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TGF-β1和smad4mRNA在慢性肝炎、肝硬化、肝癌癌旁组织的表达及意义
目的:转化生长因子TGF-β1信号转导通路具有重要的细胞调节功能,包括细胞的生长、分化、黏附、转移、细胞外基质的形成及免疫调节等.通过检测慢性病毒性肝炎、肝硬化、肝癌癌旁病理组织TGF-β1和smad4mRNA的表达,探讨TGF-β/smad通路在肝纤维化形成、发展中的关系及作用机制.方法:应用免疫组化和原位杂交方法,对照肝组织10例,肝癌癌旁肝组织17例,慢性病毒性肝炎肝硬化肝穿组织70例的TGF-β1蛋白和smad4mRNA表达进行检测.结果:TGF-β1和smad4mRNA在慢性病毒性肝炎中度及肝硬化组织中的表达明显增强,阳性率分别为83.3%,87.0%和87.5%,87.0%,明显高于对照组(20.0%,20.0%),差异均有显著性(b3P<0.01,X2=12.3 980;t4P<0.01,X2=14.0 609;和b1p<0.01,X2=14.6 953;b2P<0.01,X2=14.0 609);而癌旁肝组织二者的表达均低下,与对照组无明显差异;随着肝纤维化的发展TGF-β1和smad4mRNA的表达呈逐渐增强趋势,S3期达高峰,S4期有所回落;二者表达呈正相关(X2=4.5 064,P=0.0 336,r=0.2 668);肝组织病理可见TGF-β1和smad4mRNA的阳性细胞在肝组织切片上的分布基本一致,大多集中于汇管区、肝窦及纤维条索周边.结论:TGF-β/smsd信号传导通路在肝纤维化的形成和发展中具有重要的促进作用,TGF-β1和smad4mRNA的组织定位检测能准确的评价肝纤维化形成状况及发展趋势.
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正常与硬化肝组织基因表达差异的初步分析
目的:了解肝硬化的基因表达概况,寻找在肝硬化及正常肝组织中差异表达基因.方法:以各24例肝硬化及正常肝组织的总RNA混合定量后反转录合成含有α-32P dATP的cDNA为探针,与Atlas微阵列表达分析膜杂交.结果:放射自显影结果经AtlasImageTM软件分析显示:在所分析的588种已知基因中,Integrin beta 7、collagen type XVⅢ等17个基因在肝硬化组织中表达上调,TFDP2、BAK、ABL等98个表达下调,参与细胞增生、凋亡、分化、细胞间相互作用、与细胞侵袭相关的基因表达水平发生了明显改变.结论:通过Atlas微阵列系统分析发现的这些基因的表达改变组成了一个肝硬化特异的基因表达谱.系统地研究肝硬化的基因表达改变,与肝硬化发生相关基因的差异变化可为肝硬化诊断和治疗提供线索.
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基因芯片筛选肝硬化相关基因
目的:应用基因芯片技术研究肝硬化相关基因的基因表达谱.方法:乙肝肝硬化组织为实验组,以正常肝组织为对照.按一步法抽提实验组和对照组标本的总RNA并纯化mRNA;将等量的实验组和对照组标本mRNA分别逆转录合成荧光分子掺入的cDNA做探针,混合后杂交1 568点BioDoorChipLiver-16S芯片.经严格洗片后用ScanArray3000扫描仪扫描芯片获取荧光信号图像,计算机分析后比较两种组织中差异表达的基因.结果:在1 568种基因中,肝硬化组织与正常肝组织间存在差异表达的基因.所检测的3例临床标本中,2例共有的差异表达基因66-76条(4.2-4.8%),3例共有的差异表达基因28条(1.8%).其中包含有与细胞外基质降解相关的基因,与细胞生长因子有关的基因,与信号传导有关的基因等.结论:应用基因芯片技术筛选肝硬化相关基因有助于阐明肝硬化发展机制.
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HCV核心蛋白、P53、Mdm2、P21 waf1在HCV肝炎、肝硬化中的表达及意义
目的:调查HCV肝炎、肝硬化组织核心蛋白、突变P53、Mdm2、P21waf1的表达以及他们间的相关性,探讨HCV核心蛋白对突变P53、Mdm2、P21waf1的表达作用及意义.方法:收集HCV表达阳性的肝炎、肝硬化组织23例,采用免疫组织化学EnVision法检测HCV感染的肝炎、肝硬化组织中核心蛋白、突变P53、Mdm2、P21waf1的表达,用统计学方法及临床联系分析他们之间的关系.结果:核心蛋白、突变P53、Mdm2、P21waf1的阳性表达主要定位于细胞核中;核心蛋白阳性表达的组织中突变P53、Mdm2、P21waf1阳性率分别为87%、91.3%、13.0%;四组间的Kruskal-Wallis检验P=0.000,差异有显著性意义,核心蛋白与P53、P21waf1间的Mann-Whitney U秩和检验P值分别为0.041、0.000;HCV-c蛋白与突变P53、Mdm2、p21waf1阳性强度二者间相关性Pearson检验P值分别为0.011、0.067、0.2,相关系数rp分别为0.71、0.493、0.45.结论:HCV核心蛋白可能促进P53突变,同时间接促进Mdm2并共同抑制了P21waf1表达;核心蛋白、突变P53、Mdm2的共同作用可促进肝细胞增生、非典型性增生.
