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人食管癌细胞核基质的研究
目的研究人食管癌细胞株EC1和EC18的核基质形态及蛋白成分. 方法应用细胞的选择性抽提、DGD包埋-去包埋剂电镜制样观察核基质形态,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向电泳和免疫印迹等分析核基质蛋白成分. 结果抽提后,两种细胞内均存在精细的核基质-核纤层-中间丝网架.低分化的EC1细胞核基质较高分化的EC18更细密.核基质蛋白电泳显示,两株细胞有数种相同的核基质蛋白成分,也有各自的特异性核基质蛋白.在免疫印迹分析中,使用抗人NuMA单克隆抗体检测到两株食管癌细胞中都存在NuMA蛋白. 结论在食管癌细胞中,存在特异的核基质蛋白,核基质-核纤层-中间丝形成一个连续的体系,对维持细胞核的完整性和细胞功能起重要作用.
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人参皂甙Rgl组合对人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中核基质构型与蛋白质组成的影响
目的 研究中药有效成分人参皂甙Rgl、肉桂酸CINN及丹参酮TanⅡ A的组合(简称RCT),诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中,细胞核基质构型与蛋白质组成的变化.方法 应用流式细胞仪检测细胞周期变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,以选择性抽提整装光镜与电镜技术及蛋白质组学技术分析观察处理前后MG-63细胞核基质构型与蛋白质组成的变化.结果 生长曲线显示,RCT处理后MG-63细胞的增殖受到明显抑制,增殖抑制率在第7天达到72.37%,细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞.MG-63细胞核基质为典型的肿瘤细胞恶性表型,在RCT处理后发生了向正常细胞转变的恢复性变化.RCT处理后的细胞中多种核基质功能蛋白的表达发生了变化.结论 RCT能显著抑制体外培养MG-63细胞的增殖活动,将细胞周期阻滞于G0/G1期,诱导核基质构型发生了显著的恢复性变化,并改变核基质蛋白的组成,对MG-63细胞具有显著的分化诱导作用.
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Prohibitin在姜黄素诱导人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中的调控机制
目的 探讨姜黄素(curcumin)诱导成骨肉瘤细胞凋亡前后,Prohibitin(PHB)蛋白的定位与表达变化,及PHB与凋亡相关基因产物的共定位关系.方法 选择性抽提经姜黄素诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白,以蛋白质组学、免疫印迹法和激光扫描共焦显微技术对PHB在核基质中存在、分布及其与凋亡相关基因产物在MG-63细胞中的共定位关系进行了研究.结果 双向凝胶电泳、质谱鉴定和免疫印迹法结果显示,PHB存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,细胞凋亡后在细胞核基质蛋白中表达下调.免疫荧光显微镜观察显示,PHB定位于MG-63细胞核基质纤维上,经姜黄素处理后出现分布位置与表达水平的变化.激光扫描共焦显微镜观察结果显示,PHB在MG-63细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2、Fas、P53、c-Myc和Rb等基因产物具有共定位关系,且共定位区域发生了变化.结论 PHB是一种核基质结合蛋白;PHB在MG-63细胞凋亡过程中的表达与分布变化,及其与细胞凋亡相关基因的共定位关系,对MG-63细胞凋亡具有重要影响.
关键词： Prohibitin 核基质 人成骨肉瘤MG-63细胞 姜黄素 免疫印迹法 -
姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡过程中核磷蛋白的表达与定位变化
目的 探讨核磷蛋白NPM在癌细胞诱导凋亡过程中在细胞内、细胞核基质上的定位与表达变化,以及NPM与凋亡调控相关蛋白的关系,探索其在凋亡调控中的作用.方法 在姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡的基础上,以亚细胞蛋白质组学方法分析NPM在核基质中的存在与变化,并以免疫印迹法杂交实验进行确证;激光扫描共焦显微镜观察NPM在EC9706细胞凋亡过程中的定位与变化,以及NPM与Bax、Bcl-2等基因产物的共定位关系. 结果 NPM存在于EC9706细胞核基质蛋白组分中,并在姜黄素处理后表达下调.NPM在EC9706细胞凋亡过程中发生显著的胞质-核之间的穿梭定位变化,并与Bax、Bcl-2等蛋白具有共定位关系,且共定位区域发生了变化.结论 NPM是一种核基质结合蛋白,在EC9706细胞凋亡中的表达与定位变化,及其与凋亡调控蛋白的共定位关系提示,它在EC9706细胞凋亡调控中具有重要作用.
