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子宫内膜细胞色素P450芳香化酶的表达研究进展
细胞色素P450芳香化酶(aromatase cytochrome P450, P450 arom)能催化C19雄激素转化为雌激素，是雌激素合成的关键酶之一。P450 arom位于细胞内质网，在体内多种雌激素合成部位表达，如卵巢颗粒细胞、脂肪组织、胎盘合体滋养层细胞、脑细胞等。近年的研究发现P450 arom在子宫内膜上也有表达，能促进子宫内膜局部雌激素的转化，现对其在子宫内膜的研究进展综述如下。细胞色素P450芳香化酶的结构特征 P450 arom与其它细胞色素P450异构体的结构类似。C端为血红素结合区，该区含有保守的半胱氨酸残基，可作为含铁血红素的第5个配位配基。该区上游有2个保守区，一个由20个以上氨基酸构成，一个为高度保守的部分I螺旋。N端由疏水氨基酸组成，但在有些情况下，连接N端的是糖基序列［1］。 P450 arom是CYP 19基因的产物，是细胞色素P450产物中唯一由单基因编码的酶。CYP 19是细胞色素P450基因超家族成员之一。随着分子生物学技术的发展，对CYP 19基因的结构及调节有了较深入的了解。人CYP 19基因位于染色体15 q 21.1，该基因的开放阅读框包含9个外显子，II～X，其中翻译起始位点位于外显子II。基因至少长75 kb，在第一个编码外显子II上游有4个未翻译外显子，I.1～4，在后一个编码外显子X上有血红素结合区(heme-binding region,HBR),同时，该外显子还有两个选择性多聚腺苷酸位点，可产生两种长度不等的转录产物，分别为3.4和2.9 kb(图1)。 CYP 19基因的主要特点是其具有组织特异性表达。用聚合酶链反应(PCR)和快速扩增互补DNA末端(rapid amplification cDNA end,RACE)检测发现，CYP 19基因在不同组织的转录产物5’末端不相同［3-4］。在胎盘组织，转录产物5’末端主要为未翻译外显子I.1，I.2<1%；在卵巢，5’末端为外显子II；而在脂肪细胞，不同条件下，有3种不同的5’末端，I.4、I.3和II。这种组织特异性在于该基因的组织特异性启动子调节。在胎盘，转录运用远端启动子I.1；在卵巢为近端启动子II；脂肪组织为启动子I.4、I.3及II。CYP 19基因这种运用选择性启动子调节组织特异性表达的特点，对人体不同部位雌激素的合成调节具有重要意义。
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核受体系统对P540芳香化酶的调节作用
芳香化酶(P450 aromatase, P450 arom)作为体内雌激素生物合成的限速酶,主要分布于人体性腺、骨骼、脂肪和大脑等雌激素的靶器官.核受体及其配体在许多生物学领域中具有重要的生理作用和治疗应用价值,近期的研究发现核受体通过组织特异性P450 arom启动子调节不同组织中芳香化酶的表达.
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卵巢颗粒细胞中胰岛素和雄激素对芳香化酶和5α-还原酶1影响的研究
目的 研究卵巢颗粒细胞中胰岛素对睾酮激素转化过程的影响.方法 选用人卵巢颗粒细胞瘤样细胞系(KGN)作为研究对象.应用RT-PCR分析KGN细胞在梯度睾酮(1.25、2.5、5、10、20 ng/ml)及胰岛素(1、10、100 ng/ml)处理4 h后CYP19a1和5RD5A1 mRNA水平;Western-blot检测高浓度睾酮(10、20 ng/ml)及梯度胰岛素处理KGN细胞24 h后芳香化酶和5α-还原酶1蛋白水平;同步收集上清,应用放射性免疫法及酶联免疫法检测培养液上清睾酮、雌二醇及双氢睾酮的浓度.结果 胰岛素剂量依赖性地上调CYP19a1的表达和活性,增加睾酮向雌二醇的转化;同时抑制5RD5A1的表达和活性,抑制睾酮向双氢睾酮的转化;转化比例改变但消耗水平不变,导致睾酮的异常累积.结论 高雄激素环境下,胰岛素可通过影响睾酮转化酶促使睾酮转化异常.本实验为高胰岛素及高雄激素水平在卵巢微环境相互作用加剧PCOS病程提出了可能的机制.
