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低氧环境下子宫内膜基质细胞增殖及Prohibitin表达
目的 观察常氧和低氧环境下子宫内膜基质细胞(ESCs)的增殖,探讨抗增殖蛋白prohibitin(PHB)在子宫内膜异位症(EMs)病理机制中的作用. 方法 10例正常内膜组织(正常对照组)和10例EMs患者在位内膜组织(在位内膜组)各分为两份,分别置于常氧(21% O2)与低氧(1% O2)环境中培养.运用BrdU方法检测细胞增殖,并以光密度值(OD)代表细胞的增殖能力;通过流式细胞技术检测细胞凋亡;细胞免疫荧光技术和蛋白质印记法(Western blot)检测细胞中PHB表达. 结果 在常氧环境,在位内膜组的OD值略高于正常对照组但无统计学差异(P＞0.05);而在低氧环境,在位内膜组的OD值[(1.400±0.659)]显著高于正常对照组[(0.590±0.021)](P＜0.001),且显著高于常氧环境的在位内膜OD值[(1.156±0.044)](P＜0.05).无论是常氧还是低氧环境,在位内膜组的细胞凋亡率均显著低于对照组[分别为(4.117±0.450)% vs.(7.247±0.707)%及(4.983±0.393)% vs.(9.867±0.675)%],差异均有统计学意义(P＜0.05).在常氧环境,在位内膜组ESCs的PHB表达[(0.747±0.026)]显著高于正常对照组[(0.590±0.021)](P＜0.05);在低氧环境,正常对照组和在位内膜组ESCs的PHB表达水平均较常氧环境的PHB表达水平降低[分别为(0.358±0.071)vs.(0.590±0.021)和(0.458±0.054) vs.(0.747±0.026)],且差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 正常子宫内膜组织表达PHB,EMs患者的在位内膜组织PHB表达升高;低氧环境下ESCs的PHB表达水平显著降低,可能与促进ESCs增殖、抑制ESCs凋亡相关,因此PHB在EMs病理机制中起重要作用.
关键词： 子宫内膜异位症 低氧 Prohibitin 细胞增殖 细胞凋亡 -
Prohibitin在姜黄素诱导人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中的调控机制
目的 探讨姜黄素(curcumin)诱导成骨肉瘤细胞凋亡前后,Prohibitin(PHB)蛋白的定位与表达变化,及PHB与凋亡相关基因产物的共定位关系.方法 选择性抽提经姜黄素诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白,以蛋白质组学、免疫印迹法和激光扫描共焦显微技术对PHB在核基质中存在、分布及其与凋亡相关基因产物在MG-63细胞中的共定位关系进行了研究.结果 双向凝胶电泳、质谱鉴定和免疫印迹法结果显示,PHB存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,细胞凋亡后在细胞核基质蛋白中表达下调.免疫荧光显微镜观察显示,PHB定位于MG-63细胞核基质纤维上,经姜黄素处理后出现分布位置与表达水平的变化.激光扫描共焦显微镜观察结果显示,PHB在MG-63细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2、Fas、P53、c-Myc和Rb等基因产物具有共定位关系,且共定位区域发生了变化.结论 PHB是一种核基质结合蛋白;PHB在MG-63细胞凋亡过程中的表达与分布变化,及其与细胞凋亡相关基因的共定位关系,对MG-63细胞凋亡具有重要影响.
关键词： Prohibitin 核基质 人成骨肉瘤MG-63细胞 姜黄素 免疫印迹法 -
抗增殖蛋白Prohibitin 与肿瘤
抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)是进化上高度保守的蛋白,广泛分布于不同种属的生物细胞.PHB不同的亚细胞器定位决定了它在调节细胞周期、增殖凋亡、核转录、细胞分化、细胞黏附、维持线粒体形态及功能等方面有重要作用.同时,PHB及其翻译后修饰也参与了PI3K/AKT、Ras/Raf/MAPK等信号通路的调控.近年来,PHB功能及其机制研究有助于我们揭示恶性肿瘤疾病形成的分子机制,将为预防和治疗这些疾病提供理论基础.
