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子宫内膜细胞色素P450芳香化酶的表达研究进展
细胞色素P450芳香化酶(aromatase cytochrome P450, P450 arom)能催化C19雄激素转化为雌激素,是雌激素合成的关键酶之一。P450 arom位于细胞内质网,在体内多种雌激素合成部位表达,如卵巢颗粒细胞、脂肪组织、胎盘合体滋养层细胞、脑细胞等。近年的研究发现P450 arom在子宫内膜上也有表达,能促进子宫内膜局部雌激素的转化,现对其在子宫内膜的研究进展综述如下。细胞色素P450芳香化酶的结构特征 P450 arom与其它细胞色素P450异构体的结构类似。C端为血红素结合区,该区含有保守的半胱氨酸残基,可作为含铁血红素的第5个配位配基。该区上游有2个保守区,一个由20个以上氨基酸构成,一个为高度保守的部分I螺旋。N端由疏水氨基酸组成,但在有些情况下,连接N端的是糖基序列[1]。 P450 arom是CYP 19基因的产物,是细胞色素P450产物中唯一由单基因编码的酶。CYP 19是细胞色素P450基因超家族成员之一。随着分子生物学技术的发展,对CYP 19基因的结构及调节有了较深入的了解。人CYP 19基因位于染色体15 q 21.1,该基因的开放阅读框包含9个外显子,II~X,其中翻译起始位点位于外显子II。基因至少长75 kb,在第一个编码外显子II上游有4个未翻译外显子,I.1~4,在后一个编码外显子X上有血红素结合区(heme-binding region,HBR),同时,该外显子还有两个选择性多聚腺苷酸位点,可产生两种长度不等的转录产物,分别为3.4和2.9 kb(图1)。 CYP 19基因的主要特点是其具有组织特异性表达。用聚合酶链反应(PCR)和快速扩增互补DNA末端(rapid amplification cDNA end,RACE)检测发现,CYP 19基因在不同组织的转录产物5’末端不相同[3-4]。在胎盘组织,转录产物5’末端主要为未翻译外显子I.1,I.2<1%;在卵巢,5’末端为外显子II;而在脂肪细胞,不同条件下,有3种不同的5’末端,I.4、I.3和II。这种组织特异性在于该基因的组织特异性启动子调节。在胎盘,转录运用远端启动子I.1;在卵巢为近端启动子II;脂肪组织为启动子I.4、I.3及II。CYP 19基因这种运用选择性启动子调节组织特异性表达的特点,对人体不同部位雌激素的合成调节具有重要意义。
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肿瘤抗原MAGE-A:潜在的肿瘤标志物
黑色素瘤抗原基因(melanoma antigen gene,MAGE)家族是肿瘤相关抗原,包括60多个家族成员.基于组织特异性表达和基因结构的不同,M AGE家族被分成两个大的子家族,MAGE-Ⅰ和MAGE-Ⅱ.MAGE-Ⅰ包含MAGE-A,MAGE-B和MAGE-C亚家族,在多种癌组织中高表达,并且在肿瘤发生和生长方面起重要的作用[1].MAGE-Ⅱ包括MAGE-D亚家族,其在正常人体内普遍表达.MAGE-A肿瘤相关抗原在极少的正常组织巾表达,典型的包括精原细胞、胸腺、胚胎.
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两种启动子调控下PNP基因载体的构建和差异性表达
目的:分别构建巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)通用启动子和甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)杂合启动子[HRE]AF调控的PNP基因表达载体并检测、分析二者的差异表达.方法:将[HRE]AF启动子插入载体pcDNA3.0,构建肝癌细胞特异表达载体p[HRE]AF;将PNP基因分别插入pcDNA3.0和p[HRE]AF,构建两种启动子调控的PNP基因表达载体pcDNA3.0/PNP和p[HRE]AF/PNP;经酶切、PCR及测序鉴定各重组体.用脂质体介导法将两PNP基因载体转染不同细胞株,RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中表达,分析二者表达的特点.结果:各目的片段均成功插入相应载体中,CMV启动子调控的PNP基因在各株细胞中均实现了表达,而[HRE]AF启动子调控的PNP基因则在AFP阳性和阴性肝癌细胞中实现了组织特异性表达.结论:两PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效的治疗载体,p[HRE]AF/PNP还实现了在AFP阳性,尤其是AFP阴性肝癌细胞中的靶向性表达.
