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克癌新丸对裸鼠结肠癌细胞HCT116移植瘤生长的抑制作用
目的 观察克癌新丸对裸鼠人结肠癌细胞HCT116移植瘤生长及肿瘤血管生成的抑制作用.方法 复制裸鼠人结肠癌HCT116移植瘤模型,随机分为阴性对照组(Ns)、阳性对照组(贝伐单抗注射液,5 mg·kg-1,腹腔注射给药)和克癌新丸低、中、高3个剂量组(200,400和800mg· kg-1,灌胃给药),给药结束后剥取瘤体并称重,常规石蜡切片,采用免疫组化法分析瘤体内微血管密度(mierovessel density,MVD)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.结果 克癌新丸明显抑制裸鼠移植瘤的生长,各治疗组给药后肿瘤体积、相对肿瘤体积和相对肿瘤增殖率明显下降,与对照组比较,P＜0.05;克癌新丸治疗组微血管分布较稀疏,MVD值由对照组的(59.62±18.83)分别减少至(55.56±12.63),(46.72±11.57)和(41.35±10.27).克癌新丸治疗组阳性表达率由对照组的(78.46±16.53)％下降至(58.64±14.19)％,(49.27±13.29)％和(43.68±11.71)％.结论 克癌新丸能明显抑制裸鼠HCT116移植瘤的生长,降低移植瘤微血管密度MVD,下调瘤组织VEGF的表达,揭示其抗肿瘤作用与减少血管生成有关.
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RYBP慢病毒表达载体的构建及对结肠癌细胞HCT116增殖的影响
目的 构建RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP,包装慢病毒颗粒并感染结肠癌细胞HCT116,分析RYBP的表达及对HCT116细胞增殖的影响.方法 用DNA克隆技术在慢病毒表达载体pWPI-IRES-EGFP序列中引入Flag标签及多个单酶切位点序列,改造后的载体命名为pWPI-linker.采用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)从肝癌SK-Hep-1细胞总RNA中扩增RYBP的全长开放阅读框序列,克隆人pWPI-linker载体中,得到pWPI-RYBP.利用人胚肾细胞HEK293T包装重组慢病毒颗粒,分析该慢病毒颗粒感染HCT116细胞的效率、RYBP蛋白的表达,用MTS方法分析RYBP过表达对HCT116细胞增殖的影响.结果 用改造的pWPI-linker载体成功构建慢病毒表达载体pWPI-RYBP包装的慢病毒颗粒能高效感染HCT116细胞,表达出Flag-RYBP融合蛋白.MTS方法分析表明,RYBP的过表达抑制HCT116细胞的增殖,增殖抑制率达26.1％.结论 改建的慢病毒表达载体pWPI-linker带有可供选择的多个单克隆位点和标签蛋白序列,为今后基于pWPI载体的克隆构建和表达蛋白质的分析提供了极大的便利；RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP的构建为进一步研究RYBP的生物学功能及基因治疗奠定了基础.
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Nucleophosmin/B23对结肠癌侵袭能力的影响
目的:探讨核仁磷酸蛋白(Nucleophosmin/B23)在人结肠癌组织中的表达及对人结肠癌细胞侵袭能力的影响.方法:选取2000年6月至2005年10月就诊于天津医科大学附属肿瘤医院结肠癌患者31例,并收集其肿瘤组织、对应的癌旁组织和转移淋巴结组织,采用免疫组织化学染色方法检测B23的表达情况.采用Western blotting 技术检测不同结肠癌细胞系中B23的表达情况,利用小干扰RNA技术下调B23在结肠癌细胞中的表达,利用Transwell侵袭实验观察B23表达下降对结肠癌细胞侵袭能力的影响.结果:免疫组织化学染色显示B23在结肠癌组织的表达高于结肠癌旁组织表达(P=0.001 6),在转移淋巴结中的表达高于结肠癌旁组织(P=0.000 7),差异有统计学意义.Western blotting证实在转染B23特异性小干扰RNA的结肠癌细胞HCT116中B23的表达明显下降,同时明显抑制结肠癌细胞的侵袭能力.结论:B23在结肠癌和转移淋巴结中高表达,且能影响结肠癌细胞的侵袭能力.提示B23可能在结肠癌的发生、进展和浸润转移中起调节作用.