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罗格列酮对多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞芳香化酶的表达和雌二醇分泌的影响
研究罗格列酮对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞芳香化酶(aromatase)的表达和雌二醇(E2)分泌的影响,以了解罗格列酮对PCOS卵巢颗粒细胞的局部作用.
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芳香化酶作为内分泌干扰物生物标志物的应用进展
P450芳香化酶(P450 arom)是一种催化雄激素转变为雌激素的关键酶和限速酶,该酶催化的芳香化反应发生在细胞内质网,可归类为混合功能氧化反应.因为芳香化酶在外源性化合物代谢中具有重要的作用,所以芳香化酶的活力检测对于评价化学物质内分泌干扰活力具有实际意义.
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乳腺癌新辅助内分泌治疗方法的研究进展
新辅助内分泌治疗以其良好的效果备受国内外嘱目,尤其是运用在乳腺癌治疗上.本文综述了新辅助新辅助内分泌治疗理论、介绍和评价了2种新辅助内分泌治疗药物,探讨目前乳腺癌新辅助内分泌治疗研究中的问题及未来发展趋势.
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四物合剂通过TGF-β3蛋白通路干预顺铂作用颗粒细胞E2分泌机制的研究
目的:通过细胞实验,以顺铂(Cisplatin,CDDP)作为颗粒细胞损伤因素,观察四物合剂对损伤后颗粒细胞分泌E2分泌水平及其合成关键酶CYP19a1基因表达水平的干预情况.方法:取SD大鼠卵巢颗粒细胞,经顺铂作用后给予四物合剂药理血清干预,对不同条件下上清液E2及E2合成关键酶CYP19a1表达水平进行测定.结果:放免法检测四物合剂药理血清干预细胞组E2水平与顺铂组相比明显提升,且加入TGF-β3蛋白通路阻断剂后E2下降;免疫组化和蛋白印迹结果显示四物合剂药理血清组CYP19a1蛋白表达水平高于顺铂作用组,在蛋白印迹检测中,阻断剂组较未加阻断剂组明显降低.结论:四物合剂药理血清能调节顺铂作用后的颗粒细胞E2分泌水平,其作用机制可能与通过TGF-β3蛋白通路增强CYP19a1表达有关.
关键词： 四物合剂 芳香化酶 TGF-β3蛋白通路 颗粒细胞 雌激素 -
含左归丸鼠血清对3T3-L1前脂肪细胞芳香化酶 mRNA 表达的影响
目的：观察含左归丸鼠血清对3T3-L1前脂肪细胞芳香化酶 mRNA 表达的影响。方法：将雌性育龄期大鼠分为正常组20只、假手术组17只、模型组8只、阳性对照组11只、左归丸高剂量组（左高组）6只、左归丸低剂量组（左低组）9只，连续灌胃11周，分离血清检测 E2；以2％各类鼠血清加入培养液培养分化中的3T3-L1前脂肪细胞，48 h 后测细胞上清液E2和细胞芳香化酶 mRNA 表达。结果：与模型组比较，左高组、左低组给药前后体重有升高趋势，但无明显统计学意义（P＞0.05）；左高组、左低组鼠血清 E2值较模型组无明显统计学意义（P ＞0.05）；培养3T3-L1前脂肪细胞48h 后，细胞上清液 E2值左高组（9.40±3.61）pg／mL、左低组（8.94±2.91）pg／mL 比模型组（3.99±0.76）pg／mL 略有升高；模型组（0.39）芳香化酶 mRNA 表达（P450arom／GAPDH）水平高于左高组（0.25）。结论：左归丸对去势雌鼠血清 E2和体重无明显影响，可增强3T3-L1前脂肪细胞的芳香化酶活性。
关键词： 补肾中药 左归丸 3T3-L1前脂肪细胞 芳香化酶 -
内异康复片对EM大鼠血清及异位内膜细胞中ARO、 COX-2、 E2水平的影响
目的:研究内异康复片对子宫内膜异位症(EM)模型大鼠血清中aromatase(ARO)、COX-2、E2的影响,探讨内异康复片治疗EM的机理.方法:体内实验采用手术方法建立EM模型大鼠,大鼠按随机数字表法分为内异康复片高、中、低剂量组、来曲唑组、去势组、模型空白对照组6组;造模成功3周后,给予内异康复片进行干预3周,检测大鼠血清中ARO、COX-2、E2;体外实验从造模成功的EM大鼠上取出大鼠腹腔内异位内膜组织,分离异位内膜细胞进行体外培养,并给予内异康复片干预48 h后,检测细胞培养液中ARO、COX-2、E2的水平.结果:体内外实验结果显示,内异康复片高剂量组、中剂量组可明显降低EM大鼠血清中ARO、COX-2、E2 (P ＜0.05;P ＜0.01);内异康复片可明显降低异位内膜细胞分泌的ARO、COX-2、E2(P ＜0.05;P ＜0.01),体内体外实验结果相似.结论:内异康复片临床治疗EM的机理可能与其抑制异位内膜细胞ARO、COX-2的分泌和降低E2水平相关.