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糖尿病患者血浆抵抗素与血糖、血脂和胰岛素抵抗的关系
抵抗素是2000年发现的一种新型的脂肪激素[1],在白色脂肪组织特异性表达,具有升高血糖、对抗胰岛素的作用.本研究观察糖尿病患者血浆抵抗素的变化,并分析它与胰岛素抵抗的相关性.
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SATB1基因与细胞凋亡的研究进展
SATB1是一种组织特异性表达的核基质序列特异性结合蛋白,参与染色质高级结构的形成和组织特异性基因的表达调控,在免疫调节、肿瘤转移和凋亡方面发挥着重要的作用.本研究就SATB1基因与细胞凋亡的研究进展作一综述.
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丹参中转录因子SmMYB87基因的克隆、亚细胞定位和表达分析
目的 克隆丹参Salvia miltiorrhiza中第14亚群R2R3 MYB转录因子基因SmMYB87的全长序列,并对其进行生物信息学和表达分析.方法 以丹参总RNA为模板,利用同源克隆和cDNA快速扩增(RACE)技术获得SmMYB87 cDNA全长序列.运用生物信息学软件对该基因及其编码蛋白进行结构和理化性质分析,利用qRT-PCR测定SmMYB87在各器官中的表达并构建融合表达载体pTF-486-SmMYB87分析SmMYB87蛋白的亚细胞定位.结果 SmMYB87基因含有2个内含子和1个732 bp的开放阅读框(ORF),编码243个氨基酸.该基因在根、茎、叶和花中均有表达,且4个器官中的表达量没有显著差异.SmMYB87蛋白在细胞核和细胞膜上均有分布.结论 SmMYB87的序列结构和表达分析为进一步研究其在丹参中的生物学作用奠定了理论基础.
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2型糖尿病患者中血清抵抗素与血脂代谢关系研究
抵抗素(resistin)是2000年发现的一种新型的脂肪激素,在白色脂肪组织特异性表达,具有升高血糖、对抗胰岛素的作用,这是一种仅在白色脂肪组织中表达的mRNA,由此基因所编码的蛋白质,因具有对抗胰岛素的功能而被命名为抵抗素.
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脂联素与2型糖尿病肾病患者内皮功能及炎症状态的关系
近年研究提示由脂肪组织特异性表达的脂肪细胞因子一脂联素与糖尿病肾病有关[1,2].糖尿病是严重危害人们健康和生活质量的一种常见病、多发病,糖尿病肾病(DN)是严重影响预后的并发症之一.糖尿病肾病的发病与炎症及内皮功能受损密切相关[3].脂联素通过胰岛素敏感化、抗炎、抗氧化等途径对内皮起保护功能,同时是一种重要的负性炎性调节物质.血管细胞黏附分子(VCAM-1)及hsCRP是重要的炎症因子,与血管内皮受损密切相关,有研究提示其与脂联素有关.本研究选择VCAM-1和hsCRP作为内皮受损和炎症反应的标记物,观察DN患者血清 ADPN和 VCAM-1、hsCRP的水平变化, 探讨脂联素与DN病程进展中内皮功能损伤及炎症反应的关系.
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GLUT4-Cre转基因模型建立与Cre酶特异性表达
目的建立骨骼肌和脂肪组织特异性表达Cre重组酶基因的转基因小鼠,以期在上述组织细胞中实现相关基因的条件性剔除.方法选择人葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因的启动子驱动Cre重组酶的特异性表达,利用基因重组技术,构建GLUT4-Cre转基因表达质粒.通过显微注射法将该质粒导入小鼠受精卵细胞核,获得的新生鼠经PCR和Southern杂交方法进行基因型的分析鉴定,常规方法培育、传代转基因鼠.用RT-PCR和免疫组化法对Cre酶在阳性转基因鼠体内mRNA和蛋白表达水平进行检测.结果获得5只阳性转基因首建鼠,其中3只已建系并稳定传代.在脑、脂肪组织中检测到Cre基因表达,而心肌、骨骼肌及肝脏组织中未检出转基因表达.结论成功构建了在脑、脂肪组织中特异性表达Cre的转基因鼠,为研究与2型糖尿病、胰岛素抵抗等相关的条件性基因剔除小鼠模型的建立奠定了基础.
