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阴道毛滴虫双链RNA病毒感染及其对甲硝唑耐药性的影响
目的 调查河南地区阴道毛滴虫临床分离株阴道毛滴虫病毒感染情况,探索病毒感染对阴道毛滴虫甲硝唑耐药性的影响.方法 TYM(trypticase-yeast extract-maltose)无菌培养基培养阴道毛滴虫临床分离株,达到纯培养后提取虫体总核酸(DNA和RNA),进行1％琼脂糖凝胶电泳分析；连续稀释法测量每株虫体的甲硝唑小致死浓度.结果 对30株阴道毛滴虫总核酸进行电泳,其中6株有5.5 kb双链RNA病毒带,病毒感染率为20.0％.阴道毛滴虫病毒阴性组甲硝唑小致死浓度为( 24.27±20.899)μg/ml,病毒阳性组为(5.68±3.588)μg/ml,差异有统计学意义(t=2.143,P＜0.05).结论 河南地区阴道毛滴虫临床分离株中检测到阴道毛滴虫病毒,无阴道毛滴虫病毒寄生的虫体易发生甲硝唑抵抗.
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阴道毛滴虫病毒介导的EGFP在阴道毛滴虫细胞内的表达
目的 研究阴道毛滴虫病毒(Trichomonas vaginalis virus,TVV)介导外源基因进入阴道毛滴虫体内表达的能力,探索TVV作为双链RNA病毒转染载体的可能性.方法 根据TVV基因组的序列特征,用绿色荧光蛋白(EG-FP)编码基因替换TVV的全部或部分基因编码区,构建TVV与增强型EGFP编码基因的嵌合体pTVV-EGFP,其体外转录体经电穿孔方法转染携病毒阴道毛滴虫株,RT-PCR及SDS-PAGE方法检测EGFP的表达情况.结果 电穿孔转染后培养的虫体在荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,且续传15代后仍然存在;RT-PCR检测到EGFP的mRNA,SDS-PAGE检测到转染后虫体及培养上清中有分子质量单位为27 ku的蛋白,与已知EGFP的分子质量相符.结论 TVV能成功介导外源性EGFP编码基因在阴道毛滴虫体内表达.
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阴道毛滴虫病毒对虫体基因多态性的影响
目的 分析阴道毛滴虫病毒对阴道毛滴虫临床分离株基因多态性的影响. 方法 用MGE-PCR扩增阴道毛滴虫病毒阳性株和病毒阴性株Tvmar1基因位置,应用软件MEGA 5.0构建系统进化树. 结果 阴道毛滴虫临床分离株之间的遗传差异明显,6株阴道毛滴虫病毒阳性株之间的遗传距离较近,分布在同一分支上. 结论 阴道毛滴虫病毒会对阴道毛滴虫的基因多态性产生影响.
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阴道毛滴虫病毒研究进展
阴道毛滴虫病毒是专性寄生于阴道毛滴虫体内的一种寄生性原虫病毒,阴道毛滴虫病毒的发现为研究其细胞分子生物学特性提供了新的思路和工具.本文综述了近年来对阴道毛滴虫病毒的研究进展.
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阴道毛滴虫病毒RDRP基因的克隆与分析
目的 对阴道毛滴虫病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因的克隆,以便探讨其功能.方法 提取阴道毛滴虫总核酸为模板,根据所克隆的阴道毛滴虫病毒部分序列和GenBank中发表的阴道毛滴虫病毒TVV-T1序列设计一对引物,经RT-PCR得到与预计大小一致的PCR特异性产物,将其克隆到pMD-18T载体后测序,并与GenBank中核苷酸序列进行同源性搜索与分析.结果 目的 基因片段长度为2 271bp,与阴道毛滴虫病毒T1株(U08999)的同源性高为85.2%.结论 国内首次成功克隆出阴道毛滴虫病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因序列.
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阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因cap2037的克隆与表达
目的 对阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因的克隆与原核表达.方法 提取阴道毛滴虫总核酸为模板,根据所克隆的阴道毛滴虫病毒部分序列和GenBank中发表的阴道毛滴虫病毒TvV-T1序列设计一对引物,经RT-PCR得到与预计大小一致的PCR特异性产物,将其克隆到pMD-18T载体后测序,并与GenBank中核苷酸序列进行同源性搜索与分析,再将其克隆至表达载体pET28a.并以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果 目的基因片段长度为2 037bp,与阴道毛滴虫病毒T1株(U08999)的同源性高为82.9%,构建原核表达载体pET-Cap2037;IPTG诱导后,SDS-PAGE显示表达产物的大小约75kDa.结论 成功克隆出阴道毛滴虫病毒衣壳蛋白基因序列,与TVV-T1株序列有82.9%的同源性,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明,75kDa蛋白基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达.
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妇科门诊患者阴道毛滴虫及其病毒感染情况分析
目的 了解妇科门诊患者阴道毛滴虫(trichomonas vaginalis,TV)及阴道毛滴虫病毒(trichomonas vaginalis virus,TVV)感染情况及感染因素.方法 对就诊于遵义医学院附属医院妇科门诊的3321例患者进行调查,通过形态学及分子生物学方法鉴定TV及TVV感染情况,使用X2检验对检出率和感染因素进行统计分析.结果 3321例患者中TV阳性数为76例,检出率为2.29％.30～39岁患者检出率高,达4.16％(39/937);不同职业中农民组检出率高,达3.60％(34/945);有良好卫生习惯的女性检出率较低.TV在培养基中生长良好,未筛选出TVV.结论 TV感染率相对较低,感染以中年期女性居多,与职业、个人卫生习惯等密切相关.在体外成功培养出TV,但未找到携病毒株.