关键词： Prohibitin 抗增殖蛋白 肿瘤 细胞凋亡 生物学治疗 -
抗增殖蛋白在肝脏疾病中的研究进展
抗增殖蛋白(Prohibitin ,抑制素)是一种高度保守的蛋白质,广泛分布于细菌、酵母、原虫、植物和哺乳动物等真核生物细胞中,具有高度的同源性.人抗增殖蛋白基因(phb )位于人染色体17q21 ,编码分子量为32 kD 的抗增殖蛋白.抗增殖蛋白作为重要的细胞膜蛋白超家族成员之一,主要存在于线粒体内膜上,发挥着分子伴侣的作用,目前抗增殖蛋白为确定的功能是作为分子伴侣参与稳定细胞线粒体蛋白.
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线粒体Prohibitin蛋白在紫杉醇耐药的CCRF-CEM细胞中表达的变化
目的:研究线粒体prohibitin蛋白在紫杉醇耐药的CCRF-CEM细胞中的表达变化,探讨线粒体prohibitin蛋白在CCRF-CEM肿瘤细胞耐药发生机制中的作用.方法:提取紫杉醇耐药的CCRF-CEM/taxol细胞的线粒体总蛋白,对经双向电泳分离后得到的SDS-PAGE胶用ImageMasterTM 2D Platinum software进行分析、比对,对胶上的蛋白点进行质谱分析,通过SWISS-PROT和NCBInr数据库鉴定蛋白的归属.结果:紫杉醇耐药的CCRF-CEM/taxol细胞中的线粒体prohibitin Protein15表达升高了68.6%(以蛋白表达的体积计).结论:紫杉醇耐药的CCRF-CEM/taxol细胞中线粒体prohibitin表达增加.prohibitin可能通过调节线粒体的活动,对抗紫杉醇诱导的细胞凋亡,在耐药机制中发挥重要作用.
关键词： 多药耐药 CCRF-CEM Prohibitin 线粒体蛋白质组 二维电泳 -
氧化应激心肌细胞prohibitin表达与分布变化及其生物学意义
目的 分析应激心肌细胞prohibitin被氧化过程中的表达与分布变化,及其生物学意义.方法 用过氧化氢对进行体外培养的大鼠心肌细胞干扰,将其作为应急心肌细胞氧化的模型；并用科学方法检查细胞培养溶液中乳酸脱氢酶的活跃性以及运用MTT实验来证实大鼠心肌细胞的受损情况；并利用蛋白质印迹技术来检查心肌细胞prohibitin在被氧化应激时,蛋白质的表达和分布变化情况,通过ATPase实验类测定线粒体的活性从而推断出线粒体氧化磷酸化的作用;后运用流式细胞技术来判定线粒体的跨膜电势.结果 氧化后乳酸脱氢酶的活跃性明显高于对照组,但研究组细胞的成活几率远远小于对照组；通过ATPase实验类测定线粒体的活性下降了大约60个百分点；线粒体prohibitin的表达情况优于对照组.结论 应激心肌细胞prohibitin被氧化后表达水平生物体的自我调节能力加强,并且开始慢慢向线粒体移动,氧化应激使心肌细胞线粒体受损,从而功能出现问题.
关键词： 氧化应激 心肌细胞 Prohibitin 表达 分布变化 -
Prohibitin rs6917C》T基因多态性与潮汕女性乳腺癌易感性的关系研究
目的 研究潮汕汉族女性人群中Prohibitin(PHB)基因rs6917 C>T单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与乳腺癌遗传易感性的关系.方法 采用病例-对照研究,于2009年7~12月收集汕大医学院附属肿瘤医院231例乳腺癌住院患者和169例正常对照女性的外周血,提取全血基因组DNA,以高分辨率熔解曲线(high resolution mehing,HRM)法检测PHB基因rs6917位点基因型,计算各种基因型的乳腺癌发生风险及其95%可信区间.结果 潮汕地区女性人群PHB rs6917存在两种基因型CC和TC,在乳腺癌组的频率分别为74.46%(C/C)、25.54%(T/C),在正常人群的频率分别为72.78%(C/C)和27.22%(T/C).经统计学分析,T/C基因型携带者与C/C基因型携带者在乳腺癌发病风险上并无显著性差异(OR=1.090,95%CI=0.695~1.709,P = 0.706).结论 未发现PHB基因rs6917位点SNP与潮汕汉族女性乳腺癌易感性具有相关性.
