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肿瘤坏死因子-α及一氧化氮对暴发性肝衰竭肝损伤的作用
目的:研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)及一氧化氮(nitric oxide,NO)在暴发性肝衰竭(fulminant hepatic failure,FHF)中对肝损伤的作用及相互关系.方法:采用脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)构建FHF小鼠模型,采用ELtSA方法和RT-PCR法检测血清TNF-α水平及肝组织TNF-αmRNA表达,采用硝酸还原酶法和RT-PCR法检测血清NO水平及肝组织iNOSmRNA,在小鼠用药后不同时期动态观察TNF-α、NO及肝损伤的变化,并对模型鼠分别给予TNF-α单抗和NO合成酶抑制剂L-NMMA,动态观察上述指标的变化.结果:在FHF小鼠中,用药后2～4h肝组织TNF-αmRNA表达显著增加(0.91±0.75→0.82±0.08,P＜O.01),伴血清TNF-α水平升高,给予TNF-α单抗后可阻断LPSD-GalN介导的肝损伤,用药后4～8 h肝组织iNOSmRNA表达及血清NO水平亦显著升高(0.87±0.08→0.85±0.08,P＜0.01),给予L-NMMA后使肝损伤反而加重.FHF小鼠用药后8～12 h血清总胆红素(TBiL)和ALT明显异常,肝组织切片可见肝组织大块状出血和坏死.结论:在LPS/D-GalN所致的FHF中,TNF-α的产生与肝损伤成正相关,而NO在此模型中似有保肝和肝损伤的双重作用,TNF-α和NO在FHF模型鼠的肝损伤中起协同作用.
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TGF-β1和smad4mRNA在慢性肝炎、肝硬化、肝癌癌旁组织的表达及意义
目的:转化生长因子TGF-β1信号转导通路具有重要的细胞调节功能,包括细胞的生长、分化、黏附、转移、细胞外基质的形成及免疫调节等.通过检测慢性病毒性肝炎、肝硬化、肝癌癌旁病理组织TGF-β1和smad4mRNA的表达,探讨TGF-β/smad通路在肝纤维化形成、发展中的关系及作用机制.方法:应用免疫组化和原位杂交方法,对照肝组织10例,肝癌癌旁肝组织17例,慢性病毒性肝炎肝硬化肝穿组织70例的TGF-β1蛋白和smad4mRNA表达进行检测.结果:TGF-β1和smad4mRNA在慢性病毒性肝炎中度及肝硬化组织中的表达明显增强,阳性率分别为83.3%,87.0%和87.5%,87.0%,明显高于对照组(20.0%,20.0%),差异均有显著性(b3P＜0.01,X2=12.3 980;t4P＜0.01,X2=14.0 609;和b1p＜0.01,X2=14.6 953;b2P＜0.01,X2=14.0 609);而癌旁肝组织二者的表达均低下,与对照组无明显差异;随着肝纤维化的发展TGF-β1和smad4mRNA的表达呈逐渐增强趋势,S3期达高峰,S4期有所回落;二者表达呈正相关(X2=4.5 064,P=0.0 336,r=0.2 668);肝组织病理可见TGF-β1和smad4mRNA的阳性细胞在肝组织切片上的分布基本一致,大多集中于汇管区、肝窦及纤维条索周边.结论:TGF-β/smsd信号传导通路在肝纤维化的形成和发展中具有重要的促进作用,TGF-β1和smad4mRNA的组织定位检测能准确的评价肝纤维化形成状况及发展趋势.
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大鼠肝卵圆细胞的生物学特征
目的:观察大鼠肝卵圆细胞的形态学参数、细胞表型及分化演变等生物学特征.方法:建立大鼠肝卵圆细胞增生模型,在肝组织切片上对大鼠肝卵圆细胞进行细胞图像分析及免疫组化染色.结果:肝卵圆细胞体积小、外形及胞核为椭圆形;胞质对细胞角蛋白(CK)19,OV6,甲胎蛋白(AFP)及波形蛋白染色呈阳性,对白细胞共同抗原(LCA)染色呈阴性,胞核对增生细胞核抗原(PCNA)染色呈阳性;在汇管区外周部位可见肝细胞样细胞,CKl9及OV6染色呈阳性.结论:肝卵圆细胞在形态学上明显不同于肝细胞,同时具有胆管细胞及肝细胞的表型;肝细胞样细胞为肝卵圆细胞向肝细胞演变的中间过渡细胞.
