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乳腺上皮细胞经致癌物苯并芘和4-甲基亚硝胺-1-(3-吡啶)-1丁酮联合诱导后的生物学特性变化研究
目的 探讨正常乳腺上皮细胞经致癌物联合慢性处理后生物学特性的变化.方法 使用低剂量(100pmol/L)的化学致癌物4-甲基亚硝胺-1-(3-吡啶)-l-丁酮(NNK)和苯并芘(B[a]P)连续处理人正常乳腺上皮MCF10A细胞,20代后研究细胞是否获得癌细胞相关生物学特性.结果 经致癌物低剂量长期处理后的细胞对生长因子的依赖性降低,获得锚定非依赖性生长特性以及在3D细胞外基质培养基上形成不规则的腺泡.结论 经100pmol/L NNK和B[a]P长期处理的人正常乳腺上皮MCF10A细胞可获得癌细胞相关特性.
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瘦素的研究进展
瘦素(leptin)的发现使人类对肥胖研究取得了突破性的进展.随着近年来对瘦素探讨的不断深入,人们开始认识到瘦素不仅由脂肪组织分泌,其它组织如乳腺上皮细胞、胎盘、胃黏膜上皮细胞中也可检测到,其受体不仅存在于丘脑、脂肪组织,还广泛存在于全身各个组织.瘦素与机体多系统的病理生理关系正逐步被人们了解[1].
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钙蛋白酶在乳腺上皮转化细胞对雌激素刺激反应中的作用
目的 探讨经雌激素(E2)转化的MCF-10A乳腺上皮细胞对E2刺激的敏感性及细胞内钙蛋白酶(CANP)在E2效应中的介导作用,以深入了解E2的信号传导机制.方法 以E2转化的MCF-10A乳腺上皮细胞为研究模型、用E2(50 nmol/L)刺激细胞,以蛋白印迹法观察蛋白分子质量变化,以CANP特异性底物局部黏着激酶(FAK)蛋白剪切作为CANP激活的指标,伤口愈合实验观察细胞迁移变化,CANP抑制剂预处理观察CANP在E2效应中的作用.结果 转化细胞CANP活性明显高于非转化细胞,表现为前者出现FAK明显蛋白剪切,而后者FAK主要为野生型(125 ku),同时转化细胞迁移明显增强(P＜0.01).E2(10 nmol/L)刺激转化细胞可进一步促进FAK蛋白剪切和细胞迁移(P＜0.01),而非转化细胞对E2刺激不敏感.CANP抑制剂-1(ALLN)可有效阻断E2刺激转化细胞FAK蛋白剪切及细胞迁移(P＜0.01).结论 转化细胞对E2刺激的敏感性增加,其机制可能与胞内CANP活性增强有关,提示在转化细胞存在活跃的E2-CANP-FAK信号活动.
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抑癌基因Maspin在胃癌及癌前病变组织中的表达研究
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其发生是一个多阶段多因素参与的复杂过程，其确切机制尚不清楚。 Maspin 基因是采用杂交消减技术在正常乳腺上皮细胞中分离出的一种抑癌基因。本文通过研究不同胃黏膜病变中Maspin蛋白的表达，探讨其在胃癌发生发展、转移中的作用及其与预后的关系。
选取胃镜检查和胃癌手术切除石蜡标本204例，包括正常胃黏膜67例，癌前病变58例，胃癌79例。男性115例，女性89例。采用免疫组化S-P法检测不同胃黏膜组织Maspin蛋白表达，用免疫组化半定量积分法判断结果。采用SPSS13.0软件处理数据，率的比较采用χ2检验或四格表确切概率法， P＜0.05为差异有统计学意义。 -
芳香化酶与乳腺癌
雌激素作用于乳腺上皮细胞,可促进细胞DNA合成,诱发乳腺芽体成熟[1].在乳腺癌发生发展的过程中,雌激素分别与不同的核受体结合,激活或者抑制下游靶基因的转录和表达,导致正常细胞表型及生物学特性改变,诱发肿瘤生成[2].雌激素除了通过核受体,还可以通过细胞膜受体参与乳腺细胞的癌变[3].体内雌激素的代谢平衡紊乱可以导致有"基因毒性"的自身中间代谢产物异常增多,使DNA突变率显著提高,从而诱发乳腺肿瘤的发生.此外,雌激素直接参与调控细胞周期蛋白如细胞周期素D1的表达,而细胞周期蛋白过度表达可导致乳腺细胞增殖异常[4].可见,雌激素与乳腺癌的发生和发展是密不可分的.而芳香化酶即雌激素合成酶,成为近年来科学家们研究乳腺癌的重点.芳香化酶简称CYP19,是由503个氨基酸构成的蛋白酶,基因定位于15q21.1,是雌激素合成中的限速酶,能催化雄激素转化为雌激素.
