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精液毛滴虫病致男性不育1例
滴虫病(trichomoniasis)是由阴道毛滴虫引起的一种男性或女性生殖道感染性疾病,临床主要以引起女性滴虫性阴道炎症为常见,男性感染者较少[1],因而主动就诊者更少,引起男性不育者则更是罕见报道.本文近诊治1例精液滴虫感染并致不育的患者,结合文献复习后报告如下.
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黄芩苷、黄连素体外杀灭阴道毛滴虫的实验研究
目的探讨黄芩苷、黄连素在体外对阴道毛滴虫(TV)的杀灭作用.方法采用微量倍比稀释法分别测定黄芩苷、黄连素对6株TV临床虫株的低致死浓度(MLC),并以甲硝唑作对比.结果黄芩苷、黄连素对6株TV临床虫株的MLC范围分别为0.1 25～0.5 mg/mL和0.25～1.0 mg/mL,MLC均数分别为0.229、0.417mg/mL,经统计学处理,两者的差异具有显著性(t=2.666,P＜0.05);甲硝唑对6株TV临床虫株的MLC范围为10～40μg/mL,MLC均数为25μg/mL.结论黄芩苷、黄连素、甲硝唑在体外对TV均有明显的抑制和杀灭作用.
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一个新的阴道毛滴虫Ras同源cDNA克隆的分离及其特征分析
Ras超家族是由一群具有保守氨基酸基序的GTP结合蛋白组成,作为双向分子开关对细胞的多种功能具有调节重要的作用.本文报告分离得到一个新的阴道毛滴虫Ras cDNA克隆,命名为RvRaxC.TvRasC cDNA编码一个194氨基酸的蛋白,与其它Ras亚家族成员蛋白序列的一致性在46%到52%之间.序列分析表明,该蛋白序列拥有Ras亚家族保守的结合GTP结构域.进化树分析发现该基因与人类的Rit基因位于同一亚群.由于Rit家族成员不含有CAAX异戊烯化基序,而TvRasC在羧基末端有一个典型的CAAX异戊烯化基序,因此TvRasC不属于Rit家族成员.在TvRasC的效应结构域内,与位于HRas第33位的天冬氨酸对应的氨基酸残基是天冬酰胺,有研究表明这种变化将大大削弱Ras基因家族与下游效应分子Raf的结合能力.因此我们预测TvRasC可能只有低水平的GTP酶活性,这种替换有可能使Raf失去与Ras结合域相互作用,并可能导致有活性有丝分裂蛋白激酶没有刺激效应.有关TvRasC在寄生性阴道毛滴虫原虫中的作用有待进一步研究.
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阴道毛滴虫LAG1基因启动子区克隆及分析
本研究旨在克隆并分析阴道毛滴虫LAG1基因启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控提供实验资料.预测启动子所在区域,用PCR技术扩增启动子区序列,并分别克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic及增强型绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1,用脂质体介导的方法瞬时转染EC109细胞,然后测定荧光素酶表达活性及观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果表明在构建的6种荧光素酶报告基因表达体系及2种增强型绿色荧光蛋白报告基因表达体系中,表达载体pGL3-455(-455～+55 bp)、pGL3-417(-417～+55 bp)、pGL3-280(-280～+55 bp)、pGL3-202(-202～+55 bp)、pGt3-81(-81～+55 bp)的荧光素酶表达活性相近,均明显高于表达载体pGL347(-47～+55 bp)荧光素酶表达活性,而pGL3-47表达载体荧光素酶表达活性极低,与阴性对照活性相近,提示-47～+55 bp区无启动子活性.绿色荧光蛋白的表达情况也类似,pEGFP-81(-81～+55 bp)有明显的绿色荧光蛋白表达,而pEGFP-47(-47～+55 bp)和空载体pEGFP-1未见表达.因此-81～-47 bp区域含有阴道毛滴虫LAG1基因转录所必需的基本启动子序列.