关键词: 葡萄糖转运蛋白4 Cre-Loxp重组系统 转基因鼠 组织特异性表达 -
浙贝母生物碱合成相关基因DXR组织特异性表达研究
研究利用实时荧光定量PCR技术检测浙贝母生物碱合成相关基因DXR在浙贝母品种宽叶、狭叶、新梅园根、茎、叶、花、新鳞茎和老鳞茎中的表达情况.结果表明:不论是宽叶、狭叶还是新梅园浙贝母, 每个组织内都存在DXR基因的表达.浙贝母在同一时期, 生物碱合成相关基因DXR基因在不同组织里表达存在显著差异, 如宽叶的根、茎、叶、花, 新、老鳞茎DXR基因的表达量分别为0.130 42, 0.071 25, 0.698 60, 0.541 67, 0.039 02和0.041 27.且在同一时期狭叶、宽叶、新梅园3个品种的浙贝母新鳞茎组织内DXR基因的表达量也不同, 分别为0.069 97, 0.039 02和0.014 10.研究为下一步探究DXR基因调控浙贝母甾体生物碱合成代谢机制奠定基础.
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脂联素与2型糖尿病肾病的研究进展
近年来,脂肪组织的内分泌功能越来越受到人们的重视,由脂肪组织特异性表达的脂肪细胞因子-脂联素与动脉粥样硬化、胰岛素抵抗、代谢综合征等的关系已有较多研究,并且进一步研究发现脂联素与糖尿病主要微血管并发症之一-糖尿病肾病有关,后者已成为终末期肾病以及透析患者的主要原因.然而,对脂联素与糖尿病肾病的研究甚少,本文复习诸多文献,就脂联素与糖尿病肾病的关系作如下综述.
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肿瘤相关基因的选择性剪接
选择性剪接(alternative splicing)又称变位剪接或可变剪接,指的是从一个mRNA前体通过选择不同的剪接位点组合产生不同的mRNA剪接变异体的过程.该过程是生物界普遍存在的现象,它在机体发育、组织特异性表达、疾病发生和发展等方面起重要作用,是生物体内一种基本且重要的调控机制.近年来,越来越多的研究显示,在人类肿瘤发生发展过程中RNA的选择性剪接扮演着重要的角色.
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肝癌组织特异性Pafp IRES2-EGFP表达载体的构建及表达
目的 构建AFP小启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体,观察其在小鼠H22肝癌细胞中的特异性表达.方法 从H22细胞总DNA和荧光载体pIRES2-EGFP中分别PCR扩增AFP小启动子区序列和CMV增强子(ECMV),利用重叠延伸PCR方法(SOE)获得AFP启动子驱动的嵌合调控序列,将其克隆入pIRES2-EGFP载体,进行菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列测定.通过jetPEI方法转染H22肝癌细胞和YAC1淋巴瘤细胞,荧光显微镜下观察其表达的组织特异性.结果 从小鼠H22细胞DNA和pIRES2-EGFP中分别扩增得到229bp和324bp的片段,纯化后的PCR产物通过SOE扩增得到-537bp的条带,均与预期序列长度一致.SOE产物与pIRES2-EGFP连接,菌落PCR鉴定获得数个阳性克隆,质粒经Nde I+Nhe I限制性酶谱分析酶解出537bp条带,DNA序列分析证实重组载体中的嵌合DNA与GeneBank中小鼠AFP启动子和ECMV序列完全一致.结论 本研究成功构建了AFP启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达外源基因.
