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线粒体Prohibitin蛋白在紫杉醇耐药的CCRF-CEM细胞中表达的变化
目的:研究线粒体prohibitin蛋白在紫杉醇耐药的CCRF-CEM细胞中的表达变化,探讨线粒体prohibitin蛋白在CCRF-CEM肿瘤细胞耐药发生机制中的作用.方法:提取紫杉醇耐药的CCRF-CEM/taxol细胞的线粒体总蛋白,对经双向电泳分离后得到的SDS-PAGE胶用ImageMasterTM 2D Platinum software进行分析、比对,对胶上的蛋白点进行质谱分析,通过SWISS-PROT和NCBInr数据库鉴定蛋白的归属.结果:紫杉醇耐药的CCRF-CEM/taxol细胞中的线粒体prohibitin Protein15表达升高了68.6%(以蛋白表达的体积计).结论:紫杉醇耐药的CCRF-CEM/taxol细胞中线粒体prohibitin表达增加.prohibitin可能通过调节线粒体的活动,对抗紫杉醇诱导的细胞凋亡,在耐药机制中发挥重要作用.
关键词： 多药耐药 CCRF-CEM Prohibitin 线粒体蛋白质组 二维电泳 -
紫杉醇诱导的人白血病CCRF-CEM多药耐药细胞模型的建立
目的 建立稳定的紫杉醇(paclitaxel)诱导的人肿瘤多药耐药细胞系, 并对其生物学特点进行评价.方法 用亚致死浓度(1/50 IC50值)的紫杉醇连续诱导对化疗药物敏感的人急性T淋巴细胞白血病CCRF-CEM细胞,使其成为对紫杉醇耐药的CCRF-CEM/paclitaxel细胞,同时观察CCRF-CEM/paclitaxel细胞对柔红霉素(daunorubicin)和长春碱(vinblastine)的交叉耐药;用相应的单抗和FITC标记的二抗与细胞孵育后,用流式细胞仪分别检测细胞表面和细胞总P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺癌耐药相关蛋白 (LRP)等表达水平的变化,并用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率的变化.结果 CCRF-CEM/paclitaxel细胞传至第90代时,对紫杉醇产生了耐药,耐药倍数约为256.4倍;同时对柔红霉素和长春碱也产生了耐药,耐药倍数约为9.8和2.0倍.与CCRF-CEM细胞比较,CCRF-CEM/paclitaxel细胞表面P-gp和细胞总P-gp表达分别升高了18.8和14.4倍,MRP1和LRP分别升高了2.1和1.2倍; S期细胞比例由(48.3±1.2)%降低至(23.8±0.5)%,细胞凋亡百分率由(7.82±0.19)%减少至(2.47±0.37)%.结论 成功建立了稳定的紫杉醇诱导的人CCRF-CEM/paclitaxel多药耐药细胞模型,该模型具有一般肿瘤多药耐药细胞的生物学特点.
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氨甲喋呤对映体体外诱导BALL-1和CCRF-CEM细胞系蛋白质表达差异
目的 探讨氨甲喋呤对映体(methotrexate,MTX)体外诱导急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)细胞系BALL-1和CCRF-CEM蛋白质表达的差异性.方法 通过浓度递增及低剂量持续性诱导构建耐受30μmol MTX对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]的CCRF-CEM和BALL-1细胞系.提取耐药细胞、非耐药细胞及不加药时两种细胞的总蛋白质,利用双向凝胶电泳技术获得亲本细胞和耐药细胞的电泳结果 ,选择差异倍数在2倍以上且边界比较清晰的蛋白质点,经胶内原位酶解,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定肽质量指纹图(PMF),将所得的结果进行生物学信息分析.结果共发现12个蛋白质点有生物学功能,包括4个热休克相关蛋白(HPSA5、HPSA8、HSPD1和DNAJA1/4)、5个与细胞增殖有关联的蛋白质(PCNA、NPM1、CORO1A、CALR和DYNC1I2)以及2个分子伴侣相关蛋白(CCT6A/B和VCP),另1个蛋白质为EON1/2,并证实其与细胞的新陈代谢有关联.结论 MTX对映体诱导耐药后细胞系蛋白质表达发生变化,可能在耐药过程中具有重要的作用.