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坤泰洗剂体外抗阴道毛滴虫的效果
探讨坤泰洗剂体外抗阴道毛滴虫的作用.体外培养阴道毛滴虫,选择坤泰洗剂进行体外抗阴道毛滴虫实验,坤泰洗液浓度经倍比稀释分别为1:1、1:2、1:4、1:8、1:16,同时以甲硝唑、 洁尔阴洗液为阳性对照,RPMI-1640为阴性对照.实验表明坤泰洗剂在24 h时杀死阴道毛滴虫的低稀释倍数为1:8,其杀虫效果与甲硝唑无统计学差异;但对阴道毛滴虫的抑制作用强于洁尔阴洗液,可见坤泰洗剂在体外具有显著的抑制阴道毛滴虫的作用.
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阴道毛滴虫黏附蛋白ap33基因克隆及其表达
通过提取取道毛滴虫mRNA,逆转录合成cDNA,PCR取到预期长度片段后,将其克隆到pUCm-T载体中进行PCR、酶切及测序分析,并与GeneBank中核酸序列进行同源性分析.再将其克隆至表达载体PET-32a.重组子用酶切、PCR和测序鉴定后,转化大肠杆菌并以异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.从阴道毛滴虫临床分离株中扩增出927bp的ap33的基因片段,构建重组质粒PET-32a(+)-ap33;EPTG诱导后,SDS-PAGE显示表达产物的大小约50kDa.
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活性氧清除剂 NAC 抑制阴道毛滴虫排泄分泌物诱导的 SiHa 细胞凋亡
本研究旨在探讨活性氧（ ROS）清除剂N－乙酰－L－半胱氨酸（ NAC）能否抑制滴虫排泄分泌物（ Tv ESP）诱导的人子宫颈癌SiHa细胞凋亡。体外培养阴道毛滴虫并制备Tv ESP，分别用100μg／mL Tv ESP和PBS处理SiHa细胞， Tv ESP处理SiHa细胞30 min前加入NAC，进行预处理。使用CellTiter 96 AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒检测细胞存活率；利用2′，7′－二氯荧光黄双乙酸盐（ DCFH－DA）进行荧光探针标记测定胞内ROS水平；免疫印迹法检测cleaved caspase－3和PARP－1蛋白表达。结果显示， NAC预处理可降低Tv ESP的细胞毒性作用。 Tv ESP作用SiHa细胞16 h后，细胞内ROS水平升高，但经过NAC预处理后胞内ROS生成显著降低。此外， NAC预处理后能显著下调Tv ESP诱导的cleaved caspase－3和cleaved PARP－1的表达水平。
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阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆和序列分析
Rab鸟苷三磷酸酶是细胞膜转运机制的关键调节分子,与原虫的分泌功能密切相关.本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因,以便进一步探讨其功能.作者从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离出2个Rab6鸟苷三磷酸酶同源基因的cDNA克隆,其中1个cDNA序列长658对碱基,读码框含597对碱基,推测蛋白质序列具198个氨基酸.序列分析表明该氨基酸序列与Rab6a蛋白亚家族的同源性高.另一cDNA序列长764对碱基,读码框含657对碱基,推测蛋白质序列具218个氨基酸.序列比对分析显示该氨基酸序列与Rab6b蛋白有较高的同源性.2个氨基酸序列都拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域、特异性RabF结构域和典型的异戊烯化结构域.进化树分析提示毛滴虫的这2个基因系Rab6家族的同源基因,在进化上更接近原虫和单细胞的酵母Rab6亚家族.序列分析还显示这2个基因都无内含子,其基因组DNA序列与其cDNA序列完全一致.
