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抗增殖蛋白在肝脏疾病中的研究进展
抗增殖蛋白(Prohibitin ,抑制素)是一种高度保守的蛋白质,广泛分布于细菌、酵母、原虫、植物和哺乳动物等真核生物细胞中,具有高度的同源性.人抗增殖蛋白基因(phb )位于人染色体17q21 ,编码分子量为32 kD 的抗增殖蛋白.抗增殖蛋白作为重要的细胞膜蛋白超家族成员之一,主要存在于线粒体内膜上,发挥着分子伴侣的作用,目前抗增殖蛋白为确定的功能是作为分子伴侣参与稳定细胞线粒体蛋白.
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线粒体途径介导血小板凋亡的研究进展
血小板凋亡是血小板自主有序的死亡,其不是病理状态下自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动采取的一种死亡过程.血小板凋亡是井然有序的过程,大量的分子及途径参与其中.线粒体在调节血小板凋亡过程中发挥关键作用.在血小板凋亡过程中,线粒体通透性转换孔过度开放,引起线粒体跨膜电位降低,并导致多种线粒体蛋白,其中,线粒体内的Bcl-2家族对血小板凋亡具有双向调节作用.研究线粒体在血小板凋亡中的作用机制,对于研究血小板凋亡的调控机制具有重要意义.
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蛋白激酶B与卵巢癌化疗耐药性研究进展
蛋白激酶B(Akt/PKB)是卵巢癌化疗敏感性的关键调控因子,可促进细胞周期运行,血管形成及细胞的生长.抑制细胞凋亡.其过度表达和活化在卵巢癌化疗耐药性的产生中起着重要作用.Akt通过影响p53功能、线粒体凋亡及JNK/p38信号传导等多种途径抑制化疗药物诱导的卵巢癌细胞凋亡,同时还可通过调节抑癌基因PTEN及X-连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)导致化疗耐药的产生.因此,加深对Akt的研究有助于进一步明确卵巢癌化疗耐药产生的机制.并使之成为卵巢癌化疗的有效作用靶点.
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线粒体介导细胞凋亡的研究进展
线粒体在调节细胞凋亡过程中发挥关键性的作用.在细胞凋亡过程中,线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)过度开放,线粒体跨膜电位降低,还会导致一些相关的促凋亡因子,如细胞色素C(cytochrome c)、凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)家族以及膜间隙中的caspase前体蛋白(pro-caspase)等从线粒体释放到胞质中,同时线粒体内的Bcl-2家族对细胞凋亡具有双向调节作用.研究线粒体在细胞凋亡中的作用机制,对于研究细胞凋亡的调控机制具有非常重要的理论意义.笔者以线粒体及细胞凋亡的新研究进展为基础,对线粒体在介导细胞凋亡中的关键性作用进行综述.
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线粒体蛋白Bcl-2和Bax在肿瘤发生中作用的初步探讨
目的:研究线粒体蛋白(MAB1273)、Bcl-2、Bax在肾细胞癌(RCC)组织内的表达及相关性分析.方法:采用免疫组织化学SP方法检测9例嗜酸细胞瘤、6例嫌色细胞癌、23例透明细胞癌以及12例正常肾组织中MABl273、Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:MABl273和Bel-2在嗜酸细胞瘤、嫌色细胞癌、透明细胞癌中表达明显高于正常肾组织(P=0.006,P=0.008).Bax在各组间表达无明显差异(P=0.057).通过秩相关分析,MAB1273的表达与Bcl-2的表达呈正相关(r=0.341,P=0.015),而Bcl-2表达与Bax表达呈负相关(r=-0.287,P=0.043).结论:线粒体蛋白及Bcl-2的高表达、Bax低表达可能共同参与了肾嗜酸细胞瘤、嫌色细胞癌及透明细胞癌的发生,提示线粒体蛋白表达异常参与RCC细胞凋亡调控过程.
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近3年线粒体介导细胞凋亡的研究进展
线粒体是细胞活动的“动力工厂”,在调节细胞生存凋亡过程中发挥关键性的作用.在细胞凋亡过程中,线粒体膜通透性转换孔过度的开放会促使线粒体跨膜电位降低,导致一些相关的促凋亡因子,如细胞色素C凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)家族以及膜间隙中的Caspase前体蛋白(procaspase)等从线粒体中释放进入胞质,共同参与对细胞的调节.研究线粒体对细胞凋亡的机制,对于研究调控细胞凋亡具有极其重要的理论意义.本研究以线粒体对细胞凋亡作用近3年研究为基础,对线粒体介导细胞凋亡中的作用机制进行综述.