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落射式荧光显微镜在系统性红斑狼疮实验室诊断中的应用
自1957年Friou等首先将间接免疫荧光技术用于检测抗核抗体(ANA)以来[1],ANA检测已成为系统性红斑狼疮(SLE)实验室诊断指标之一.目前,随着抗核基质的改进及荧光显微镜技术的提高,ANA核型分辨率均有所提高,本文就我们应用落射式荧光显微镜对HEp-2、灵长类肝组织切片及绿蝇短膜虫为实验基质对ANA及抗双链DNA(dsDNA)抗体检测结果报告如下.
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Dubin-Johnson综合征误诊为血色病一例
患者女,28岁,因反复出现乏力,黄疸5年于1998年6月20日入院.1992年开始患者因劳累、感冒、妊娠、腹泻等诱因反复出现乏力、黄疸,伴轻度食欲减退.无黄疸及乙肝家族史.查体:除皮肤巩膜中度黄染、轻度贫血貌外,未见异常.肝功:总胆红素(TBi)110μmol/L直接胆红素(DBi)65μmol/L,ALT 20u/L、AST 19u/L、TBA 20μmol/L.血常规WBC 4.7×109/L、RBC 3.5×1012/L、Hb 90g/L、PLT 110×109/L、HAV、HBV、HCV、HEV、HGV血清标志物均阴性.为明确诊断行肝穿刺,所取肝组织呈黑褐色.病理报告见肝细胞内存在较多黑褐色颗粒,疑为含铁血黄素,诊断为血色病.后检查患者血糖、血清铁蛋白、转铁蛋白饱和度均为正常.肝组织切片进行铁染色阴性.口服法胆囊造影发现胆囊不显影.后诊断为Dubin-Johnson综合征.
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云南山区崀峨乡有钉螺无血吸虫病区的研究
据不完全统计，我国存在有钉螺孳生而无血吸虫病流行(简称有螺无病)地区分布于10省、市、自治区的88个县(市)，约735个乡(镇)，而我省有7个县18个村[1]。为证实永胜县峨乡是否存在有螺无病现象，并分析其形成原因，本文于1996年对峨乡血吸虫病流行的病情、螺情等方面进行了系统调查，现将研究结果报告如下。1 方法1.1 人群病情调查1.1.1 调查对象峨乡4～60岁人群共965人。1.1.2 抗原的制备采用云南日本血吸虫尾蚴感染成功后的家兔肝脏，按常规方法，制备石蜡包埋福尔马林固定含有大量血吸虫卵肉芽肿肝组织切片，做成厚6μm的石蜡切片，存于4℃冰箱备用。1.1.3 诊断血清羊抗人IgG荧光抗体购自上海生物制品研究所。其工作浓度为1：8，批号为960201。1.1.4 受检血清从调查对象的耳垂或手指采血制成两个滤纸干血滴(每个血滴直径1cm)，凉干后置于4℃冰箱备用。IFAT法：按[2]进行。1.1.5 粪便检查对IFAT法检测阳性者，按常规粪便检查法进行。1.2 保虫宿主感染情况调查对峨血吸血病保虫宿主的粪便进行孵化(顶管孵化法)。其中包括马9匹，黄牛8头、水牛28头、猪88头、骡14头、驴13头、羊四群。1.3 螺情调查1.3.1 1996年8月通过系统抽样和环境抽样方法对峨钉螺分布情况进行调查。依据螺点分布理论[3]，共调查145个条(块)，18169.5m2。1.3.2 对捕获的钉螺进行解剖和逸螺，以检查有无血吸虫感染。
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银杏叶提取物对大鼠高脂性脂肪肝的实验观察
目的 通过对大鼠高脂酒精脂肪肝的肝组织学观察及血清学检测,为银杏叶提取物防治脂肪肝提供科学的理论依据.方法 用高脂饲料加低浓度酒精喂食SD雄性大鼠复制成脂肪肝模型.分为6组：正常组：普通饲料+生理盐水；模型组：高脂饲料+38%酒精；阳性药物对照组：高脂饲料+38%酒精+绞股蓝总苷胶囊；治疗组：高脂饲料+38%酒精+银杏叶片(高,中,低剂量).结果 6周后观察肝组织病理切片及清学指标,可见肝组织及胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶等各组治疗后均与模型组有差别(P＜0.05),与正常对照组无差别(P＞0.05)；银杏叶高、中、低剂量组间比较无差别(P＞0.05).结论 通过建立符合人们饮食习惯的脂肪肝模型,说明银杏叶提取物治疗脂肪肝效果好.