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核基质蛋白与膀胱癌相关性的初步研究
目的:探讨膀胱移行细胞癌核基质蛋白(nuclear matrix proteins,NMPs)与膀胱移行细胞癌的相关性.方法:根据Wen等的方法改良制备膀胱移行细胞癌NMPs;NMPs免疫家兔获得抗血清,利用免疫吸附法及硫酸铵沉淀法纯化抗血清;Western blot及confocal分析膀胱移行细胞癌NMPs与其他对照组之间的差异性.结果:膀胱癌NMPs具有(20～40)×103及(60～90)×103两富集蛋白条带区域,与对照组比较差异明显;膀胱移行细胞癌中NMPs主要表达于细胞核、核膜及部分胞质,而对照组织无明显特异性表达,差异有显著意义.结论:膀胱移行细胞癌存在肿瘤相关的特异性NMPs,为开发基于尿液或血液的免疫检测方法提供了实验基础.
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转入EGFR cDNA对bcl-2及Bax在胶质母细胞瘤细胞内表达的影响
目的探讨bcl-2及Bax 蛋白与胶质母细胞瘤细胞系U87核基质的关系,以及导入EGFR cDNA对该蛋白在U87细胞内表达的影响.方法运用共振聚焦显微镜、Western杂交方法分析bcl-2、Bax蛋白与U87细胞核基质的相关性,以及将EGFR cDNA转入U87细胞后bcl-2及Bax表达的改变.结果 bcl-2位于细胞核基质的周边,Bax位于核基质内. 用Western杂交可在核基质蛋白内检测出一条26 000的bcl-2带及一条约66 000特异性Bax带.在EGFR cDNA转入的U87细胞中,Bax表达较对照组增强,而bcl-2的表达则较对照组减弱.结论 bcl-2及Bax蛋白是核基质相关蛋白. bcl-2及Bax基因可能参与EGFR cDNA所诱导的胶质母细胞瘤细胞的转化过程.
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富血小板血浆促进人牙髓细胞的体内矿化潜能
目的:检测富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)作为人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)组织工程学支架的生物相容性,并探讨PRP促进DPCs矿化的作用.方法:应用经典的两步离心法制取PRP;分离培养DPCs,并经细胞角蛋白、波形蛋白染色鉴定细胞来源.实验分为4组,将PRP和第4代DPCs复合激活后,植入8只5周龄雌性裸鼠背部皮下作为实验组,将单独植入DPCs或PRP做为对照组,将单纯手术组做为空白对照.分别于植入术后4周、8周处死动物,将生成物制成组织学切片进行HE染色和免疫组织化学染色.结果:植入4周、8周后,DPCs复合PRP组在裸鼠皮下均可见白色生成物,单独植入DPCs或PRP组未见生成物.DPCs复合PRP组HE染色可见矿化组织形成,免疫组织化学染色显示骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OC)和Ⅰ型胶原(COL Ⅰ)阳性表达.结论:富血小板血浆与人牙髓细胞有良好生物相容性,并对人牙髓细胞有诱导矿化作用,提示富血小板血浆可以作为盖髓治疗的支架应用.
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核基质对成骨细胞的调控作用
核基质蛋白及核基质结合蛋白在成骨细胞的增殖分化、信号转导以及凋亡等过程中均扮演着重要角色.本文概述了Nmp4/CIZ、Satb2、DNA TopoisomeraseⅡ等重要核基质蛋白在成骨细胞上述过程中的调控作用.
