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中药望江南子抗真菌蛋白成分研究
以往中药研究较少涉及蛋白质成分的作用.前人曾报道望江南(Cassia occidentalis L.)种子和其它同属药用植物种子的水浸剂有抑制多种人体真菌活性,并确定决明(C.obtusifolia L)和小决明(C.tora L.)的种子中小分子化合物为活性成分.本实验以绿色木霉(Trichoderma viride Persoon ex Friex Accc30048)和红色酵母为指示菌,发现中药望江南子和决明子的水溶性成分均有抗真菌活性,但经蛋白变性处理或热处理后,望江南子的抗真菌活性丧失.经含DDT和PVPP的缓冲液低温抽提、一20℃丙酮沉淀及在FPLC上进行Superdex 75(16/88)凝胶过滤、Mono S(5/5)离子交换层析和RESOUCE PHE(1ml)疏水层析,从望江南种子中纯化到一种相对分子量28 000的单链抗真菌蛋白(Co-AFP).本工作首次从决明属植物望江南的种子中发现了抗真菌蛋白,为药用植物活性蛋白的进一步研究创造了条件.
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样品沉淀方法对线粒体蛋白指纹图谱分析影响
目的 比较不同方法沉淀乳腺癌线粒体蛋白对Au芯片分析的影响,为Au芯片研究亚细胞蛋白奠定基础.方法 提取体外培养乳腺癌细胞MCF-7的线粒体蛋白,分别采用丙酮沉淀,三氯醋酸-丙酮(TCA-丙酮)沉淀,饱和( NH4)2SO4沉淀处理样品,点样Au蛋白芯片,表面增强激光解析蛋白飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析蛋白指纹图谱,Biomaker Wizard Software分析软件收集数据.结果 每种方法均重复试验20次,在质荷比(m/z)2000～100 000范围内检测蛋白点数目,统计结果分别为TCA-丙酮沉淀39个,丙酮沉淀71个,饱和(NH4 )2SO4沉淀14个；选择8.6、10.0、11.3、14.0和15.6kD 5个含量较高的蛋白作为标志,采用q检验进行两两分析,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 对分子量(Mr) ＜11 kD的蛋白,丙酮沉淀处理可以获得较好的蛋白指纹图谱,对Mr＞11kD的蛋白TCA-丙酮沉淀处理结果好,综合使用2种方法分别处理样品上样Au芯片可以获得好的线粒体蛋白分析结果.
关键词： Au芯片 线粒体蛋白 丙酮沉淀 三氯醋酸-丙酮沉淀 饱和(NH4)2SO4沉淀 -
中华稻蝗超氧化物歧化酶的提纯
超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内的一种清除超氧离子的重要酶类.人类的多种疾病与SOD的活性变化有关.本文以中华稻蝗为原料,经丙酮沉淀和硫酸铵盐析提纯SOD,取得了较好的效果,现简述如下.
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墓头回提取物作用白血病K562细胞蛋白双向电泳方法的建立
目的 建立适用于体外培养的K562细胞总蛋白的双向电泳图谱,提高电泳分辨率和重复性,以进一步了解中药墓头回作用于白血病细胞的新机制.方法 采用标准裂解法提取K562细胞总蛋白,后续进行丙酮沉淀和三氯乙酸/丙酮沉淀,分别比较一步裂解法所得蛋白和丙酮沉淀法、三氯乙酸/丙酮沉淀法所得蛋白的双向电泳图谱,优选佳的样品制备方法.此外在等电聚焦时,聚焦电压在传统聚焦条件上进行优化.结果 丙酮沉淀法不仅能减少蛋白降解,而且增加蛋白的溶解性,因此丙酮沉淀法所得蛋白的双向电泳图谱显示出更好的溶解性和重复性,在聚焦条件上对传统聚焦条件的优化使横向和纵向拖尾有明显改善,所得图谱蛋白点更清晰,分离更完全,能获得分辨率较高的双向电泳图谱.结论 在标准裂解液提取蛋白基础上结合丙酮沉淀法更适于制备K562细胞的双向电泳样品,等电聚焦(IEF)电泳时适当延长除盐时间能更有效的分离K562细胞全蛋白,而且后续实验证明此方法同样成功建立了墓头回作用白血病K562细胞蛋白和肿瘤组织蛋白2 - DE图谱.
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大孔吸附树脂和丙酮沉淀分离纯化西洋参中人参二醇类和三醇类皂苷
目的:建立从西洋参中提取分离纯化人参二醇类和三醇类皂苷的方法.方法:用大孔吸附树脂从西洋参提取物中富集西洋参总皂苷,再利用丙酮沉淀分离得到人参二醇类和三醇类皂苷.结果:得到含量大于85%的人参二醇类皂苷(收率4.0%),含量大于60%的人参三醇类皂苷(收率1.0%).结论:此法较好地分离了人参二醇类和三醇类皂苷,该方法简单、实用,适合于工业化大生产.
关键词： 西洋参 人参二醇类和三醇类皂苷 大孔吸附树脂 丙酮沉淀 分离纯化
