正常对照组(P＜0.01);(3)两种酶的阳性率在低分化癌组明显低于高分化癌组(P＜0.01);(4)在淋巴结转移组明显低于无转移组(P＜0.01,P＜0.05).结论应用电镜酶细胞化学方法检测肝癌患者外周血淋巴细胞酶活性变化可作为判定肿瘤生物学行为的重要指标.
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慢性氟中毒大鼠中缝大核硫胺素焦磷酸酶细胞化学研究
目的探讨慢性氟中毒对大鼠中缝大核酶活性的影响.方法饮用高氟水(100 mg/L)复制雄性大鼠慢性氟中毒模型.对中缝大核神经元硫胺素焦磷酸酶(TPPase)进行定性、定量分析.结果氟中毒大鼠中缝大核神经元内TPPase染色浅于对照组,定量分析TPPase活性下降.电镜观察氟中毒大鼠神经元内TPPase颗粒减少,同时出现超微结构改变.结论高氟可抑制TPPase酶的活性,对中枢神经系统有直接损害作用.
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免疫酶细胞化学技术
免疫酶细胞化学技术,是免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)中常用的方法之一.与抗体特异性反应结合下,借助于酶细胞化学的手段来检测组织工程化构建组织细胞内抗原.上世纪60年代初Nakane、Pierce Avrameas和Uriel等成功地把辣根过氧化物酶(Horseradish-peroxidase,HRP)标记在抗体分子上.从而开创了酶标抗体的新技术.
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益肺饮对A549人肺癌细胞株酶活性的实验研究
[目的]研究益肺饮对A549人肺癌细胞株酶活性的作用机制,为中药复方临床应用提供可靠的实验依据.[方法]利用血清药理学方法,制备益肺饮中药组,西药顺铂组,对照组大鼠血清,加入RPMI1640培养液后对A549人肺癌细胞株施加处理48h,观察A549人肺癌细胞株酶活性改变.[结果]中药益肺饮与顺铂组的细胞质膜标志酶Mg-ATPase阳性细胞百分比分别为58.5%和64.5%,内质网标志酶G-6-Pase活性阳性细胞百分数分别为65.5%和73.0%,提示酶活性明显下降.[结论]益肺饮具有降低A549人肺癌细胞MgATPase、G-6-Pase活性的作用.
关键词： 益肺饮 A549人肺癌细胞株 酶细胞化学 酶活性 实验研究 -
齿龈内阿米巴的超微结构与溶酶体酶细胞化学研究
目的研究齿龈内阿米巴的细胞器与功能,探讨虫体与宿主细胞的关系.方法用透射电镜结合电镜酶细胞化学技术观察虫体细胞超微结构;将虫体与口腔上皮细胞孵育,观察虫体对上皮细胞的粘附.结果虫体及其伪足呈多形态;胞质内细胞器主要为泡状和管状的溶酶体、一些滑面内质网,以及丰富的糖原颗粒;溶酶体标志酶CMPase显示溶酶体酶丰富;可见虫体粘附于上皮细胞表面和小伪足伸入上皮细胞微绒毛间.结论虫体的溶酶体水解酶消化作用及虫体伪足的机械作用对宿主牙周上皮组织的损伤,是虫体的致病机制之一.
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阴道毛滴虫的研究概况
随着现代科学技术的发展,科研设备及方法的更新,对阴道毛滴虫(Tv)的研究也越来越完善,特别是超微结构、酶细胞化学、染色体分析、流式细胞学分析、免疫诊断的探索及杀虫新药的拓展等方面,都取得了较大的进展.
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人骨髓间充质干细胞的培养及性质鉴定
目的分离培养并鉴定人胚胎骨髓间充质干细胞.方法抽取流产胎儿股骨骨髓,梯度离心,取含有骨髓间充质干细胞的低密度血小板层进行培养;免疫细胞化学法鉴定细胞膜抗原和细胞基质中的蛋白属性;酶细胞化学法测定细胞碱性磷酸酶活性.结果培养的细胞呈现纺锤形外观;细胞膜抗原PDGFR、CD29、CD44有阳性表达,IGF-1R、CD34、CD45呈阴性表达,细胞基质中纤维粘连蛋白、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ有表达,而胶原蛋白Ⅱ和层粘蛋白没有表达;碱性磷酸酶检测呈阴性反应.结论培养的细胞不是骨髓中的造血干细胞或骨髓基质中的成纤维细胞,是处于未分化阶段的骨髓间充质干细胞.