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A33抗原表达调控机制及其抗体导向肿瘤放射免疫治疗
人肠上皮细胞表面抗原A33是一种在人胃肠道上皮细胞特异性表达的跨膜糖蛋白,在95%以上的大肠癌、63%的胃癌和50%的胰腺癌中表达,而在其它组织或其它肿瘤细胞中鲜有表达.近年来就A33的组织特异性表达模式进行了深入的研究,揭示了与A33的特异性表达相关的特异性启动子和组织特异性转录因子(GKLF、CDX1).A33抗体导向下的直肠癌放射免疫治疗已成为单克隆抗体(monoclonal antibody,MCAB)导向治疗研究领域的热点,且已经进入Ⅰ期放射免疫治疗临床实验.
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CK13基因5′旁侧活性与其组织特异性表达的相关性研究
目的检测CK13基因5′旁侧在不同细胞中的报告基因活性,探讨CK13基因组织特异性表达及上皮性肿瘤中异常表达与CK13基因5'旁侧活性的关系.方法采用报告基因分析的方法,构建CK13基因5'旁侧513bp与氯霉素乙酰转移酶报告基因载体pCAT-Enhancer的重组体,并通过脂质体介导的转染技术导入不同细胞,检测该重组体报告基因的瞬间表达,探讨CK13基因5'旁侧报告基因载体在不同细胞中的活性.同时采用Northern-blot的方法检测这些细胞中CK13基因的表达情况,探讨CK13基因组织特异性表达与其5'旁侧活性的关系.结果不同类型细胞中的CK13基因5'旁侧报告基因活性不一,报告基因活性很低的细胞不表达CK13基因,报告基因活性很强的细胞明显表达CK13基因.结论 CK13基因组织特异性表达及上皮性肿瘤中异常表达与CK13基因5'旁侧活性明显相关.
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肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立
[目的]制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究提供一个实用方便的模型.[方法]重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40 polyA的转基因载体pTRE-HCV-C,以显微注射的方法将1.153 kb的转基因片段注入BALB/C母鼠的受精卵,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定.用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的另一品系转基因小鼠杂交,得到子代F1小鼠,通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达.[结果]产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠,以及它的子代也带有此基因.与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后,得到子代F1小鼠,特定时间与DOX作用后,小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明,TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具.[结论]成功制备了HCV-C转基因小鼠,可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具.
关键词: HCV-C 丙型肝炎病毒核心蛋白 转基因小鼠模型 四环素调控系统 组织特异性表达 -
应用PEG-3启动子实现靶向性肿瘤基因治疗
目前使用的组织特异性表达的基因启动子大致可分两类:正常组织细胞中特异表达蛋白的基因启动子和疾病状态下组织细胞过表达或特异表达蛋白的基因启动子.研究和应用多的有甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、黑色素瘤的酪氨酸酶(Tyr)及前列腺特异性抗原(PSAP)等基因启动子.但是,这些启动子只局限于某一种或几种特定组织类型的肿瘤而不能广泛作用于不同组织类型的肿瘤细胞,且表达效率不高.而由哥伦比亚大学教授FISHER等[1]发现的PEG-3(Progression-elevated gene-3)是识别肿瘤细胞的特异性标记,其启动子能对大部分不同组织类型的肿瘤细胞实现靶向性基因表达.通过PEG-3实现基因药物对肿瘤细胞的选择性识别与攻击,从而克服肿瘤靶向性治疗的关键障碍.本文就PEG-3启动子的发现,现阶段的研究成果以及应用前景作一综述.
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骨唾液蛋白的糖基化与功能
骨唾液蛋白(bone sialoprotein,BSP)是细胞外基质中的一种酸性糖蛋白,主要由成骨细胞、破骨细胞及软骨细胞合成,其含量约占骨细胞外基质中非胶质蛋白质的15%[1-2].BSP的分布相对局限,主要在矿化组织特异性表达.在胎盘滋养层细胞、血小板和多种骨转移瘤中也能检测到BSP的表达.近年来的研究表明,BSP具有细胞黏附性能,参与细胞黏附、细胞转移和信号识别,不仅能介导成纤维细胞、成骨细胞和破骨细胞黏附于骨基质表面,BSP以及与整合素受体结合还直接影响癌转化细胞的转移能力,并对血管生成有促进作用.