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抗精神病药物所致高泌乳素血症
泌乳素是由垂体前叶合成并分泌的一种多肽类激素,它的主要生理功能为促进乳腺发育,同时促进乳腺上皮细胞的分泌功能,是哺乳类动物机体平衡的重要调节因素.血清泌乳素增高对大脑和其它器官有着直接和间接的影响,包括溢乳、月经减少、闭经、不规律排卵或不排卵、性功能失调、骨密度降低、心血管疾病等.
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乳腺癌中NF-κB常见途径研究进展
NF-κB的活性是通过正和负调节元件严格控制在多个级别中，其功能性分子通路已成为肿瘤、炎症等常见疾病热门研究方向。近的研究表明：在Her2阳性的乳腺癌细胞模型中，乳腺上皮细胞中的转录因子NF-κB起调节作用。在本文中将结合近期关于NF-κB实验研究，阐述在乳腺癌细胞中此同通研究的新进展。
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三羟异黄酮膳食大鼠的乳腺细胞基因表达谱分析
目的:研究三羟异黄酮(genistein)膳食暴露对SD大鼠乳腺上皮细胞基因表达谱的影响,探讨三羟异黄酮对乳腺癌的化学预防机制.方法:应用BRB-Array Tools软件对公共基因芯片数据库GEO中,三羟异黄酮膳食暴露的SD大鼠乳腺上皮细胞基因芯片表达数据进行统计学分析,找出发生变化的基因,DAVID工具进一步分析其功能及参与的生物学通路.PINA蛋白质互作平台分析这些基因的蛋白质相互作用情况.结果:得到419个差异表达基因,表达上调的175个,下调的244个,功能主要涉及钙调蛋白结合、嘌呤核苷酸结合、转录因子结合和配体依赖的核受体活性等相关的生物学过程,参与细胞信号转导.差异表达下调基因扰动的通路主要是NOD样受体信号通路,黏着斑信号通路,表皮生长因子受体信号通路,神经营养因子信号通路,均是细胞增殖、凋亡及异常的迁移能力的重要通路.上调基因扰动的通路主要是Toll样受体(toll-like receptor,TLR)和雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)2条途径,涉及免疫应答.结论:三羟异黄酮可能通过干扰蛋白质的磷酸化过程,影响了细胞增殖、凋亡及免疫等通路的关键分子,进而干预乳腺癌的发生.
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P73、P51基因在乳腺癌组织中mRNA的表达及意义
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,而且近年来发病率有升高趋势.以往国内外的研究资料表明乳腺癌的发生与基因的改变有关,其中比较明确的是肿瘤抑制基因p53基因的突变可能与乳腺上皮细胞的恶变有关[1].近,p53基因家族中的新成员-p51和p73的基因已经被发现,他们分别位于染色体3q28[2]和1p36.3部位[3].p73基因和p51基因具有类似于p53基因的生物学功能[1,4,5].
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角质细胞生长因子在体外对小鼠骨髓细胞及HL-60细胞的影响
角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor, KGF)是一种主要由基质细胞产生的有丝分裂原.它主要对上皮源性细胞如角质细胞、胃肠道上皮细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞、肝细胞、乳腺上皮细胞等起作用.为探讨KGF在体外对小鼠骨髓细胞、基质细胞以及白血病细胞的作用.我们观察了KGF对小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)、骨髓基质细胞及白血病HL-60细胞的影响.