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样品沉淀方法对线粒体蛋白指纹图谱分析影响
目的 比较不同方法沉淀乳腺癌线粒体蛋白对Au芯片分析的影响,为Au芯片研究亚细胞蛋白奠定基础.方法 提取体外培养乳腺癌细胞MCF-7的线粒体蛋白,分别采用丙酮沉淀,三氯醋酸-丙酮(TCA-丙酮)沉淀,饱和( NH4)2SO4沉淀处理样品,点样Au蛋白芯片,表面增强激光解析蛋白飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析蛋白指纹图谱,Biomaker Wizard Software分析软件收集数据.结果 每种方法均重复试验20次,在质荷比(m/z)2000～100 000范围内检测蛋白点数目,统计结果分别为TCA-丙酮沉淀39个,丙酮沉淀71个,饱和(NH4 )2SO4沉淀14个；选择8.6、10.0、11.3、14.0和15.6kD 5个含量较高的蛋白作为标志,采用q检验进行两两分析,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 对分子量(Mr) ＜11 kD的蛋白,丙酮沉淀处理可以获得较好的蛋白指纹图谱,对Mr＞11kD的蛋白TCA-丙酮沉淀处理结果好,综合使用2种方法分别处理样品上样Au芯片可以获得好的线粒体蛋白分析结果.
关键词： Au芯片 线粒体蛋白 丙酮沉淀 三氯醋酸-丙酮沉淀 饱和(NH4)2SO4沉淀 -
不同氧浓度培养小鼠肝细胞线粒体蛋白的蛋白质组学研究
目的 采用蛋白质组学方法 研究低氧和高氧条件下培养小鼠肝细胞线粒体蛋白表达的变化情况并探讨其病理生理学意义.方法 直接消化法分离C<,57>BU6小鼠肝细胞,分别于低氧、高氧或常氧条件下培养8 h后提取线粒体蛋白,然后采用双向电泳法(2-DE)分离差异表达的蛋白,凝胶银染后切取差异蛋白点进行基质辅助激光解析电离飞行时间(MALTI-TOF)质谱检测,时获取的数据采用Mascot软件在NCBInr数据库内检索.结果 共检测出19种差异表达的线粒体蛋白.低氧组小鼠肝细胞线粒体蛋白图谱中有16个蛋白点表达量与常氧组有统计学差异(P<0.05);高氧组小鼠有12个蛋白点表达量与常氧组有统计学差异(P<0.05),其中低氧组和高氧组均与常氧组有统计学差异的蛋白点有9个(P<0.05).结论 高氧时线粒体复合体Ⅲ高表达可能是造成细胞氧化损伤的基本病理基础,而超氧化物歧化酶2表达上调可以清除过多的活性氧;与此同时,参与损伤基因修复的与残基x相连的二磷酸核苷表达增多可以减轻细胞内的氧化损伤.
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线粒体蛋白表达与原发性胆汁性肝硬化病情进展的相关性
目的 探讨线粒体蛋白对于原发性胆汁性肝硬化(PBC)病情进展的诊断价值.方法 收集120例PBC患者肝组织活检标本,其中60例为PBC初期破坏性胆管炎期,60例为PBC终末期肝硬化期,通过AST和ALT水平、免疫组织化学染色及小胆管与胆管量化分析,探究丙酮酸脱氢酶复合-E2(PDC-E2)、细胞色素C氧化酶亚型Ⅰ(CCO)、微管相关蛋白轻链3β (LC3)、p62、p16INK4a及p21WAF1/Cip1与PBC病情进展的相关关系.结果 PBC终末期小胆管区域的PDC-E2和CCO表达明显高于PBC初期患者,差异均有统计学意义(均P＜0.05).PBC终末期和初期患者胆管区域的PDC-E2、CCO、LC3、p62、p16INK4a及p21WAF1/Cip1表达差异均无统计学意义(均P＞0.05).血清AST和ALT水平与两种胆管的LC3的表达呈正相关(r=0.482、0.492、0.588、0.522,均P＜0.05),且与胆管内p16INK4a及p21WAF1/Cip1的表达呈正相关(r=0.440、0.612、0.584、0.472,均P＜0.05).结论 小胆管的线粒体蛋白表达的情况也作为评估PBC疾病进展的有效标记物,与转氨酶水平呈现正相关.