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纺锤体组装关卡基因hsMAD2在人肝细胞肝癌中的表达及其意义
目的:探讨人原发性肝细胞肝癌中纺锤体组装关卡hsMAD2蛋白的表达及其意义.方法:采用免疫组织化学SABC法检测了hsMAD2在39例HCC组织、26例肝硬化组织和3例HCC细胞系的表达情况,并分析了其阳性率与HCC病理分级的关系.结果:59%(23/39)的HCC组织表达hsMAD2,而癌旁肝组织的阳性率为100%(15/15);肝硬化为92%(24/26),3例HCC细胞系均未见表达.hsMAD2在HCC中表达率与HCC病理分级无关,而在癌组织与癌旁肝组织(χ2=6.888,P<0.01)、肝硬化组织(χ2=8.656,P<0.01)之间的差异具有显著性.结论:hsMAD2在HCC组织中的表达率相对于癌旁肝组织和肝硬化组织显著降低,提示该蛋白的表达可能与早期HCC发生相关.
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肝硬化和肝癌肝组织Survivin基因表达与增生的关系
目的:了解Survivin基因表达与肝硬化细胞增生活性的关系,探讨测定Survivin基因和增生细胞核抗原(PCNA)在肝硬化患者中发现肝癌高危人群的意义.方法:以RNA提取试剂获得新鲜肝癌及肝硬化组织RNA,应用RT-PCR法测定Survivin基因mRNA;应用抗-PCNA单克隆抗体,以SP免疫组织化学方法测定肝硬化和肝癌组织中的PCNA.结果:测定21例肝硬化组织,Survivin表达全部阴性,l 7例肝癌组织,Survivin基因阳性11例,阳性率为64.7%.11例Survivin阳性肝癌组织PCNA阳性计数平均值为6.8(0.5-40),显著高于6例Survivin阴性肝癌组织2.15(0.5-3.0).而21例肝硬化组织和5例正常肝组织对照PCNA计分分别为2.47和1.56.以5例正常肝组织PCNA阳性细胞计数的2倍(3.12)作为细胞高增生活性标准,测定30例肝硬化组织,有6例处于高增生状态,其平均PCNA计数为5.05±2.61,细胞增生活性介于其余肝硬化组织和肝癌组织之间.结论:Survivin基因仅在肝癌组织表达,其表达具有高度肿瘤选择性肝癌细胞增生活性较肝硬化明显升高,其升高程度与Survivin基因的表达有关,增生活性越高该基因的表达阳性率越高.PCNA可以很方便的用于肝硬化组织细胞增生活性的评价,在确定肝硬化人群肝癌发生高危患者方面PCNA的测定优于Survivin基因的测定.
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肝细胞癌和癌周肝硬化组织中VEGF不同表达的比较
1998年EL-Assal等[1]发现VEGF在癌周肝硬化组织中的表达明显高于肝癌组织和非肝硬化组织,指出肝硬化组织中的肝细胞长期处于机械性的血流减少的环境中,组织中氧压力的降低强烈刺激VEGF的产生,得出结论:VEGF引起的血管发生是在肝硬化组织中而非肝癌组织中.我们在对肝细胞癌组织切片进行免疫组化的实验过程中也发现了同样的现象,因此想通过本研究进一步证实VEGF在肝硬化组织中表达较肝细胞癌组织中明显.
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caveolin-1与内皮型一氧化氮合成酶在人肝硬化组织中表达的相关性研究
小凹(caveolae)为一新近发现的定位于细胞质膜上的膜结构,可从细胞质膜上脱落下来形成囊泡,通过其主要结构蛋白小凹蛋白(caveolin-1)与多种信号分子相结合形成复合物,调节信号分子的"激活"与"失活"状态,进而调控细胞跨膜信号转导.我们通过比较caveolin-1和内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)在肝硬化组织和正常肝组织的蛋白表达水平变化,探讨在肝硬化门静脉高压症发病中caveolin-1表达对eNOS的影响.
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人肝癌组织中p16基因及p16蛋白表达缺失的研究
抑癌基因的缺失和变异在肿瘤的发生和发展中起着十分重要的作用.p16基因,又称MTS1(mu ltiple tumor suppresor 1)或CDK4I(cyclin dependent kinase 4 inhibitor),位于人染色体9p21,编码Mr16 000蛋白即p16蛋白.现已证实,p16基因的变异及p16蛋白表达的缺失涉及许多肿瘤的发生和发展[1,2].本研究用PCR法及免疫化学技术检测人肝癌和肝硬化组织中p16基因缺失和p16蛋白的表达情况,现报告如下.