关键词： Prohibitin 单核苷酸多态性 乳腺癌 高分辨率熔解曲线 -
食管鳞状细胞癌组织中Prohibitin的表达及其临床意义
目的 通过检测Prohibitin在食管鳞癌组织中的表达,探讨Prohibitin与食管鳞状细胞癌的临床病理学参数的相关性,Prohibitin在食管鳞癌发生发展预后中的作用.方法 收集2010-2016年新疆医科大学第一附属医院手术切除的食管鳞癌组织样本162例,癌旁远端食管组织样本50例.应用S-P免疫组化方法检测Prohibitin在食管癌及癌旁组织中的表达.结果 在食管癌组织Prohibitin阳性表达率为67.9％,明显高于癌旁组织(38.0％),差异有统计学意义(P＜0.05);食管鳞状细胞癌组织中Prohibitin在性别、不同年龄组、哈萨克族和汉族、淋巴结转移与否、浸润深度及肿瘤大小表达差异无统计学意义(P＞0.05);Prohibitin的阳性表达率在食管鳞癌高分化、中分化和低分化食管鳞癌组织中分别为25.0％、56.7％和82.7％,差异有统计学意义(x2=35.821,P＜0.05),表明Prohibitin的表达可能与食管鳞癌分化程度有关,阳性表达率随恶性程度增高而增高.结论 Prohibitin在食管鳞癌组织中高表达,与食管鳞癌组织的不同分化程度相关,在食管鳞状细胞癌的发生和发展中可能起到一定作用,Prohibitin可能对判断食管鳞状细胞癌的恶性程度有一定的评估价值.
关键词： 食管鳞状细胞癌 Prohibitin 组织分化程度 -
氧化应激心肌细胞prohibitin表达与分布变化及其生物学意义
目的:探讨prohibitin在氧化应激心肌细胞中的表达与分布变化的特点及其在心肌细胞损伤中的意义.方法:H2O2干预体外培养乳鼠心肌细胞,建立氧化应激心肌细胞损伤模型;采用生物化学法检测细胞培养液中LDH活性及MTT实验观察心肌细胞损伤程度;以Western印迹法检测氧化应激时prohibitin蛋白表达变化与分布变化;线粒体H+-ATPase合成活力实验检测线粒体氧化磷酸化功能;流式细胞术检测线粒体跨膜电位.结果:氧化应激组LDH活性显著高于对照组,而细胞存活率低于对照组34.51%～65.5%;线粒体H+-ATPase合成活力降低60%;氧化应激组线粒体跨膜电位显著低于对照组;心肌细胞prohibitin表达水平在H2O2处理3 h出现升高然后回落到正常水平,线粒体prohibitin表达水平高于对照组.结论:氧化应激心肌细胞prohibitin表达水平代偿性增加并有向线粒体移位的趋势,氧化应激导致心肌细胞线粒体功能障碍.
关键词： Prohibitin 氧化应激 线粒体 心肌损伤 -
Prohibitin特异性 MiR RNAi表达载体构建及其干扰效果测定
目的:构建携带prohibitin(PHB-1)基因的MiR RNAi 真核表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-MiR ,并观察其转染HEK293细胞株前后PHB-1的表达变化.方法: 根据GenBank中prohibitin的序列,设计特异的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链 ,克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-MiR质粒缺口末端 ,连接在质粒上生成含MiR RNAi pcDNATM6.2-GW/EmGFP-MiR-PHB 载体,测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至HEK293细胞中,用Western blotting检测干扰后HEK293细胞内PHB-1表达的变化.结果: 将目的序列成功连接到载体上 ,并经测序分析证实载体构建成功.Western blotting检测结果证实构建的PHB-1 MiR RNA表达重组体可显著抑制HEK293细胞内PHB-1的表达.结论: 成功构建了携带PHB-1基因的MiR RNAi 真核表达载体.