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Smac siRNA慢病毒载体的构建及其对Smac基因沉默效果的鉴定
背景 研究证实半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活剂(Smac)蛋白是肿瘤细胞的促凋亡蛋白,我们先前的研究表明,Smac蛋白在白内障患者LECs中表达量明显高于正常人,因此推测沉默LECs中Smac的表达可抑制LECs的过度凋亡,但如何成功将Smac siRNA转染进入LECs是研究的关键. 目的 构建人Smac siRNA慢病毒载体并对人LECs进行感染,研究慢病毒载体构建方法及其在人晶状体上皮细胞HLE-B3中的干扰效率,利用RNA干扰(RNAi)技术建立Smac低表达的HLE-B3株. 方法 根据我们前期的工作设计并合成针对Smac基因序列的siRNA序列,将合成的双链DNA以T4噬菌体DNA连接酶与GV118慢病毒载体相连接,转化DH5α感受态细胞,采用PCR筛选阳性克隆,经测序鉴定正确后,感染293T细胞,收集上清液并标定病毒滴度.用重组慢病毒感染HLE-B3细胞,荧光显微镜下观察转染后的阳性HLE-B3细胞数并计算病毒感染复数(MOI).将常规培养的HLE-B3细胞分为阴性对照组、空质粒组和GV 118-Smac-siRNA1组,阴性对照组为常规培养的细胞,空质粒组细胞仅转染不含慢病毒载体的siRNA质粒,GV118-Smac-siRNA1组细胞转染GV118-Smac-siRNA1质粒,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中Smac mRNA的相对表达量. 结果 构建的重组载体GV118-Smac-siRNA1转化DH5α感受态细胞后阳性克隆产物大小为340 bp,空载的克隆产物为299 bp,与预期结果相符,测序结果显示合成的Smac-siRNA1与预期目的序列一致.构建的GV118-Smac-siRNA1病毒滴度为3.0×108 TU/ml.感染HLE-B3细胞后荧光显微镜下可见MOI为100时,细胞毒性低且感染效率高,约为82％.阴性对照组、空载质粒组和GV118-Smac-siRNA1质粒组细胞中Smac mRNA相对表达量分别为(101.290±8.349)％、(92.330±6.320)％和(32.540±4.221)％,3个组间总体比较差异有统计学意义(F=32.871,P＜0.01),其中GV118-Smac-siRNA1质粒组细胞中Smac mRNA相对表达量较阴性对照组明显下降,差异有统计学意义(P=0.000),而空载质粒组细胞中Smac mRNA相对表达量略低于阴性对照组,但组间差异无统计学意义(P=0.535). 结论 本研究中成功构建了siRNA慢病毒载体GV118-Smac-siRNA1,其转染HLE-B3效率高,该siRNA载体能够有效地抑制人LECs中Smac基因的表达.
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促凋亡线粒体蛋白BNIP3的表达调控与功能
Bcl2家族蛋白是参与调节细胞凋亡的主要家族之一.所有家族成员的蛋白结构中包含至少一个Bcl2同源结构域(BH1～BH4).Bcl2家族蛋白分为两大类:①抗凋亡蛋白亚类,包括Bcl2、Bcl-XL、 Bcl-w、 Bfl-1、MCL-1等蛋白;②促凋亡蛋白亚类,包括含有BH1～BH3结构域的BAX、 Bak与 Bok蛋白和仅包含BH3结构域的Bim、 Bad、 BNIP3、 NIX、 Puma和 NOXA等蛋白[1].其中,BNIP3和NIX是仅有的两个受低氧诱导因子(hypoxic inducible factor 1,HIF1)调控的Bcl2家族蛋白[2,3].本文将对BNIP3(Bcl2/adenovirus E1B 19 kD protein interacting protein 3)的结构、功能、表达与调控和其在恶性肿瘤中的表达与作用研究现状进行较为全面的阐述.
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小鼠前脑线粒体蛋白的增龄性变化
目的 探讨小鼠前脑不同发育阶段线粒体蛋白的表达变化. 方法 分别取妊娠12.5 d(E12.5)及17.5 d(E17.5)的胎鼠、出生2d的新生鼠、出生3周的幼鼠和2月龄成年鼠的前脑组织,利用QRT-PCR和Western blotting检测小鼠前脑发育不同阶段中COX IV、HSP60、OGDH、PDHE1α的mRNA和蛋白表达水平.结果 在E12.5 ～2 d的前脑组织中COX IV mRNA呈低水平表达,3周时表达量明显升高并达到顶峰;HSP60和PDHE1 αmRNA在E17.5表达明显增高,OGDH mRNA则在2d显著上升,三者表达水平均于2月达到顶峰.COXⅣ、HSP60、OGDH的蛋白水平从E12.5 ～3周无明显差异,但在2月时表达显著上升;PDHE1α蛋白随前脑发育其表达水平不断提高,并于2月达到高峰.此外,COX IV、HSP60、OGDH、PDHE1α mRNA与蛋白表达水平呈正相关. 结论 COX IV、HSP60、OGDH和PDHE1α可能参与了小鼠前脑发育过程且与年龄密切相关.
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线粒体蛋白在缺血性心脏病活性氧生成中的作用
缺血性心脏病(IHD)每年可造成超过700万人死亡,已成为导致死亡的重要原因.缺血性心脏病时冠状动脉堵塞会造成心肌细胞的不可逆损伤甚至死亡.作为调控心肌细胞能量及凋亡的重要细胞器,线粒体在缺血性心脏病中发挥着关键调节作用.缺血损伤可降低心肌ATP产量,导致能量供应不足及活性氧(ROS)过量产生.迄今为止,许多研究表明线粒体蛋白质如电子传递链(ETC)复合物、解偶联蛋白(UCP)、线粒体动态蛋白、线粒体外膜转位酶(Tom)复合物、线粒体通透性转换孔(MPTP)等可直接或间接地影响线粒体ROS的产生,从而决定线粒体功能障碍和心肌损害的程度.本文将对目前缺血性心脏病中线粒体功能蛋白与活性氧生成两者之间关系的相关研究结果作一综述.