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EHD2调节乳腺上皮细胞极性的实验研究
目的:研究EHD2基因对上皮细胞极性的调控作用及其机制,探讨EHD2基因在乳腺癌组织中表达失调的肿瘤分子生物学和细胞生物学意义.方法:以乳腺永生化正常上皮细胞的二维和三维培养为模型,建立EHD2突变体的Doxycycline外源诱导表达体系,应用荧光显微镜和激光共聚焦显微成像技术,观察诱导表达前后细胞在二维培养条件下细胞内β肌动蛋白的微丝组装及聚合情况,以及三维基质胶培养条件下对上皮细胞腺泡形成的影响,综合判断EHD2蛋白在调控上皮细胞极性中的生物学作用.结果:EHD2突变的诱导表达显著影响乳腺上皮细胞的骨架重排,在细胞表面发生密集发散状微刺,细胞内定向排列的β肌动蛋白微丝结构消失.三维培养中,EHD2突变体的引入破坏了原本规则的腺泡型生长,细胞向外侵入基质.结论:EHD2突变可导致乳腺上皮细胞的骨架重排和极性改变,可能是乳腺肿瘤发生的重要机制之一.
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改良型混合酶消化法培养小鼠乳腺上皮细胞
背景:目前采用的A型胶原酶和胰蛋白酶混合酶分离乳腺细胞团的方法操作复杂,实验条件要求高.目的:观察改良型混合酶消化法能否成功进行乳腺上皮细胞的体外培养.方法:采用Ⅰ型、Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶(1∶1∶1)混合消化直接用眼科剪剪碎的小鼠乳腺组织,37 ℃振荡消化获取乳腺细胞团,并采用差速贴壁法去除成纤维细胞,将细胞团接种于细胞培养瓶进行培养.结果与结论:倒置显微镜下观察显示,改良型混合酶消化法能获得较多的细胞团,且培养12 h后细胞团绝大多数贴在细胞瓶壁,培养72 h后细胞团完全铺开融合成片,细胞呈典型的铺路石样.免疫荧光细胞化学染色结果显示,培养细胞角蛋白18呈阳性反应.说明应用改良型混合酶消化法能在短时间内获得大量较纯的乳腺上皮细胞.
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人乳腺上皮细胞抽提物重编程人脂肪来源干细胞的实验研究
目的 观察人乳腺上皮细胞抽提物重编程人脂肪来源干细胞(hADSCs),使其向上皮细胞转化的可行性.方法 采用胶原酶消化法分离并获得脂肪来源干细胞;将超声乳化人乳腺上皮细胞离心后获得抽提物冻存备用;培养第3代hADSCs,链球菌溶血素O(SLO)处理后,实验组6例加入乳腺上皮细胞抽提液,对照组6例不加乳腺上皮细胞抽提液.细胞培养过程中观察hADSCs的形态学变化,采用蛋白质印迹法检测卵透明带蛋白1(ZO1)和细胞角蛋白18(CK18)表达的变化.结果 流式细胞仪检测结果显示,人脂肪组织分离培养的干细胞表达CD13、CD29、CD44、CD90和CD105呈阳性表达,而不表达CD45.实验组细胞重编程后第16天,细胞形态开始转变为上皮样的圆形;第18天蛋白印迹法检测上皮细胞抗原标志物ZO1和CK18表达增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人乳腺上皮细胞抽提物可以重编程脂肪来源干细胞,使其向上皮细胞转化.
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紫花苜蓿总黄酮对LPS诱导乳腺上皮细胞炎性因子的抑制作用
目的:研究紫花苜蓿总黄酮对LPS诱导小鼠乳腺上皮细胞炎症反应的抑制作用及机理.方法:1.μg/mL LPS刺激细胞之前,分别用50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL紫花苜蓿总黄酮预先处理细胞1.5h;采用MTT法测定细胞的活性;分别利用qRT-PCR法和Western boltting法检测炎性因子TNF-α和IL-6 mRNA表达和NF-κBp56蛋白表达.结果:紫花苜蓿总黄酮可以抑制NF-κB核转位,降低TNF-α和IL-6 mRNA的表达量,提高细胞的活力.结论:紫花苜蓿总黄酮可以通过下调NF-κB信号通路抑制炎性因子的产生.