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温阳生精汤含药血清对肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中雌激素分泌的影响
目的 观察温阳生精汤含药血清对腺嘌呤致雄性肾阳虚不育大鼠睾丸间质细胞中雌二醇( estradiol,E2)合成以及影响其合成的芳香化酶(cytochrome P450 aromatase,P450arom)活性、其编码基因CYP19表达的影响,从蛋白和mRNA水平探讨温阳生精汤含药血清治疗肾阳虚不育的机制.方法 将实验大鼠随机分为4组,每组5只,即正常组及温阳生精汤高、中、低浓度组.各组大鼠分别以生理盐水和高、中、低浓度中药连续灌胃10天.末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清.从肾阳虚大鼠体内分别分离并纯化睾丸间质细胞,经鉴定后原代培养,随机分为5组,即空白对照组,模型组,中药高、中、低浓度(1.2、1.0、0.8 g/mL)组,用放射免疫法测定细胞培养液中E2含量,氚水释放实验检测P450arom在细胞中的活性,同时用Western blot法和荧光定量PCR法分别测定CYP19蛋白和mRNA表达.结果 与空白对照组比较,模型组中间质细胞上清中E2的含量明显减少,同时伴随P450arom活性抑制,以及CYP19蛋白和mRNA表达的显著减少(P ＜0.01,P＜0.05).与模型组比较,经温阳生精汤含药血清干预后可显著增加间质细胞中E2合成量,上调P450arom活性,同时在蛋白和mRNA水平上调细胞中CYP19表达,并具有部分剂量依赖性(P＜0.01,P＜0.05).结论 温阳生精汤含药血清可以有效提高肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中E2的合成,并可能部分通过上调P450arom活性,提高CYP19基因表达实现,这可能是其治疗男性肾阳虚不育的机制之一.
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芳香化酶在胶质母细胞瘤细胞系SHG-44细胞中的表达及调控
目的研究芳香化酶细胞色素P450(AROM)及雌激素受体(ER-α)在胶质母细胞瘤细胞系SHG-44细胞中的基因表达. 方法细胞培养、免疫细胞化学染色、原位杂交染色及RT-PCR技术. 结果在SHG-44细胞中分别检测到AROM及ER-α的表达,进一步发现SHG-44细胞中AROM的表达是由多个组织特异性启动子驱动基因的转录. 结论可能为中枢神经系统肿瘤发生的激素调节提供新的资料.