关键词： Prohibitin HEK293细胞 RNA干扰 -
小鼠Prohibitin真核表达质粒的构建及在293T细胞中的表达
目的 构建小鼠Prohibitin基因真核表达质粒,在293T细胞中进行表达鉴定,为研究小鼠Prohibitin基因功能奠定基础.方法 以小鼠Prohibitin基因cDNA序列为模板,设计特定引物,应用PCR的方法扩增其编码序列全长,并将其克隆到真核表达载体pEFP-C2中,将获得的重组表达质粒转染293T细胞,应用RT-PCR、Western blot方法检测其表达.结果 成功构建了pEGFP-Prohibitin真核表达质粒,将其成功转染293T细胞,pEGFP-Prohibitin转染组Prohibitin蛋白和mRNA在293T细胞的表达量比转染空载转染组明显增加.结论 成功构建了真核表达质粒pEGFP-Prohibitin,并在真核细胞表达良好,为研究小鼠Prohibitin的基因功能奠定了基础.
关键词： Prohibitin 重组质粒 转染 小鼠 293T细胞 -
Survivin和Prohibitin在食管癌中的表达及意义
食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,其发生发展不仅有细胞的过度增值,同时还存在细胞凋亡异常.研究表明,有多种癌基因参与细胞凋亡的调控.Survivin是细胞内凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis family of protein,IAPs)的一个新成员,可以通过有丝分裂促进细胞增生,抑制细胞凋亡[1].研究发现Prohibitin基因多态性突变与北美地区50岁以下妇女的乳腺癌发生率高度相关,PHB可以抑制雌激素受体介导的信号转导,从而抑制细胞的生长[2].
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Prohibitin在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达和作用
目的 探讨Prohibitin(PHB)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏组织中的表达和作用.方法 48只雄性6周龄Wistar大鼠随机分为假手术组和模型组,每组24只,模型组大鼠麻醉后,背侧切口行左侧输尿管结扎术,假手术组只探及肾包膜,造模后分别于第7、14、21、28天各处死6只大鼠,行肾脏病理检查并计算肾间质纤维化指数,采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学方法 检测肾脏组织中PHB与转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA和蛋白表达.结果与假手术组相比,模型组各时间点肾间质纤维化指数显著增高(P<0.01),梗阻时间越长纤维化指数越高;模型组各时间点PHB的mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.01),梗阻时间越长,表达量越低;模型组各时间点TGF-β1的mRNA和蛋白的表达显著增高(P<0.01),梗阻时间越长,表达节越高.模型组PHB的蛋白表达与间质纤维化指数呈显著负相关(γ=-0.825),TGF-β1的蛋白表达与间质纤维化指数呈显著正相关(γ=0.995),PHB蛋白表达与TGF-β1蛋白表达呈显著负相关(γ=-0.786).结论 UUO大鼠肾脏组织PHB表达呈著降低,可能参与肾间质纤维化的发生发展.