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IFN-γ通过JAK-STAT1通路诱导乳腺上皮细胞表达趋化因子CXCL17
背景与目的：趋化因子在白细胞浸润、免疫调节和肿瘤转移等病理生理过程中发挥着广泛而重要的作用，但人们对其调控机制了解甚少。研究表明，细胞因子可刺激趋化因子的表达，从而发挥其生物学功能。CXC趋化因子配体17(CXC chemokine ligand 17，CXCL17)是2006年发现的CXC趋化因子中新的一员。CXCL17具有抗炎、抗菌、抗肿瘤免疫和促血管生成等作用。通过研究其上游调控机制可为其用于临床诊断与治疗提供线索。本研究旨在探讨何种细胞因子可以影响CXCL17的表达。方法：实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)检测多种细胞因子(TNF-α、IL-1β、IFN-γ)及细菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)作用于MCF-10A正常乳腺上皮细胞12 h后，CXCL17的mRNA表达水平改变。蛋白[质]印迹法(Western blot)检测IFN-γ作用于MCF-10A细胞后JAK-STAT通路的活化情况。结果：多种细胞因子及LPS可不同程度地促进CXCL17基因转录，IFN-γ作用为显著，其通过增加STAT1蛋白的表达水平和磷酸化水平，极大地提高了CXCL17基因转录水平。结论：IFN-γ通过激活JAK-STAT1信号通路使CXCL17在乳腺上皮细胞MCF-10A中表达上调。作为IFN-γ的靶基因，CXCL17很可能是IFN-γ发挥抗炎、抗癌作用的重要环节之一。
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通草增加哺乳期乳汁分泌的机制研究
目的 初步探讨通草在哺乳期增加乳汁分泌的途径和作用机制及其对乳汁成分的影响.方法 将16只产后ICR母鼠分为阴性对照组(n=8)和通草处理组(n=8)；通草处理组每日通过灌胃方式给予母鼠通草提取液0.25 mL,阴性对照组给予等量生理盐水.比较通草处理组与阴性对照组小鼠的泌乳量、乳汁中蛋白质和乳糖含量；采用ELISA法检测小鼠血清中催乳激素的水平.采用不同剂量通草提纯液处理小鼠HC11乳腺上皮细胞(设为低剂量通草处理组和高剂量通草处理组,另设对照组)；采用荧光定量RT-PCR方法检测乳腺上皮细胞中β-酪蛋白和乳清蛋白mRNA的表达；采用Western blotting技术检测乳腺上皮细胞中β-酪蛋白、STAT5蛋白和磷酸化STAT5蛋白的表达.结果 通草处理组小鼠在哺乳第1、3、8、13和18天的泌乳量均高于阴性对照组.通草处理组母鼠乳汁中蛋白质的质量浓度(119.567 μg/mL)明显高于阴性对照组(100.562 μg/mL),乳糖浓度(53.072 mmol/L)明显低于阴性对照组(63.290 mmol/L),差异均有统计学意义(P＜0.05).在哺乳第1、3、8和13天,通草处理组催乳激素水平与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).低剂量通草处理组和高剂量通草处理组乳腺上皮细胞中β-酪蛋白及乳清蛋白mRNA的表达均高于对照组.对照组、通草低剂量处理组和通草高剂量处理组乳腺上皮细胞中磷酸化STAT5蛋白的表达水平依次升高.结论 通草可以增加STAT5蛋白的磷酸化水平,加强细胞内信号转导,促进乳腺细胞泌乳,增加乳汁中乳蛋白的含量.