关键词： nucleophosmin/B23 结肠癌 HCT116 转移 -
单唾液酸四己糖神经节苷脂联合奥沙利铂对HCT116细胞增殖和周期的影响
目的 研究外源性单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)联合奥沙利铂对HCT116细胞增殖和细胞周期的影响.方法 进行人结肠癌肿瘤细胞株HCT116细胞培养,HCT116细胞在20 μmol/L奥沙利铂与不同浓度GM1 (5～300 μmol/L)联合干预,孵育12、24、48 h后通过CCK-8法检测药物对于HCT116细胞增殖活性的影响.倒置显微镜观察药物作用后细胞形态学变化.流式细胞术检测GM1联合奥沙利铂对于HCT116细胞细胞周期分布及凋亡的影响.结果 奥沙利铂导致HCT116细胞增殖活性显著降低,该作用呈现显著时间依赖性,并且不受GM1药物作用的影响(P＞0.05).细胞形态学观察,奥沙利铂作用24h后,HCT116细胞生长出现显著抑制,联合使用GM1对奥沙利铂引起的HCT116细胞的生长抑制亦无明显影响.流式细胞术检测,奥沙利铂作用24h后,HCT116细胞周期Go/G1期和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,细胞凋亡增多(P＜0.05),联合使用GM1对于奥沙利铂引起的HCT116细胞细胞周期和凋亡的改变无明显影响(P＞0.05).结论 GM1在体外不降低奥沙利铂对HCT116细胞增殖的抑制作用,不影响奥沙利铂引起的细胞周期和凋亡的变化.
关键词： G(M1)神经节苷脂 HCT116 细胞增殖 细胞周期 奥沙利铂 -
RNAi沉默Arl4c对结肠癌细胞株HCT116增殖能力的影响
目的 探讨利用RNA干扰技术沉默Arl4c基因对结肠癌HCT116细胞株增殖的影响. 方法 将Arl4c基因的si-RNA稳定转染至HCT116细胞,采用RT-PCR、Western blot鉴定干扰效果,以HCT116细胞沉默Arl4c基因组为实验组,以转染空质粒的HCT116细胞和空白的HCT116细胞为对照组,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞倍增时间、平板克隆形成实验、流式细胞术检测沉默Arl4c基因后,HCT116细胞生长速度、细胞周期、克隆形成能力的改变. 结果 沉默Arl4c基因后,实验组细胞的生长速度明显下降,G1期细胞增多、S期细胞减少,空白对照、空质粒对照组和实验组细胞平均倍增时间分别为(4.718±0.212)h,(4.981 ±0.24)h和(6.0±0.137)h;空白对照、空质粒对照组和实验组平均细胞克隆形成数目分别为121±9.00,117±10.00和80±9.00.实验组与空白对照、空质粒对照组相比较,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 Arl4c基因的沉默能够抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,可能在结肠癌的发生发展中起重要作用.
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双歧杆菌脂磷壁酸对结肠癌细胞抑制增殖和促凋亡的研究
目的 探讨双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)抑制人类结肠癌细胞株HCT116细胞增殖和促进凋亡情况.方法 培养结肠癌细胞株HCT116和提取双歧杆菌LTA;实验分为4组,即LTA低剂量组(20 μg/mL)、中剂量(60 μg/mL)、高剂量(100μg/mL)和HCT116对照组(Control)；用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测LTA对结肠癌细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测LTA对结肠癌细胞周期分布变化和凋亡率,免疫组化分析bcl-2、Cytochrome C和NF-kBp65含量变化,RT-PCR检测TLR2mRNA和TLR4m RNA的表达.结果 MTT法测得LTA各组对结肠癌细胞HCT116均具有较好的抑制(P＜0.01)；流式细胞仪检得G0/G1期细胞显著增多(P＜0.01),而G2和S期细胞减少(P＜0.05),细胞凋亡率增加(P＜0.05)；免疫组化分析IOD/Area值,bcl-2和NF-kBp65表达显著下调,Cytochrome C显著上升(P＜0.05)；RT-PCR测得TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达均上升(P＜0.05).结论 LTA具有明显的抑制结肠癌细胞增殖和促进凋亡作用,为研制高效、无毒的新型抗结肠癌药物奠定一定的基础.