关键词： Prohibitin 肾间质纤维化 转化生长因子-β1 -
蛋白质组学技术筛选大鼠肝脏大部切除后肝再生相关差异表达蛋白
目的:应用蛋白质组学技术观察大鼠肝脏大部分切除术后蛋白表达情况,筛选肝脏切除后肝再生相关的差异表达蛋白.方法:大鼠随机分为肝大部切除组(n=35)和假手术对照组(n=5).肝大部切除组大鼠无菌条件下切除肝左外叶、左中叶和中叶共约70%肝脏;假手术组大鼠仅开腹,不行肝大部切除.肝大部切除术后不同时间点(2、12、24、36、48、72、168 h)各处死5只大鼠,取右叶肝组织,提取大鼠肝脏总蛋白,以假手术组为对照,进行二维电泳和质谱分析,筛选差异表达蛋白,并对其中差异显著蛋白进行Western印迹鉴定.结果:电泳图谱显示肝脏70%切除术后2 h差异表达蛋白点开始增多,36 h达到高峰;共筛选出78个差异表达蛋白点,质谱技术鉴定出其中35个有意义的蛋白点.35个差异蛋白根据动态变化趋势可分为5类:3类丰度上调蛋白和2类丰度下调蛋白(各自间上调或下调时间和幅度均有所差异);这些蛋白主要涉及以下代谢途径:氧化应激反应、急性期反应蛋白、脂类代谢蛋白、能量代谢的酶类、信号转导、神经递质降解等,部分蛋白功能未知.Western印迹鉴定证实其中的prohibitin蛋白在肝大部切除术后2 h开始上调,36 h达高峰,48 h后趋于正常水平.结论:多种信号和代谢途径参与肝脏大部切除后的肝脏再生过程.
关键词： 肝再生 肝切除术 蛋白质组学 Prohibitin -
红花黄色素预处理对全脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元Prohibitin/Caspase3信号通路的影响
目的 研究红花黄色素对大鼠海马CA1区Prohibitin(PHB)/Caspase3信号通路的影响,探讨红花黄色素对缺血性神经元损伤的保护作用的可能机制.方法 按照随机数字法将48只SD雄性大鼠随机分为:假手术(Sham)组、缺血再灌注(I/R)组、溶剂对照(Vehicle)组、红花黄色素预处理(SY)组;通过大鼠大脑四动脉结扎建立全脑缺血模型.Vehicle组、SY组于脑缺血前7天开始,经股静脉注射2ml生理盐水或红花黄色素(90 mg/kg溶于2 ml生理盐水中),每天1次.免疫印迹法检测海马CA1区PHB蛋白含量的变化和Caspase3活化水平的变化;焦油紫染色法观察海马CA1区神经元死亡情况.结果 缺血再灌注3h时,与I/R组和Vehicle组相比,SY组大鼠海马CA1区PHB蛋白含量明显升高,而Caspase3的活化水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);缺血再灌注第7天,焦油紫染色法结果显示SY组大鼠海马CA1区的存活神经元数量明显多于I/R组和Vehicle组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 红花黄色素预处理对缺血再灌注引起的海马CA1区神经元损伤有保护作用,这可能与Prohibitin的表达增加和Caspase3的活化水平降低有关.
关键词： 红花黄色素 缺血再灌注 Prohibitin Caspase3 -
重组Prohibitin融合蛋白包涵体的纯化
[目的]获得高纯度具有免疫活性的Prohibitin融合蛋白.[方法]异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组大肠杆菌BL21(pET30a(+)-prohibitin)表达,其融合蛋白包涵体经过洗涤、变性、复性后,用Ni-NTA Agarose亲和层析柱分离纯化.通过12%SDS-PAGE胶和Bradford法检测其纯度和目的蛋白含量,用ELISA对纯化后的蛋白进行鉴定.[结果]从融合蛋白包涵体中纯化到具有免疫活性的目的蛋白,其纯度达90%以上,含量约0.3mg/ml.[结论]建立了有效纯化融合蛋白包涵体的方法,为对Prohibitin进一步的结构和功能研究奠定基础.