关键词： 芳香化酶 胶质瘤细胞系SHG-44 基因表达 -
脑内芳香化酶表达的定位、调控及意义
芳香化酶催化雄激素转化为雌激素，在脑内其表达主要见于下丘脑与边缘系统的神经元内，星形胶质细胞可能也表达芳香化酶。芳香化酶基因表达是由多个组织特异性的启动子驱动的。脑内雌激素的有效浓度取决于脑局部芳香化酶的表达水平，由此产生的雌激素能调节突触发生和树突棘密度、神经营养因子和/或其受体的表达，保护脑细胞免受包括β-淀粉样蛋白在内的多种神经毒素的影响，并可显著改善老年性痴呆(AD)导致的学习和记忆下降及认知缺陷。
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芳香化酶与乳腺癌
雌激素作用于乳腺上皮细胞,可促进细胞DNA合成,诱发乳腺芽体成熟[1].在乳腺癌发生发展的过程中,雌激素分别与不同的核受体结合,激活或者抑制下游靶基因的转录和表达,导致正常细胞表型及生物学特性改变,诱发肿瘤生成[2].雌激素除了通过核受体,还可以通过细胞膜受体参与乳腺细胞的癌变[3].体内雌激素的代谢平衡紊乱可以导致有"基因毒性"的自身中间代谢产物异常增多,使DNA突变率显著提高,从而诱发乳腺肿瘤的发生.此外,雌激素直接参与调控细胞周期蛋白如细胞周期素D1的表达,而细胞周期蛋白过度表达可导致乳腺细胞增殖异常[4].可见,雌激素与乳腺癌的发生和发展是密不可分的.而芳香化酶即雌激素合成酶,成为近年来科学家们研究乳腺癌的重点.芳香化酶简称CYP19,是由503个氨基酸构成的蛋白酶,基因定位于15q21.1,是雌激素合成中的限速酶,能催化雄激素转化为雌激素.
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芳香化酶与乳腺癌的相关研究
雌激素在乳腺癌的发生发展中起着重要作用.绝经后妇女的雌激素主要由肾上腺分泌的雄激素前体转化而来,芳香化酶是这一转变过程的关键酶、限速酶.因此,深入研究芳香化酶和乳腺癌的关系具有重要的临床意义.现就芳香化酶在乳腺癌组织中的表达、调控及芳香化酶抑制剂在乳腺癌内分泌治疗中的临床进展作一综述.
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乳腺癌芳香化酶表达与临床病理因素的关系
目的 研究乳腺癌组织中芳香化酶基因表达与乳腺癌临床病理因素的关系.方法 (1)应用实时定量PCR检测50例乳腺癌及正常乳腺组织中芳香化酶基因表达;计算肿瘤组织(T)及正常组织(N)的比值(T/N);(2)以所有肿瘤组织芳香化酶mRNA表达量的中位值,定义各例芳香化酶表达水平的高低.结果 (1)激素受体阳性组芳香化酶基因的T/N比值高于激素受体阴性组(P=0.031);(2)年龄大于50岁组表达高于50岁以下组(P=0.008);(3)浸润性导管癌组低于其它类型组(P=0.000);(4)P53阳性组与阴性组表达无差异(P=0.790);(5)肿瘤小于2 em组与大于2cm组表达无差异(P=0.429);(6)淋巴结阳性组与淋巴结阴性组表达无差异(P=0.142).结论 (1)乳腺癌芳香化酶基因表达与激素受体、年龄、组织学类型相关,与肿瘤大小、淋巴结状况、P53表达无关.(2)在激素受体阳性、年龄大于50岁的患者中部分为芳香化酶低表达.
关键词： 乳腺癌 芳香化酶 临床病理因素 逆转录-聚合酶链反应 -
雌性大鼠性激素与骨生化指标相关性研究
目的 研究老年雌性大鼠性激素和骨生化标志物间的关系.方法 选用18月龄老年大鼠作为老年性骨量降低模型,分析大鼠血清FSH、LH、P、E2水平和血清ALP,TrACP活性间的关系,并探讨了老年大鼠体内雌激素的来源问题.结果 老年大鼠的动情周期时相与青年大鼠明显不同,性激素水平发生明显改变.FSH、LH 可以独立于E2而直接对血清TrACP进行调节.结论 骨生化指标和性激素水平有相关性.雌激素降低是引发这一调节过程的重要因素,老年大鼠非生殖系统雌激素所占比例增大.