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RNA干扰Slug基因对HCT116细胞裸鼠移植瘤生长及转移的影响
目的：探讨通过靶向RNA干扰（RNA interference，RNAi）抑制Slug基因的表达，观测对荷瘤裸鼠结直肠癌生长及转移的影响。方法：利用结肠癌细胞株HCT116对24只5周龄裸鼠皮下种植，建立结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型，设立空白对照组、阴性对照组及实验组三组，每组8只。分别注射生理盐水、阴性对照质粒及慢病毒载体，观察肿瘤生长情况，绘制肿瘤生长曲线，观察各组间肿瘤生长及淋巴结转移的变化，应用免疫组化、qRT-PCR和Western blot检测Slug基因和蛋白表达情况。结果：Slug基因shRNA实验组与空白对照组和阴性对照组相比，瘤体生长减缓，移植瘤质量明显减小（3.08±0.31 vs 7.37±1.18，7.46±1.16，P＜0.01），Slug蛋白表达明显降低（P＜0.05）；实验组淋巴结阳性率为36.3％（4/11），与阴性对照组77.8％（14/18）及空白对照组68.4％（13/19）相比较（P＜0.01）。结论：靶向Slug的RNA干扰可以显著抑制结肠癌裸鼠模型的生长、淋巴结转移以及癌组织中Slug基因蛋白的表达，可能成为结肠癌基因治疗的潜在分子靶点。
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薏苡仁提取物对肠癌细胞HCT116的抑制作用及Akt/NFKB/STAT3通路的影响
目的:探讨薏苡仁提取物对肠癌细胞的抑制作用及作用机制.方法:通过CCK8细胞增殖实验检测薏苡仁提取物对HCT116细胞增殖的影响;通过Transwell细胞迁移实验检测薏苡仁提取物对HCT1 16细胞迁移能力的影响;通过实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测Akt、pAKt和NFκB基因和蛋白表达.结果:薏苡仁提取物可以抑制肠癌细胞HCT116的增殖及迁移运动,其作用后Akt、pAkt和NFκB(p50)蛋白表达下调,AKT1和STAT3 mRNA表达下调(P＜0.05).结论:薏苡仁提取物通过抑制Akt/NFκB/STAT3通路而发挥抑制肠癌细胞增殖的作用.
关键词： 肠肿瘤 薏苡仁提取物 HCT116 AKt/NFκB/STAT3 通路 基因表达 -
硫化砷对人结肠癌细胞株HCT116生长及迁移能力的影响
目的:研究硫化砷对人结肠癌细胞株HCT116迁移能力的影响及其作用机制.方法:以HCT116细胞为研究对象,通过MTT法观察硫化砷对肿瘤细胞活性及增殖能力的影响,通过划痕实验观察硫化砷处理后细胞的迁移能力.Western B1ot、Real-time PCR检测硫化砷处理前后细胞内E-钙粘素、P53、Notch1蛋白的表达及相应mRNA水平的变化.结果:硫化砷对HCT116细胞有抑制增殖的作用,此作用随着剂量的增加而增强.选取无毒剂量的硫化砷(1 μM)处理HCT116细胞24h后,细胞的迁移能力降低了52.00％±7.55％.Western Blot及Real-time PCR结果显示,硫化砷处理后,HCT116细胞内的E-钙粘素蛋白水平及mRNA水平均明显升高,P53蛋白水平增高,但对Notch1蛋白及mRNA水平无明显影响.结论:一定剂量范围的硫化砷能抑制HCT116细胞增殖,并能降低其迁移能力.硫化砷降低HCT116细胞的迁移能力,其机制可能是通过上调P53蛋白的水平,从而增高E-钙粘素的表达实现的.