关键词： 阴道毛滴虫 Rab6鸟苷三磷酸酶 基因克隆 -
应用抑制性消减杂交在阴道毛滴虫筛选热卡限制相关差异表达基因
热卡限制能使众多实验动物的寿命延长,而且它是唯一延缓哺乳动物衰老的途径.我们用原生动物阴道毛滴虫建立了热卡限制模型.在此研究体系中,该原生动物细胞周期在热卡限制的培养条件下较糖充足的培养条件下延长80%.本研究运用抑制性消减杂交的方法,以期筛选在两种培养条件下差异表达的基因,并从2个cDNA消减杂交文库中分离到15个克隆.经序列分析表明,有9个未知基因,6个已知基因.
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原生动物阴道毛滴虫的酵酶长寿保障基因LAG1同源基因克隆和序列分析
为了探讨寄生性原虫阴道毛滴虫细胞生长和衰老相关基因,作者从阴道毛滴虫的cDNA表达文库中分离出一具910碱基对的cDNA克隆,其编码框长834 bp,推测蛋白质序列有277个氨基酸.序列分析显示该克隆与酵酶长寿保障基因LAG1同源性高,其氨基酸序列中含有LAG1及其同源基因保守的Lag1结构域和TLC结构域以及6个跨膜螺旋区和一个C-未端的内质网保留信号域.因此推测该克隆系酵酶LAG1的同源基因,该基因可能参与阴道毛滴虫的神经酰胺生物合成以及调解细胞的生命期或细胞衰老.该基因的基因组DNA与其cDNA序列一致,提示该基因序列中可能无内含子.
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红枣牛肉汤与肝浸液培养阴道滴虫比较
用自制红枣牛肉汤培养基培养疑似滴虫性阴道炎患者阴道拭子标本30份,与传统肝浸液培养基做对照.结果阴道毛滴虫在红枣牛肉汤培养基的阳性率较肝浸液培养基高,差异有统计学意义(P<0.05).结果表明改良后的红枣牛肉汤培养基更适合于临床试验室中阴道滴虫的培养.
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阴道毛滴虫双链RNA病毒感染及其对甲硝唑耐药性的影响
目的 调查河南地区阴道毛滴虫临床分离株阴道毛滴虫病毒感染情况,探索病毒感染对阴道毛滴虫甲硝唑耐药性的影响.方法 TYM(trypticase-yeast extract-maltose)无菌培养基培养阴道毛滴虫临床分离株,达到纯培养后提取虫体总核酸(DNA和RNA),进行1％琼脂糖凝胶电泳分析；连续稀释法测量每株虫体的甲硝唑小致死浓度.结果 对30株阴道毛滴虫总核酸进行电泳,其中6株有5.5 kb双链RNA病毒带,病毒感染率为20.0％.阴道毛滴虫病毒阴性组甲硝唑小致死浓度为( 24.27±20.899)μg/ml,病毒阳性组为(5.68±3.588)μg/ml,差异有统计学意义(t=2.143,P＜0.05).结论 河南地区阴道毛滴虫临床分离株中检测到阴道毛滴虫病毒,无阴道毛滴虫病毒寄生的虫体易发生甲硝唑抵抗.
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双氢青蒿素对阴道毛滴虫微丝作用的观察
目的探讨双氢青蒿素对阴道毛滴虫的杀伤效果及作用机制. 方法用含双氢青蒿素的肝浸汤培养基培养阴道毛滴虫,观察药物对滴虫的杀灭效果;用激光共聚焦显微镜观察双氢青蒿素作用前后滴虫微丝的变化. 结果随药物作用时间延长和药物浓度增加,阴道毛滴虫死亡率增高.同一时间随着药物浓度的增高,虫体死亡率升高(P< 0.01).作用6 h,双氢青蒿素0.6 mg/ml虫体死亡率是20%,而1.0 mg/ml时高达85%;同一药物浓度随着作用时间延长,滴虫死亡率也升高(P<0.05),药物0.8 mg/ml时,6 h、8 h、10 h、12 h和14 h死亡率分别是43%、68%、86%、97%和100%.药物作用后滴虫微丝排列疏松,有空隙生成.排列杂乱无序. 结论双氢青蒿素可作用于滴虫微丝结构,破坏微丝,具有较强的杀滴虫作用.