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可用于基因表达研究的转基因小鼠乳腺上皮细胞模型的构建
目的 建立转基因小鼠乳腺上皮细胞模型,为研究乳腺内环境因素调控外源基因的表达和制备高效表达外源基因的乳腺生物反应器提供研究平台.方法 通过机械破碎和胶原酶消化的方法获取人转铁蛋白(hTF)转基因小鼠的乳腺上皮细胞,并进行体外原代培养.经胰蛋白酶纯化后,绘制乳腺上皮细胞生长曲线；免疫组织化学方法检测角蛋白18的表达；透射电子显微镜(透射电镜)观察乳腺上皮细胞超微结构；流式细胞仪检测细胞周期分布；显微镜下分析乳腺上皮细胞核型.将牛催乳素真核表达载体(pCMV-bPRL)转染至转基因乳腺上皮细胞中,检测外源bPRL的表达.结果 乳腺上皮细胞生长曲线呈“S”形；免疫荧光组织化学分析结果显示hTF转基因小鼠乳腺上皮细胞角蛋白18呈阳性表达；透射电镜观察发现乳腺上皮细胞胞核较大、偏位,有双核或多核,胞质丰富,空泡、粗面内质网、高尔基体丰富；流式细胞仪检测结果显示:乳腺上皮细胞增殖活跃,G2/M期+S期细胞占15％；细胞核型分析结果显示处于分裂期的细胞具有正常的二倍体,染色体完整.pCMV-bPRL转染乳腺上皮细胞24 h后,上清液中检测到bPRL的表达.结论 体外培养的转基因乳腺上皮细胞具有类似体内细胞的生物学特征,并可表达真核表达载体,为研究环境因素对乳腺功能的影响及制备乳腺生物反应器提供了一种细胞模型.
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哺乳动物乳腺上皮细胞的研究和应用
转基因动物-乳腺生物反应器的研制是近十多年发展起来的一项生物制药方法,具有巨大的应用前景.外源目的基因载体的构建是制备转基因动物-乳腺生物反应器成功的关键技术环节,因此建立简单、快捷检测外源基因载体构建的合理性和表达情况的方法至关重要.由于乳腺上皮细胞能较真实反映哺乳动物乳腺生长发育及泌乳的各项生理功能,开展体外培养哺乳动物乳腺上皮细胞,可作为转基因动物制备过程中载体有效性检验的一种体外模型途径.本文将对哺乳动物乳腺组织的结构和乳腺上皮细胞体外培养的增殖能力、诱导、维持分化的特点,以及乳腺上皮细胞的培养和它在生物、医学领域中的应用研究进行简要概述.
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激光捕获显微切割技术纯化的乳腺癌上皮细胞和间质比较蛋白质组学研究
目的：研究乳腺癌上皮细胞和间质间蛋白表达的差异。方法用改良HE染色法对临床侵润性导管内原位癌患者的石蜡包埋样品进行染色，用激光捕获显微切割技术（LCM）纯化分离癌变的乳腺上皮细胞和其周围间质后分别进行质谱分析。结果质谱总共检测了431种蛋白，上皮细胞和间质中分别检测到384和298种蛋白。251种共同表达的蛋白中，69种间质蛋白的含量比在上皮细胞中高，60种比在上皮细胞中低。所检测到蛋白的上皮细胞和间质定位及表达水平和它们在肿瘤发生、发展过程中的作用一致。结论在上皮细胞和间质中差异表达蛋白可以是疾病的筛选、诊断和预后判断的蛋白标志。
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男性乳房肥大的来龙去脉
男性乳房肥大,也称男性乳腺增生、男性乳房发育症等,主要是一侧或两侧乳房呈女性型发育,有时有触痛或疼痛,乳管增生和囊状扩张,以及纤维、脂肪组织增生.主要是因各种原因导致体内雌激素水平相对或绝对增高,乳腺上皮细胞受过多的雌激素刺激所致.男性体内的雌激素雌激素并不是女性的“专利”,而女性体内也有雄激素.两种功能迥异的激素,各自掌管两性身体的生理功能.男性体内雌激素主要有以下几个方面的功能.完善男性大脑功能雌激素使大脑发育平衡,情绪波动较少,适应性强,而且可以增进男性的语言和记忆功能.