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体外肝代谢系统的研究与应用
肝药酶在药物代谢中具有十分重要的作用.对肝药酶的研究方法 中,以动物肝脏或肝细胞为基础,构建体外肝代谢系统是体外代谢研究中重要的环节之一.对体外肝代谢的研究,主要是利用肝微粒体、基因重组CYP450酶系、肝细胞培养、肝组织切片及离体肝灌流系统等方法 .本文综述近年国内外所应用的不同体外肝代谢系统,并对各体外代谢研究方法 进行比较,指出根据各系统的特性、不同的实验要求和目的 ,选择适当的研究方法 的重要性.
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大鼠肝硬化消退中局部一氧化氮水平的动态变化
一氧化氮（NO）在门静脉高压以及肝病的损伤过程的作用受到重视。本实验目的在于了解肝硬化消退中肝组织NO水平的变化。 1. 材料与方法：大鼠肝硬化模型以CCl4加乙醇法制备,共12周。第12、16、19、22、25周各取5～6只行病理检查及NO测定。肝组织切片按照Knodell和国际肝病协会推荐的慢性肝炎诊断标准、王宝恩等的肝纤维化分级标准分别进行组织炎症活动性和纤维化评分。肝组织NO测定应用南京建成公司试剂盒。NO与组织学改变的相互关系应用相关分析,相关系数的显著性差异应用t检验。
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中药复方对大鼠酒精性肝损伤防护作用的实验研究
近年来国内对酒精性肝损伤的研究已逐渐重视,虽然取得了一定的成绩,但至今对其发病机制仅是初步认识,许多理论问题有待进一步研究,尤其是近年来倍受关注的细胞因子,自由基损害等在发病机制中的作用有待进一步阐明.在治疗方面目前还是以戒酒、营养支持为主,其他试用药物均不理想,未有突破性进展,故我们拟用中药复方研究出一套防治有效的方法来,以造福人类.本文就中药复方对酒精性肝损伤的防治作用进行了实验研究.本实验通过对大白鼠灌胃白酒、橄榄油、吡唑混合液的方法,建立动物模型;在建立模型的同时,灌胃中药来防治酒精性肝损伤.实验证明中药复方对防治酒精性肝损伤具有良好的作用,为中药防治酒精性肝损伤提供了客观依据.选用雄性大白鼠30只,随机均分三组(正常组,损伤组,防治组),连续灌胃四周后处死,立即采血和取肝组织.结果:形态学观察:光镜:防治组与正常组相似,肝板以中央静脉为中心向周围呈放射状整齐排列,肝细胞呈多边形,体积较大,细胞分界清晰,核圆而大,位于细胞中央,胞质丰富.损伤组:肝细胞呈气球样变,胞质内广泛出现大小不一的圆形脂肪滴呈空泡样结构,有的可出现嗜酸性的酒精小体,但不具有必然性,汇管区炎细胞浸润明显.电镜:防治组与正常组差别不大,核大而规则,含丰富细胞器及包含物.胞质内几乎看不到或存有少量脂滴.损伤组 :细胞核不规则,细胞质疏松,含有大量脂滴,细胞器减少明显.生化指标;实验结果显示中药可以阻止ALT活性的升高,损伤组ALT升高明显.具有明显抑制白酒降低大鼠全血GSH-PX活性作用.在损伤组可观察到SOD活性减少和MDA含量的增加而防治组SOD活性增加和MDA的含量减少,以上指标防治组与损伤组均有显著性差异.(P ＜0.01)说明该中药对酒精性肝损伤具有保护作用.肝组织切片的胶原纤维测定:防治组肝胶元纤维含量高,说明肝纤维化明显,与防治组差异显著.线粒体面积、光密度测定:通过电镜可以观察到损伤组线粒体面积增大和光密度增加,与防治组有明显差别.- 这些指标充分显示了该中药对酒精性肝损伤具有良好的保护作用.
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肝脏毒理学研究中的体外试验模型
外源性化合物致肝损伤是毒理学研究中的重要组成部分,传统的体内试验在研究外源性化合物致肝损伤时存在一些不足之处,体外试验在一定程度上弥补了体内试验的缺陷.肝脏毒理学研究中常用的体外试验模型有离体肝脏灌流、肝组织切片和离体肝细胞(肝细胞悬液和原代培养肝细胞)等.离体肝脏灌流接近体内状态,可用于评价肝脏生理学和形态学改变;肝组织切片保存了肝脏的组织结构,可将细胞毒性检测和组织形态学结合评价肝损伤情况;离体肝细胞则从细胞水平评价化合物代谢和细胞毒性.上述体外试验模型各自具有优缺点,应根据研究目的和具体条件选择适当的模型,并与体内试验结果结合进行评价.