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阴道毛滴虫在两种培养基中的生长与形态观察
目的通过对改良肝浸汤培养液及RPMI1640培养基内阴道毛滴虫生长情况的观察,选择适合教学和科研的培养基.方法用临床分离的阴道毛滴虫标本,分别接种至改良肝浸液及RPMI1640两种培养基内进行培养,pH值为5.6～5.8,通过计数了解生长情况并观察阴道毛滴虫的形态.结果肝浸汤培养液中培养48 h,阴道毛滴虫达到生长高峰,虫体呈现出多分裂相,虫体变大、呈圆形,内含4～12个细胞核,细胞膜外缘可见数丛鞭毛.RPMI1640培养基中阴道毛滴虫72 h达到生长高峰,虫体密度约为肝浸液高峰期的2/3,未见多分裂现象,虫体与生理盐水涂片中阴道毛滴虫形态、大小相近.结论改良的肝浸液培养基适于阴道毛滴虫的药物试验及其他实验项目的研究,RPMI1640培养基更适用于教学、标本的制作及实验室保种工作.
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白头翁体外抗阴道毛滴虫透射电镜观察
目的探讨白头翁杀阴道毛滴虫作用机制. 方法用浓度1.25 mg/ml白头翁水提液进行体外抗滴虫实验,并用透射电镜观察白头翁作用后滴虫的超微结构变化.结果在药物作用下,滴虫粗面内质网排列紊乱、脱颗粒,核糖体解聚,虫体内空泡增多、变大.随着药物作用时间的延长,高尔基复合体肿胀变形,细胞核核质疏松,核膜不完整,终虫体破裂,内部结构不能分辨.结论白头翁具有较强的抗滴虫作用,可损伤虫体内部结构,多种细胞器受损.
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计算机图象分析系统测量阴道毛滴虫:形态学数据和参数的建立和分析
目的建立并分析阴道毛滴虫的形态学数据和参数. 方法用计算机图象分析系统得到阴道毛滴虫及核的长、宽、周长、长宽比、等效圆直径、圆度、面积、前鞭毛与后鞭毛、轴柱长度.计算滋养体和核的体积. 结果滋养体的大小为15.011 μm(9.222～21.796 μm)×12.058 μm(5.868～17.605 μm) .前鞭毛、后鞭毛和轴柱的长度分别18.27 μm、17.41 μm、21.94 μm.相关分析显示滋养体与核的面积(r=0.54,P<0.01)、滋养体与核体积(r=0.47,P<0.01)相关性有显著性意义,滋养体面积和核圆度呈负相关(r=-0.29,P<0.01),滋养体圆度和核圆度之间无相关性. 结论参数间的相关系数显示,随着滋养体增大,虫体的形态变圆,而核的形态变化不大.阴道毛滴虫形态学数据和参数的建立为量化及评价虫体的形态奠定了基础.
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乳酸杆菌对15种抗阴道毛滴虫中西药物敏感性测定
目的 研究乳酸杆菌对15种抗阴道毛滴虫中西药物的敏感性,寻求防治滴虫性阴道炎药物和微生态制剂的合理组合. 方法 12种中药原液(以原生药含量计1 g/ml)按倍比稀释法配制1∶2、1∶4、1∶8和1∶16浓度的含药MRS固体培养基,接种等量嗜酸乳杆菌,厌氧环境中培养48 h后观察结果.以纸片扩散法测试嗜酸乳杆菌对3种西药的敏感性. 结果 在大黄和乌梅药液浓度为0.5 g/ml的琼脂培养基中,仍可见嗜酸乳杆菌菌落生成,但菌落较空白对照组明显细小;在其他中药培养基嗜酸乳杆菌生长良好,菌落形态与空白对照组相似.用甲硝唑、替硝唑和吡喹酮作药敏试验,含药纸片周围均未出现抑菌环. 结论 所选中西药对嗜酸乳杆菌生长无明显抑制作用.