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模拟失重条件下成骨细胞核基质DNA拓扑异构酶Ⅱβ的改变
目的：研究模拟失重条件下DNA拓扑异构酶Ⅱβ蛋白表达与分布位置的改变，从而间接了解细胞核基质结构的改变。方法培养大鼠乳鼠颅骨原代成骨细胞并随机分为模拟失重组与对照组。以回转器建立细胞模拟失重模型，之后间接免疫荧光染色与Western blot法检测两组间细胞中DNA拓扑异构酶Ⅱβ的改变。结果与对照组相比，模拟失重组细胞DNA拓扑异构酶Ⅱβ免疫荧光强度降低且失去原有的均匀分布。Western blot检测发现，与对照组相比模拟失重组细胞DNA拓扑异构酶Ⅱβ表达显著降低(P＜0.05)。结论模拟失重可导致成骨细胞DNA拓扑异构酶Ⅱβ表达降低且分布位置不均，提示模拟失重下细胞核基质结构发生改变。
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SATB1基因与细胞凋亡的研究进展
SATB1是一种组织特异性表达的核基质序列特异性结合蛋白,参与染色质高级结构的形成和组织特异性基因的表达调控,在免疫调节、肿瘤转移和凋亡方面发挥着重要的作用.本研究就SATB1基因与细胞凋亡的研究进展作一综述.
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整体护理在尿路结石护理中的应用
尿路结石是常见的泌尿外科疾病之一.男性多于女性,约 4～5∶1.形成机制未完全阐明,有多种学说.复发率高.对多数结石尚无十分理想的预防方法.尿石症发病有地区性.在我国多见于长江以南.影响尿路结石形成的因素 许多因素影响尿路结石的形成.尿中形成结石晶体的盐类呈超饱和状态,尿中抑制晶体形成物质不足和核基质的存在,是形成结石的主要因素.北方相对少见.以上这些特点给护理人员在护理尿路结石病人时提出了更高的要求.下面结合实践谈谈笔者对尿路结石病人整体护理的几点体会.
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p16基因上游序列与急性白血病细胞核基质蛋白结合的实验研究
目的 探讨p16基因上游序列-869bp中是否含有核基质结合元件,并分析p16基因上游序列在急性白血病细胞组与对照组内与核基质蛋白结合的情况.方法 DNA-蛋白质杂交(Southwestern blot)技术.结果 p16基因上游序列与核基质蛋白的结合在急性白血病组与对照组间存在差异.结论 p16基因外显子1 α上游869bp片段可以与核基质蛋白结合,表明该片段存在MAR序列,对p16基因表达调控具有重要意义,急性白血病细胞核基质蛋白成分的改变影响其与p16基因外显子1α上游869bp片段MAR序列的结合,提示核基质蛋白成分的改变可能抑制P16基因的表达,促进急性白血病的发生.
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落射式荧光显微镜在系统性红斑狼疮实验室诊断中的应用
自1957年Friou等首先将间接免疫荧光技术用于检测抗核抗体(ANA)以来[1],ANA检测已成为系统性红斑狼疮(SLE)实验室诊断指标之一.目前,随着抗核基质的改进及荧光显微镜技术的提高,ANA核型分辨率均有所提高,本文就我们应用落射式荧光显微镜对HEp-2、灵长类肝组织切片及绿蝇短膜虫为实验基质对ANA及抗双链DNA(dsDNA)抗体检测结果报告如下.
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核基质与肿瘤研究进展
核基质又称核骨架,是指真核细胞的核外周核纤层蛋白、核孔复合物、内部核蛋白网络以及残余的核仁等核内网架结构.核基质与DNA的复制、RNA的转录与修饰及染色体的组装等许多重要生命活动相关.在多种肿瘤中相继发现肿瘤相关性核基质蛋白.本文将对核基质在肿瘤的发生、演进和转移中的作用,及其在肿瘤的诊断、治疗中的价值作一综述.
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细胞核基质研究进展
核基质是细胞核内一个精密的动态变化的蛋白网络结构,它不仅构成细胞核的支架结构,而且参与诸如DNA复制、基因表达调控、RNA加工装运等重要生命过程.核基质作为反式作用因子与MARs相互作用在各种层次上对基因表达进行调控,并通过许多途径参与细胞癌变过程.本文从核基质结构、DNA复制、基因调控、核基质与肿瘤和细胞凋亡的关系等方面进行综述.
