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RYBP在恶性肿瘤发生发展过程中的作用
多梳蛋白(polycomb group,PcG)是一种多细胞有机体的转录抑制因子,主要特征是通过形成多蛋白复合体,参与染色质修饰和靶基因的调控及转录. 研究发现,PcG家族有多个核心成员在肿瘤中的表达与肿瘤发生、发展、侵袭、预后等高度相关. RYBP(Ring 1 and YY1 binding protein)是近年新识别的PcG家族成员之一,主要分布在脐带、胎盘、脑腺垂体和甲状腺组织的细胞核和细胞质中,其中以胎盘和淋巴组织里表达量高[1]. RYBP的作用机制除了参与PcG抑制复合物1(PRC1)的组成和抑制转录功能外,还在胚胎发育、干细胞分化、细胞凋亡和恶性肿瘤发生发展中发挥重要作用[2-4].目前RYBP在肿瘤领域的研究不多而且存在矛盾,作为新的候选抑癌基因,其临床意义有待阐明.
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RYBP慢病毒表达载体的构建及对结肠癌细胞HCT116增殖的影响
目的 构建RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP,包装慢病毒颗粒并感染结肠癌细胞HCT116,分析RYBP的表达及对HCT116细胞增殖的影响.方法 用DNA克隆技术在慢病毒表达载体pWPI-IRES-EGFP序列中引入Flag标签及多个单酶切位点序列,改造后的载体命名为pWPI-linker.采用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)从肝癌SK-Hep-1细胞总RNA中扩增RYBP的全长开放阅读框序列,克隆人pWPI-linker载体中,得到pWPI-RYBP.利用人胚肾细胞HEK293T包装重组慢病毒颗粒,分析该慢病毒颗粒感染HCT116细胞的效率、RYBP蛋白的表达,用MTS方法分析RYBP过表达对HCT116细胞增殖的影响.结果 用改造的pWPI-linker载体成功构建慢病毒表达载体pWPI-RYBP包装的慢病毒颗粒能高效感染HCT116细胞,表达出Flag-RYBP融合蛋白.MTS方法分析表明,RYBP的过表达抑制HCT116细胞的增殖,增殖抑制率达26.1％.结论 改建的慢病毒表达载体pWPI-linker带有可供选择的多个单克隆位点和标签蛋白序列,为今后基于pWPI载体的克隆构建和表达蛋白质的分析提供了极大的便利；RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP的构建为进一步研究RYBP的生物学功能及基因治疗奠定了基础.
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胰腺癌中PcG相关蛋白RYBP的表达及临床意义
目的 探讨PcG相关蛋白RYBP在胰腺癌中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化法检测51例胰腺癌及对应癌旁组织中RYBP的表达,分析其表达与胰腺癌临床病理特征的关系.Kaplan-Meier法分析RYBP表达与胰腺癌患者术后生存时间的关系.结果 RYBP在胰腺癌中的阳性率(31.4％,16/51)明显低于癌旁组织(66.7％,34/51),两者差异有统计学意义(P＜0.05).RYBP表达与患者性别、年龄、吸烟、饮酒、肿瘤数目、有无淋巴结转移和血清CA199水平无明显相关性(P＞0.05),与肿瘤直径及肿瘤病理分级有相关性(P＜0.05).Kaplan-Meier法分析显示RYBP阳性组患者的总生存率明显高于阴性组(P＜0.05).结论 PcG相关蛋白RYBP在胰腺癌中低表达,RYBP表达降低可能与胰腺癌发生、发展密切相关.
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肝细胞癌中PcG相关蛋白RYBP的表达及临床意义
目的：探讨PcG相关蛋白RYBP在肝细胞癌( hepato-cellular carcinoma, HCC)中的表达及其临床意义。方法采用组织芯片技术和免疫组化法检测75例HCC及癌旁组织中RYBP的表达,分析其与HCC临床病理特征的关系。结果 RYBP在HCC中表达明显低于癌旁组织,阳性率分别为33．3%(25/73)、65．3%(49/73),RYBP表达与患者性别、年龄、病理分级、临床分期、肿瘤数目、淋巴结转移无明显相关性(P>0．05),与肿瘤直径及血清AFP水平有相关性(P<0．05)。结论 PcG相关蛋白 RYBP 表达降低可能与 HCC密切相关。
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RYBP介导白血病细胞凋亡的靶基因预测
目的 探讨RYBP介导白血病细胞凋亡的靶基因.方法 利用慢病毒介导的RNA干扰技术,建立多批次RYBP基因稳定沉默的HL60细胞株及空载体对照组(NC);通过二代测序技术对不同批次干扰的上述3对细胞进行mRNA测序及miRNA测序,利用KEGG等生物信息学分析方法,预测靶基因.结果 成功构建RYBP稳定沉默的HL60细胞株.二代测序筛选出明显差异的mRNA及miRNA(P<0.05).Pathway显著性富集分析发现表达下调的基因与氨基酸合成,癌症转录调节紊乱,氨基酸代谢等相关的KEGG pathway有关,详见后述;沉默RYBP后,SPI1与hsa-miR-214-3p均表达降低(P<0.05).结论 RYBP介导白血病细胞凋亡的靶基因可能为:BBC3、BAI1、SESN2、CCNG2、JAK3、STAT4、SPI1、BCL6、CD11b和hsa-miR-214-3p.