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凋亡抑制蛋白Livin在肝癌组织中的表达及其临床意义
Livin蛋白是2001年由Kasof等报道的凋亡抑制蛋白(IAPs)家族的一个新成员,含有IAPs家族成员所特有的BIR和RING锌指结构域.本研究主要收集了48例原发性肝癌组织、20例肝硬化组织、12例外伤性肝破裂正常肝组织标本,采用免疫组织化学技术[链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法)]和图像分析技术,检测Livin蛋白在肝癌组织中的表达情况,并探讨其表达与肝癌某些临床特征之间的关系.
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浅谈提高肝脏组织制片质量的体会
肝脏组织以肝实质细胞成分为主,间质细胞数量较少,表面被覆致密结缔组织被膜,肝硬化组织有假小叶形成,肝脏实质细胞与纤维化组织同时存在,增加了组织处理及制片的难度,组织处理不当会引起脆性增加,石蜡切片很容易碎,做出的苏木素-伊红(HE)切片组织裂隙增多,破坏组织结构的完整性,并易出现蜡屑污染现象.笔者在实践中不断摸索,通过合理设置脱水程序及在切片环节使用加湿器等改进措施,取得了良好的效果,现介绍如下.
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巨噬细胞移动抑制因子在乙型肝炎肝硬化形成中的可能作用
巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)是含115个氨基酸的蛋白质,相对分子质量为12500,活化的T淋巴细胞、垂体前叶及外周单核巨噬细胞(MΦ)是其主要来源.研究发现各器官组织细胞也分泌少量MIF,并且MIF是许多免疫性和炎性疾病的重要介质,参与多种疾病的病理损伤过程.本研究利用免疫组化和原位杂交技术检测慢性乙型肝炎及肝炎肝硬化组织中MIF的表达,探讨MIF在乙型肝炎肝硬化演变过程中的作用.
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凋亡抑制蛋白Survivin在肝癌中的表达及其与临床特征的关系
Survivin是近年发现的凋亡抑制蛋白家族(IAPs)中的一个成员,主要通过抑制caspase级联反应下游共同通路的caspase-3,7发挥其抗凋亡作用[1,2].Survivin在多种肿瘤组织中均有表达,我们采用免疫组织化学技术检测Survivin 在肝癌和肝硬化组织中的表达,并探讨其表达与临床特征的关系.
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肝癌和肝硬化组织中凋亡信号蛋白的表达
凋亡信号蛋白表达异常,往往会影响肝细胞凋亡,从而引起肝癌.众所周知:肝硬化同肝癌关系密切.我们采用Western blot免疫印迹法检测凋亡信号蛋白:Fas相关死亡区域蛋白(FADD)、肿瘤坏死因子受体相关死亡区域蛋白(TRADD)、FasL、Fas和核因子-κB(NF-κB)在肝癌(HCC)和肝硬化(LC)组织中的表达,探讨它们的表达同HCC和LC的关系.
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KAI1基因在肝硬化和肝细胞癌组织中的表达及其意义
目的 研究转移抑制基因KAI1在肝硬化和肝细胞癌组织中的表达及该 基因与肝细胞癌患者临床资料间的关系. 方法 采用Northern blot方法研 究20例肝细胞癌组织、14例肝硬化组织和10例正常肝组织中KAI1基因mRNA的表达水平,经 mRNA的定量分析及统计处理判定KAI1基因与肝细胞癌患者临床特征的关系. 结果 肝硬化和肝细胞癌组织中KAI1 mRNA表达水平(0.113±0.110; 0.139±0.078)显著低于 正常肝组织中的表达(0.316±0.121), (P=0.0003; P=0.0000); 肝硬化和肝细胞癌 组织中KAI1基因mRNA的表达无显著差异(P=0.4152);KAI1 mRNA在不同分化程度的肝细胞 癌组织中的表达无显著差异(P=0.8261),而Ⅲ期肝细胞癌组织中的KAI1基因表达显著低 于Ⅱ期的肝细胞癌组织(P=0.0221). 结论 转移抑制基因KAI1在肝硬 化阶段亦有低表达;肝癌组织中KAI1基因的低表达与肝癌的转移有关.
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肝硬化组织转化生长因子β-1(TGFβ-1)的表达及临床意义
肝硬化是绝大多数慢性肝脏疾病终末期表现,肝硬化时纤维结缔组织的形成,是各种不同致病因子导致细胞外基质(ECM)合成与降解的失衡所致.在此过程中多种细胞因子参与了这个过程,其中组织转化生长因子β-1(TGFβ-1)起到了相当重要的作用,参与了肝硬化的发生发展过程.因此TGFβ-1与肝硬化关系的研究越来越受到关注.我们采用免疫组织化学技术对肝硬化活检肝组织进行了TGFβ-1蛋白的检测,以进一步探讨TGFβ-1在肝硬化组织中的表达情况及意义.