关键词： 动情周期 性激素 骨代谢标志物 芳香化酶 银染蛋白(AgNOR) -
老年男性骨质疏松及雌激素受体的研究进展
骨质疏松是常见的老年病,由于男性骨质疏松症的发病年龄较女性晚,发病率较女性低,以至对男性骨质疏松症的研究颇为不足.近年来,男性骨质疏松越来越受到广大学者的重视,而骨质疏松的发病机理更成为研究的热点.老年人的骨量不断丢失,并随着年龄的增长而增加.原发性骨质疏松症的发生、发展与内分泌紊乱密切相关,其中雌激素、降钙素、维生素D、雄激素发挥着重要作用,他们的受体则起着枢纽作用[1].而骨量的丢失与性激素的变化是导致骨质疏松的主要因素.传统观点认为:体内雄激素的缺乏及雄激素受体表达的减少在男性骨质疏松中占主要地位.但近有研究表明,睾丸酮可以在脂肪和骨髓的芳香化酶的作用下转化为雌激素,睾丸酮对骨的作用很大程度上要通过雌激素的介导.并且有资料表明男性骨量的丢失主要相关于雌激素水平的降低,其次相关于雄激素水平的降低[2].因此,雌激素受体(ER)的表达就是性激素发挥作用的重要因素.本文就有关文献作一简要综述,以期能进一步展开对老年男性骨质疏松发病机理的研究.
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芳香化酶抑制剂兰他隆对子宫内膜癌细胞作用的实验研究
目的研究芳香化酶抑制剂兰他隆对子宫内膜癌细胞的作用.方法按培养液中加入的药物不同,将培养的内膜癌细胞系(HEC-1A)、Hela细胞或MCF-7分四组,其中兰他隆组(L组)培养液中含10-6M Lentaron+0.1%二甲基亚砜(DMSO)(V/V);丙睾组(T组)培养液中含10-6M丙酸睾丸酮(丙睾)+0.1%DMSO(V/V);兰他隆+丙睾组(LT组)培养液中含10-6 M Lentaron+10-6M丙睾+0.1%DMSO(V/V);空白组(C组)培养液中含0.1%DMSO(V/V).分别采用MTT法、流式细胞术或逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,进行连续测定在丙睾存在和缺乏的情况下,兰他隆对HEC-1A、HeLa或MCF-7细胞生长及芳香化酶mRNA转录水平的影响.结果①10-6M丙睾浓度均可促进HEC-1A、Hela、MCF-7三种细胞的生长;加用兰他隆后,可抑制丙睾对HEC-1A和Hela细胞的促增殖作用,但对MCF-7细胞中抑制则不明显.在丙睾中加用lentaron,经流式细胞术连续检测显示可促进HEC-1A细胞凋亡.②10"M丙睾可提高HEC-1A、Hela、MCF-7三种细胞内芳香化酶mRNA的表达水平;而同时加入10-6Mlentaron后,三种细胞内芳香化酶mRNA表达水平均被明显抑制.结论兰他隆可抑制雄激素的促细胞内芳香化酶水平增高的作用,其抑制雄激素的促增殖作用可能与促细胞凋亡有关.
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绝经期女性子宫内膜息肉中芳香化酶表达的研究
目的 探讨绝经期子宫内膜息肉的发病机制.方法 选取30例绝经期子宫内膜息肉患者作为实验组,选取绝经期子宫内膜正常者30例作为对照组.息肉组均进行宫腔镜下子宫内膜息肉电切术,取息肉组织为实验组一,取远离息肉的内膜组织为实验组二.经石蜡病理证实为良性子宫内膜息肉.实验组和对照组均检测外周血激素6项,将两组中雌激素进行对比,应用免疫组织化学方法测定息肉及子宫内膜中芳香化酶的表达,用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件进行图片分析,平均光密度值为比较指标.结果 实验组和对照组血清雌激素水平分别为:(16.5±2.11) pg/ml和(15.8±2.28) pg/ml,两组外周血雌激素水平差异无统计学意义;实验组一、实验组二和对照组组织中芳香化酶表达的平均光密度分别为(0.101 1±0.001 3)、(0.025 5±0.0010)、(0.024 7±0.000 7),以α=0.05的检验水准,实验组一中芳香化酶的表达明显高于实验组二,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组二中芳香化酶的表达与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 绝经期子宫内膜息肉的形成不依赖于体循环雌激素水平的升高,可能与子宫内膜局部芳香化酶过表达有关.
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芳香化酶及其抑制剂在妇科肿瘤方面的研究
一、芳香化酶的功能及生物学特征在芳香化酶的作用下,雄激素去甲基芳香化可转化为雌激素,为绝经妇女雌激素主要来源.对绝经后乳癌妇女的研究中发现,其乳腺组织中雌二醇的浓度比血中浓度高10倍,使人们日益关注到芳香化酶在雌激素产生中的重要作用.