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急性淋巴细胞白血病核基质蛋白理化特性及功能研究
目的了解急性淋巴细胞白血病细胞核基质蛋白与正常相应细胞的差异、化疗前后急性淋巴细胞核基质蛋白的影响、温度对核基质蛋白的影响以及部分核基质蛋白的等电点.方法用高盐法提取核基质蛋白,SDS-PAGE、2-D电泳分析核基质蛋白的变化.结果在分子量为60KD、65KD75KD处出现了正常相应细胞所没有的核基质蛋白,急性淋巴细胞白血病化疗后分子量为65KD、75KD的核基质蛋白消失,60KD、90KD处核基质蛋白减少,温度在42℃、30min时急性淋巴细胞白血病细胞核基质蛋白受破坏.结论急性淋巴细胞白血病与正常相应细胞相比有组分的改变,核基质蛋白是化疗药物的作用位点,核基质蛋白对温度敏感,分子量为60KD、65KD、75KD的核基质蛋白等电点分别是6.5,6.2,6.0.
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核基质蛋白在肿瘤诊断中的应用
核基质蛋白(Nuclear matrix protein, NMP)在染色质/体高级结构的构建、基因组复制、DNA损伤的修复和基因转录及其调控中起着重要作用.组织细胞不同,核基质蛋白成分有一定的差别.与正常细胞相比,肿瘤细胞中有特异性核基质蛋白成分存在[1].依据于此,可对肿瘤进行诊断和筛选.近年来,在人类基因组计划的推动下,与基因活动密切相关的核基质蛋白在肿瘤诊断中意义的研究格外受重视.其中主要在白血病和膀胱癌等方面取得了一些新的进展.对此本文将给予简要综述.
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白杨素和它的四乙基二磷酸酯对人宫颈癌 Hela细胞增殖和核基质蛋白影响的研究
探讨白杨素和它的四乙基二磷酸酯对人宫颈癌细胞的增殖、分化和核基质蛋白的影响.用终浓度为10μmol/L的白杨素(chrysin,CR)和四乙基白杨素二磷酸酯(tetraethyl bis-phosphoric ester of chrysin,CP)分别处理人人宫颈癌Hela细胞,记录细胞生长数目,进行增殖分化型细胞染色,测定软琼脂集落形成率,应用SDS-PAGE技术分析细胞核基质蛋白成分的变化.CR/CP能明显抑制Hela细胞的增殖,处理组与对照组之间差异有显著性(P＜0.05);处理组与对照组比较增殖型细胞减少,分化型细胞数增加,双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制,对照组集落普遍比药物组集落大,且单个集落中细胞数目多(P＜0.05);通过Quantity One软件分析,实验组(CR组与CP组)与对照组(C组)比较,相对分子质量70 000、68 000、13 000为增加的条带,14 000、17 000、18 000为增强的条带,58 000、43 000是减弱的条带.两实验组相比,以CP组变化显著.CR和CP对Hela细胞具有增殖抑制和诱导分化作用.同时还可以诱导Hela细胞核基质蛋白成分改变,这可能对肿瘤细胞基因表达调控、分化及凋亡起重要作用.
关键词： 白杨素 宫颈癌 诱导分化 核基质 四乙基白杨素二磷酸酯 -
核基质与肿瘤病毒
核基质对维持细胞核形态结构和功能非常重要,在DNA复制、转录,RNA加工转运等过程中起支持作用.细胞恶变以及肿瘤细胞由低度变成高度恶性的过程中,都会发生恶性转化.多少年来,关于恶性转化时细胞核形态及生化改变的分子机理一直未阐明,近这方面的研究取得了显著进展.现就恶性转化过程中,核基质与肿瘤病毒的关系,以及它自身所发生的生化变化作一阐述,这对探讨细胞恶性转化的分子机制有着重要的生物学意义.
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白血病细胞核基质蛋白的研究
目的研究白血病细胞核基质蛋白与正常骨髓细胞核基质蛋白的差异.方法应用高盐抽提法抽提细胞核基质蛋白,SDS-PAGE技术分析白血病细胞与正常骨髓细胞核基质蛋白的变化.结果与正常骨髓细胞相比,急性白血病细胞核基质蛋白成分明显增加,且出现多种正常骨髓细胞所没有的蛋白带;不同类型白血病细胞核基质蛋白存在差异.结论白血病细胞与正常骨髓细胞的核基质蛋白成分有明显差异,新出现的核基质蛋白改变可能与白血病的发生发展有关.