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奥沙利铂与7-羟基星形孢菌素对结肠癌HCT116细胞的杀伤作用及其机制的研究
目的 奥沙利铂与7-羟基星形孢菌素单独及联合应用,探讨诱导结肠癌细胞HCT116死亡的作用机制.方法应用MTT法检测 L-OHP、UCN-01单药及联用对HCT116细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞术、Western blot方法检测药物处理后的结肠癌细胞凋亡情况;应用HE染色法检测丝裂灾变的形态改变.结果 低浓度L-OHP(6.25μmol/L)与UCN-01(100nmol/L)联用对结肠癌HCT116细胞的杀伤可产生协同作用,效果明显强于单独用药组;两药联用AnnexinV阳性细胞率与UCN-01单用无明显差别,但死亡细胞明显增加;两药联用HCT116细胞的形态发生改变,巨核多核细胞较单独用药组增多约10%.结论 L-OHP与UCN-01联用对HCT116细胞具有协同抑制作用,诱导HCT116细胞发生凋亡和丝裂灾变.
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吲哚美辛对结肠癌细胞CDK2、CDK4、P21WAF1/CIP1、Bcl-2及Bax蛋白表达的影响
目的非甾体类抗炎药通过环氧合酶途径是抑制肿瘤的机制之一.是否还有其他途径抑制细胞增殖及诱导凋亡.探讨吲哚美辛抗肿瘤的作用机制,为其临床应用提供实验依据.方法不同浓度的吲哚美辛作用于结肠癌细胞株HCT116细胞24 h,通过Western蛋白印迹技术检测CDK2、CDK4、p21WAFI/CIP1、Bcl-2及Bax蛋白表达.结果吲哚美辛降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2、CDK4及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制剂p21WAF1/CIP1蛋白,而对促凋亡蛋白Bax的表达无影响.结论吲哚美辛通过降低CDK2、CDK4、Bcl-2蛋白,上调p21WAF1/CIP1的表达来抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡.
关键词： 吲哚美辛 HCT116 增殖 凋亡 细胞周期素依赖蛋白激酶 -
人结肠癌奥沙利铂耐药细胞HCT116/L-OHP的建立及其耐药机制初探
目的:建立人结肠癌奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞HCT116/L-OHP,并初步探讨其可能的耐药机制.方法:通过逐步增加作用于亲代细胞HCT116的L-OHP浓度与间断大剂量L-OHP作用,建立耐药细胞HCT116/L-OHP;MTT法检测L-OHP、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、顺铂(cisplatin)和7-乙基-10-羟基喜树碱(7-ethyl-10-hydrol-camptothecin,HCPT)对HCT116和HCT116/L-OHP细胞的细胞毒性;蛋白质印迹法检测相关耐药蛋白的表达;基因芯片检测信号通路的改变.结果:成功构建了稳定耐药的耐药细胞HCT116/L-OHP,耐药倍数为17倍,与5-FU、DDP和HCPT有不同程度的交叉耐药性.与HCT116细胞比较,HCT116/L-OHP细胞中P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)和谷胱甘肽S转移酶(glutathioneS-transferase,GST)的表达上调(P<0.01),9条信号通路上调(P<0.05),其中细胞周期信号通路上调明显,p53信号通路次之.结论:HCT116/L-OHP细胞具有稳定的耐药性,其耐药机制可能与细胞耐药蛋白表达、细胞周期和p53信号通路表达上调有关.