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阴道毛滴虫琥珀酰辅酶A合成酶基因的克隆与序列分析
目的 获取阴道毛滴虫琥珀酰辅酶A合成酶(α-SCSB)全基因,并对其进行序列分析. 方法 利用PCR技术扩增阴道毛滴虫琥珀酰辅酶A合成酶(α-SCSB)全基因,并将其插入pMD18-T载体,酶切鉴定后进行序列测定及分析. 结果 PCR扩增获得α-SCSB全长基因,大小为1 381 bp,与国外发表的阴道毛滴虫琥珀酰辅酶A合成酶(α-SCSB)的基因同源性为100%. 结论 本研究获得了阴道毛滴虫琥珀酰辅酶A合成酶(α-SCSB)启动子,为下一步研究α-SCSB启动子的功能及构建阴道毛滴虫DNA稳定转染载体奠定了基础.
关键词： 阴道毛滴虫 琥珀酰辅酶A合成酶基因 α-SCSB转染载体 -
阴道毛滴虫对甲硝唑的耐药性分析
目的 研究阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalisvirus)对甲硝唑的耐药性,探索共生人型支原体对其耐药性的影响. 方法 由医院提供阴道毛滴虫样品,对其进行体外培养,达到纯培养后提取虫株核酸,进行扩增及测序;制备浓度梯度板,测定甲硝唑对阴道毛滴虫的小致死浓度(minimum lethallon centration,MLC),并将人型支原体进行序列分析和清除后再测定DNA及MLC,并作前后比较. 结果 甲硝唑对34株阴道毛滴虫MLC范围为1～300 μg/ml,其中敏感性较高的共有21株,9株敏感性略低,4株敏感性低;在人型支原体共生与甲硝唑MLC关系测定中,12株扩增出特异性产物(长度大小约为530 bp),阳性率为35.3％. DNA检测阳性的12株阴道毛滴虫中,甲硝唑MLC在1～25μg/ml、50～70 μg/ml和100～300 μg/ml范围内的虫株共生率分别为14.3％、66.7％和75.0％.当MLC在300 μg/ml时,有2个虫株呈现人型支原体共生现象,显示人型支原体共生状态与甲硝唑MLC之间存在一定的关联性;清除人型支原体后的甲硝唑MLC测定中,加入多西环素并对虫株进行传代培养.当传至3代后进行检测,12株阳性虫株中仅有7株未再检出人型支原体DNA,其中甲硝唑敏感株的4株MLC无变化,对甲硝唑耐药的3株ML C略有降低,但仍维持在较高水平. 结论 甲硝唑MLC不同的阴道毛滴虫虫株人型支原体的共生情况也不同.对甲硝唑耐药性越强的虫株人型支原体检出率越高,甲硝唑MLC为300μg/ml的虫株均查出人型支原体,表明阴道毛滴虫对甲硝唑的耐药性与人型支原体共生现象可能存在一定关系.
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阴道毛滴虫与人型支原体共生对AP33基因序列的影响
目的 研究河南地区阴道毛滴虫临床分离株与人型支原体共生情况,并观察其共生对阴道毛滴虫AP33基因序列的影响. 方法 应用人型支原体及AP33基因的特异性引物对41株阴道毛滴虫临床分离株进行PCR扩增,扩增产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测,对AP33基因扩增产物测序,测序结果与GenBank已知序列比对,绘制进化树.结果 有34株阴道毛滴虫扩增出人型支原体的特异性片段,大小为334 bp;所有虫株均扩增出 AP33基因特异性片段,碱基序列相似性为96.8％～99.3％,有多个位点发生突变.进化树分析提示人型支原体的共生对AP33基因序列有一定影响. 结论 河南地区阴道毛滴虫临床分离株与人型支原体共生具有普遍性,其共生对阴道毛滴虫的基因序列有一定影响.