关键词： Prohibitin 融合蛋白 包涵体 蛋白纯化 -
沉默Prohibitin基因对人结直肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响
目的 siRNA介导抗增殖蛋白Prohibitin (PHB)基因沉默对人结直肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响.方法 通过脂质体LipofectamineTM 2000在HCT116细胞中转染PHB-siRNA,以Western blot来筛选siRNA片段.设立阴性对照NC组和高效沉默PHB138,PHB539 siRNA片段为实验组,重新转染HCT116,通过平板克隆形成实验、CCK-8检测细胞增殖能力;Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡试剂流式细胞术、Caspase-3/ Caspase-9活性检测等方法检测细胞凋亡;Annexin Ⅴ-FITC和Hoechst染色荧光显微镜观察.结果 Western blot结果显示siRNA片段PHB138、PHB539能明显抑制PHB蛋白表达;转染后HCT 116平板克隆形成率分别PHB138 (31.1±4.0)％、PHB539 (12.4±1.2)％、NC (43.4±2.1)％,差异有统计学意义(P＜0.001);CCK8实验发现转染后1～5 d,实验组与对照组比较,细胞增殖未收到显著影响(P＞0.05).在转染第7天,PHB539 siRNA能显著抑制细胞增殖(P＜0.01);Caspase-3活性度为PHB138 (1.50±0.39)、PHB539 (1.81±0.41),Caspase-9活性度PHB138(2.02±0.43)、PHB539 (2.81±0.51),差异有统计学意义(P＜0.05);Annexin Ⅴ-FITC和Hoechst染色均在荧光显微镜下观测有明显的凋亡现象,且凋亡比例和强度比阴性对照强.结论 靶向PHB-siRNA干扰可以有效地沉默结直肠癌细胞HCT116 PHB基因,下调PHB蛋白水平,从而抑制结直肠癌细胞HCT116增殖、促进凋亡.
关键词： Prohibitin siRNA HCT116 细胞增殖 凋亡 -
Prohibitin基因转染对肾小管上皮细胞表型转化的影响
目的 探讨转染外源性Prohibitin(PHB)基因对体外培养的肾小管上皮细胞株(NRK-52E)表型转化的影响.方法 将构建的pcDNA3.1(+)-PHB1 、pcDNA3.1(+)-PHB2质粒转染体外培养的NRK-52E细胞作为转染组,以空载体转染NRK-52E细胞为阴性对照组,以正常NRK-52E细胞为空白对照组,分别应用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染24h、48 h、72 h各组NRK52E细胞PHB1 、PHB2及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA及蛋白表达.结果 1.转染24 h、48 h、72 h时转染组NRK-52E细胞的PHB1 、PHB2 mRNA及其蛋白表达均较阴性对照组和空白对照组增高(Pa＜0.05),且48 h表达量高,而阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义.2.转染24 h 、48 h、72 h时转染组NRK-52E细胞α-SMA mRNA和蛋白表达均较阴性对照组和空白对照组降低(Pa＜0.05),48 h表达量低,阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义.3.转染组48h NRK-52E细胞PHB1 、PHB2蛋白表达量与α-SMA蛋白表达量均呈负相关(r=-0.942、-0.869,Pa＜0.05).结论 转染外源性PHB基因可以抑制体外培养的NRK-52E细胞的表型转化.
关键词： Prohibitin 肾小管上皮细胞 转染 α-平滑肌肌动蛋白 表型转化 -
Prohibitin——肿瘤与代谢性疾病治疗的新靶标
Prohibitin(PHB)是一种高度保守、分布广泛的蛋白质.PHB不仅是一类新型的分子伴侣蛋白,而且参与调节细胞周期、维持线粒体结构和功能,具有抗细胞凋亡、衰老和增殖的作用.PHB的多种功能和不同定位,以及在多种疾病中存在表达差异的现象提示,PHB可能参与疾病的发生与发展过程.因此,PHB在多种疾病如:肿瘤、糖尿病和肥胖等的治疗方面将会成为有用的药物靶标.
关键词： Prohibitin 肿瘤 代谢性疾病 治疗 -
Prohibitin的研究进展
Prohibitin(phb)基因是一种有效的肿瘤抑制基因,广泛分布于不同种属的各种生物细胞中,它所编码的产物Prohibitin(PHB)蛋白结构保守,既存在于线粒体内膜上,发挥分子伴侣作用,也存在于细胞核内,具有负性转录调控作用,因而对细胞代谢、生长、分化、衰老以及凋亡等诸多方面发挥着重要的调控作用,可能与某些肿瘤和退行性疾病的发生有关.
关键词： Prohibitin 分子伴侣 转录调控