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结肠癌转移相关基因1对结肠癌细胞肝转移的影响
目的:研究结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer 1,MACC1)的表达对结肠癌肝转移的影响.方法:将融合绿色荧光蛋白(green fluorescent proteins,GFP)的慢病毒表达载体分别感染具有不同转移潜能的人结肠癌细胞株SW1116和HCT116.给予BALBc-nunu裸鼠脾脏注射感染后的结肠癌细胞,构建结肠癌肝转移模型.注射后35 d,在荧光解剖显微镜下观察肝脏内结肠癌细胞的转移情况,计算肝转移率.应用蛋白质印迹法检测SW1116和HCT116细胞中MACC1蛋白的表达水平,评估MACC1的表达水平与肝转移率的关系.结果:SW1116细胞的肝转移率明显高于HCT116细胞.MACC1蛋白在HCT116细胞中呈低表达,而在SW1116细胞中呈高表达,差异有统计学意义(P<0.01).结论:MACC1蛋白的表达水平可能与结肠癌的肝转移能力呈正相关.
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姜黄素通过靶向PBK对结直肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用
目的 研究姜黄素抑制结直肠癌HCT116细胞增殖的分子机制.方法 体外培养HCT116细胞,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度姜黄素(0、10、20、50、100、200μmol/L)对HCT116细胞增殖率的影响,实验分空白对照组、EGF组(单独加入20 ng/mL EGF)、EGF+姜黄素组;细胞锚定增殖实验检测药物对HCT116细胞增殖的抑制作用;体外结合及体外激酶实验检测姜黄素对磷酸化酶b激酶(PBK)活性的影响;Western blotting及免疫组织化学方法检测姜黄素对PBK下游信号通路的影响.结果 当姜黄素浓度＜50μmol/L时,对HCT116细胞影响较小;而当浓度达到100 μmol/L时,HCT116细胞凋亡明显增加.HCT116细胞在软琼脂内锚定增殖的结果显示:与EGF组比较,EGF+姜黄素组细胞克隆小且克隆数量少,具有药物浓度依赖性.体外结合及体外激酶实验结果显示姜黄素可以结合PBK,并抑制PBK的活性.Western blotting及免疫组织化学结果显示姜黄素明显下调PBK下游信号通路ERK1/2及H3的磷酸化水平,具有时间和浓度依赖性.结论 在结直肠癌HCT116细胞中,姜黄素可能通过抑制PBK的活性,起到抗HCT116细胞增殖的作用.
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灵芝孢子油体外抗肿瘤活性比较研究
探讨灵芝孢子油对于不同肿瘤细胞的抗肿瘤活性差异,选取人肝癌细胞(HepG2)、人非小细胞肺癌细胞(A549)、人结肠癌细胞(HCT116)为待检测肿瘤细胞株,采用MTT法进行细胞活力检测,Western blot法检测NF-κB信号通路激活程度,Caspase-3活性检测法检测Caspase-3酶活性来对灵芝孢子油的抗肿瘤活性机制进行初步探讨,并对3种肿瘤细胞的抗肿瘤活性进行比较.经MTT细胞活力实验验证,发现灵芝孢子油对3种肿瘤细胞的生长均具有一定抑制作用,其抑制强度依次为A549细胞、HepG2细胞、HCT116细胞;Western blot检测结果显示,灵芝孢子油能促进NF-κB通路的激活,3种肿瘤细胞比较下,A549细胞NF-κB信号通路激活程度强,其次为HepG2细胞,对HCT116细胞作用弱;Caspase-3活性检测结果显示,灵芝孢子油能激活Caspase-3依赖的凋亡相关途径,其中对A549细胞Caspase-3酶激活程度强,对HepG2细胞作用较强,对HCT116细胞作用弱.因此,本研究发现,灵芝孢子油对3种肿瘤细胞的生长均具有一定抑制作用,其抗肿瘤活性呈时间剂量依赖性,其机制可能与激活NF-κB通路与Caspase-3凋亡途径加速肿瘤细胞凋亡坏死相关.3种肿瘤细胞生长抑制实验结果显示,灵芝孢子油对A549细胞的抗肿瘤活性明显,其次为HepG2细胞,对HCT116细胞的抗肿瘤活性弱.
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MACC1在结肠癌中的表达及与上皮间质转化的关系
目的：研究MACC1在结肠癌组织中的表达及其在结肠癌EMT过程中的作用。方法：按结肠癌病理分期，将患者标本分位N组（距肿瘤5cm的正常组织）、AB组（ I，II期），CD组（ III，IV期），采用RT-PCR检测MACC1在各组中的表达情况；将融合绿色荧光蛋白（ green fluorescent proteins，GFP）的质粒干扰具有转移能力的结肠癌细胞株HCT116，应用RT-PCR、Western blot检测下调MACC1后EMT相关蛋白（ E-cadherin、Vimentin）表达情况，应用划痕实验和Transwell实验比较转染前后细胞的侵袭迁移能力。结果：RT-PCR结果显示MACC1在结肠癌组织中表达较正常黏膜组织明显增高（ P<0.05）；有淋巴结转移的较未发生淋巴结转移的表达增高（ P<0.05）；HCT116经干扰后，E-cadherin蛋白表达升高、Vimentin蛋白表达降低，侵袭转移能力降低（ P<0.05）。结论：MACC1基因在结肠腺癌组织中过表达，与结肠癌的侵袭、转移密切相关。 MACC1基因促进了结肠腺癌的EMT过程，增强了肿瘤细胞的侵袭转移能力。
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RNA干扰靶向抑制自噬调控基因Beclin 1对结肠癌细胞株HCT116自噬活性及增殖/凋亡的影响
目的 应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制自噬调控基因Beclin 1的表达,检测Beclin 1表达对mTOR、ULK1、LC3-B的表达以及对HCT116细胞株增殖与凋亡的影响.方法 设计4条针对Beclin 1基因的干扰RNA表达载体及阴性对照载体分别瞬时转染HCT116细胞.采用RT-PCR及Western blot法筛选出1条抑制率高的Beclin 1干扰序列后,瞬时转染HCT116细胞,检测mTOR、ULK1及LC3-B的mRNA及蛋白表达,CCK-8实验检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 (1)转染细胞后,BECN1-1245组mRNA及蛋白抑制率高,达80％.(2)RT-PCR结果显示,BECN1-1245组转染细胞48 h后,与阴性对照组相比,ULK1与LC3-B mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P≤0.05),mTOR在两组中的表达无差异(P＞0.05),Western blot法检测结果与之相同.(3)CCK-8细胞增殖实验显示,BECN1-1245组转染24、48、72 h后,细胞生存率较阴性对照组明显降低(P≤0.05).(4)流式细胞仪检测结果显示,BECN1-1245组转染48 h后,与阴性对照组细胞相比,细胞凋亡率明显升高(P≤0.05).结论 Beclin 1在HCT116细胞自噬中发挥重要的调控作用,抑制Beclin 1的表达,可抑制细胞的自噬活性,并能抑制细胞增殖,促进其凋亡,推测Beclin 1基因可作为结肠癌治疗的新靶点.
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dalbinol通过ROS／Dvl／GSK-3β／β-catenin信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制研究
目的探讨天然产物dalbinol对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测dalbinol对人结肠癌HCT116细胞的增殖抑制作用；利用Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化；应用流式细胞术检测细胞凋亡率和 ROS 水平；通过 Western blot法检测Wnt／β-catenin信号通路及凋亡相关蛋白的表达情况。结果 dalbinol 可抑制人结肠癌 HCT116细胞的增殖，且呈剂量和时间依赖性，24、48和72 h 的 IC50分别为（4.8±0.53）、（2.5±0.43）和（0.6±0.22）μmol·L－1；Ho-echst 33342染色观察到细胞皱缩、核固缩和染色质凝集等典型凋亡的形态学变化，同时dalbinol可剂量依赖性地提高细胞凋亡率，且能增加细胞内ROS水平；Western blot结果发现dalbinol通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达水平，上调促凋亡蛋白Bax和Bim的表达，从而促进cleaved caspase-3和cleaved PARP活化裂解，进而诱导细胞凋亡；此外，dalbi-nol通过抑制Dvl-2和GSK3β（pS9）的蛋白表达，从而降低总的β-catenin和胞核β-catenin的表达，但胞质β-catenin无明显变化，终下调Wnt／β-catenin通路下游靶蛋白c-Myc 和Survivin的表达水平。结论 dalbinol 可抑制人结肠癌HCT116细胞增殖并诱导其凋亡，其分子机制可能与提高细胞内ROS水平和抑制Dvl／GSK-3β／β-catenin信号通路有关。
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沉默Prohibitin基因对人结直肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响
目的 siRNA介导抗增殖蛋白Prohibitin (PHB)基因沉默对人结直肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响.方法 通过脂质体LipofectamineTM 2000在HCT116细胞中转染PHB-siRNA,以Western blot来筛选siRNA片段.设立阴性对照NC组和高效沉默PHB138,PHB539 siRNA片段为实验组,重新转染HCT116,通过平板克隆形成实验、CCK-8检测细胞增殖能力;Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡试剂流式细胞术、Caspase-3/ Caspase-9活性检测等方法检测细胞凋亡;Annexin Ⅴ-FITC和Hoechst染色荧光显微镜观察.结果 Western blot结果显示siRNA片段PHB138、PHB539能明显抑制PHB蛋白表达;转染后HCT 116平板克隆形成率分别PHB138 (31.1±4.0)％、PHB539 (12.4±1.2)％、NC (43.4±2.1)％,差异有统计学意义(P＜0.001);CCK8实验发现转染后1～5 d,实验组与对照组比较,细胞增殖未收到显著影响(P＞0.05).在转染第7天,PHB539 siRNA能显著抑制细胞增殖(P＜0.01);Caspase-3活性度为PHB138 (1.50±0.39)、PHB539 (1.81±0.41),Caspase-9活性度PHB138(2.02±0.43)、PHB539 (2.81±0.51),差异有统计学意义(P＜0.05);Annexin Ⅴ-FITC和Hoechst染色均在荧光显微镜下观测有明显的凋亡现象,且凋亡比例和强度比阴性对照强.结论 靶向PHB-siRNA干扰可以有效地沉默结直肠癌细胞HCT116 PHB基因,下调PHB蛋白水平,从而抑制结直肠癌细胞HCT116增殖、促进凋亡.
关键词： Prohibitin siRNA HCT116 细胞增殖 凋亡 -
唑来膦酸诱导结肠癌HCT116细胞株凋亡分子的研究
目的 探讨唑来膦酸诱导结肠癌HCT116细胞凋亡的线粒体途径.方法 分别采用浓度25μmol/L和50 μmol/L的唑来膦酸孵育HCT116细胞48 h,流式细胞仪分析凋亡细胞比例；将标志线粒体膜电位的染料JC-1与唑来膦酸作用24、48、72 h的HCT116细胞避光孵育15 min,荧光显微镜和流式细胞仪观察其红色荧光强度的变化；Western blot分析唑来膦酸作用后48、72 h细胞线粒体和胞质细胞色素C(Cyclin C)含量的改变,细胞线粒体和细胞质Cyclin C的改变.结果 HCT 116细胞和唑来膦酸25μmol/L和50 μmol/L作用48 h后,出现凋亡,凋亡比例分别为(11.6±0.5)％、(49.2±3.4)％(P＜0.01)；唑来膦酸浓度25 μmol/L时,24、48、72 h后JC-1被激发出红色荧光的细胞比例为(96.49±2.10)％、(86.13±3.20)％、(74.23 ±5.30)％ (P ＜0.01)；Western blot显示唑来膦酸作用下,Cyclin C从线粒体内释放至细胞质.结论 线粒体途径是唑来膦酸介导的结肠癌HCT116细胞凋亡的信号途径之一.
