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顺铂诱导耐药蛋白BCRP与EHD2表达上调并在细胞表面的富集*
目的：建立顺铂耐受的人肺腺癌A549/DDP细胞株，研究EHD2（EH domain-containing protein-2）与肿瘤细胞药物耐受的潜在关系。方法：以DDP为诱导剂，采用低浓度逐步增量诱导方法建立人肺癌耐药细胞系A549/DDP，采用MTT法测定药物敏感性，免疫印迹法检测耐药蛋白BCRP及EHD2蛋白的表达水平，免疫荧光方法检测BCRP及EHD2的细胞定位。结果：成功建立DDP耐药细胞系A549/DDP，对DDP的耐药指数为7.6；免疫印迹结果显示BCRP在耐药细胞系A549/DDP中的表达明显高于其亲本细胞A549，EHD2蛋白在耐药细胞系的表达略有增高；免疫荧光成像显示EHD2蛋白在细胞膜表面富集，并与BCRP耐药蛋白共定位。结论：BCRP和EHD2在获得性耐药细胞中富集，并于细胞膜表面共定位，提示内吞蛋白EHD2可能调控耐药蛋白BCRP的膜稳定性，从而介导肿瘤细胞耐药。
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EHD2调节乳腺上皮细胞极性的实验研究
目的:研究EHD2基因对上皮细胞极性的调控作用及其机制,探讨EHD2基因在乳腺癌组织中表达失调的肿瘤分子生物学和细胞生物学意义.方法:以乳腺永生化正常上皮细胞的二维和三维培养为模型,建立EHD2突变体的Doxycycline外源诱导表达体系,应用荧光显微镜和激光共聚焦显微成像技术,观察诱导表达前后细胞在二维培养条件下细胞内β肌动蛋白的微丝组装及聚合情况,以及三维基质胶培养条件下对上皮细胞腺泡形成的影响,综合判断EHD2蛋白在调控上皮细胞极性中的生物学作用.结果:EHD2突变的诱导表达显著影响乳腺上皮细胞的骨架重排,在细胞表面发生密集发散状微刺,细胞内定向排列的β肌动蛋白微丝结构消失.三维培养中,EHD2突变体的引入破坏了原本规则的腺泡型生长,细胞向外侵入基质.结论:EHD2突变可导致乳腺上皮细胞的骨架重排和极性改变,可能是乳腺肿瘤发生的重要机制之一.
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EHD2干扰影响永生化乳腺上皮细胞的增殖和迁移
目的:研究EHD2膜转运调控蛋白对非癌乳腺上皮细胞HBL100生长、粘附和迁移等生物学行为的影响,揭示乳腺癌发生发展的新分子机制.方法:数据挖掘分析已公开的各组乳腺癌基因表达芯片结果中EHD2基因表达与乳腺肿瘤发生发展的关系.小RNA干扰永生化非癌乳腺上皮细胞HBL100的EHD2蛋白表达水平,免疫印迹法检测验证EHD2蛋白的降表达情况,并以此为模型研究EHD2干扰表达对细胞的增殖速度、粘附能力以及迁移能力等生物学行为的影响.结果:数据挖掘结果显示,EHD2基因在乳腺癌中的表达明显减弱,而且其表达水平随肿瘤病理分级的升高呈逐级下降趋势.HBL100细胞系小RNA干扰EHD2表达后,二维培养条件下的生长及EGF诱导下的迁移速度均升高,差异有统计学意义(P＜0.005),但其粘附能力下降(P＜0.05).结论:EHD2参与调节永生化乳腺上皮细胞HBL100的生长、粘附和迁移.在乳腺肿瘤中EHD2的基因表达失调下降,提示EHD2可能是一个新的乳腺抑癌基因,并可能成为乳腺癌分子诊断和靶向治疗的新指标、新靶点.
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乳腺癌中抑癌基因EHD2表达的临床意义与预后关系
目的:检测乳腺癌组织中抑癌基因EHD2的表达,探讨其与乳腺癌临床参数的相关性及其对预后的意义.方法:对乳腺癌及癌旁组织标本91例采用免疫组织化学法检测EHD2和增殖细胞核抗原Ki-67的表达.结合临床病理参数分析EHD2在乳腺癌中的临床意义.结果:EHD2在乳腺癌组织中表达显著低于癌旁组织(P<0.01),EHD2的表达与Ki-67的表达呈明显负相关(r2=0.309,P=0.009).且EHD2的表达水平在乳腺癌的组织分化程度(P=0.001),淋巴结转移(P=0.024)及ER的表达(P=0.029)中差异显著,但与患者的年龄、肿瘤大小、组织学类型、PR、HER2、P53等其他临床病理参数无关.Kaplan-Meier生存分析显示,EHD2高表达的乳腺癌患者总生存时间(overall survival,OS)高于EHD2低表达患者(P<0.01).Cox回归分析表明,EHD2、Ki-67及淋巴结转移程度是影响乳腺癌术后生存时间的独立危险因素,危险系数分别达到0.281、2.510、2.254(P<0.05).结论:乳腺癌的增殖与EHD2表达降低有关,低表达EHD2的乳腺癌患者预后不良,提示EHD2对判断乳腺癌预后有一定的价值.
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EHD2在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义
检测喉鳞癌组织中EHD2的表达情况,探讨其与喉鳞癌患者的临床病理特征的相关性,并探讨其和增殖细胞核抗原Ki-67表达的相关性.采用免疫组织化学法(SP法)检测50例喉鳞癌组织和50例声带息肉组织中EHD2、Ki-67的表达水平,分析EHD2表达水平与喉癌患者的临床相关参数和预后的关系,并分析EHD2和Ki-67表达水平的关系.结果显示喉鳞癌组织中EHD2表达水平低于声带息肉组织(P<0.05),EHD2的表达与喉癌患者的肿瘤分化状况、淋巴结转移情况紧密相关(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤范围和TNM分期无明显相关性(P>0.05).生存分析显示EHD2表达与喉癌患者预后关系密切,高表达组患者生存率高于低表达组(P<0.01).EHD2表达与Ki-67表达呈负相关(P<0.05).EHD2在喉鳞癌组织中的低表达,其很可能作为一种抑癌因子参与抑制喉癌发生发展的过程,且EHD2低表达对喉癌患者的预后具有重要意义.
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EHD2在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
目的 研究EHD家族蛋白2(EHD2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系.方法 本研究采用蛋白印迹实验检测4对新鲜的NSCLC组织和癌旁组织中的表达,应用免疫组化法检测91例NSCLC组织中EHD2与Ki-67的表达,并分析其与临床参数之间的关系,及EHD2与NSCLC患者预后的关系.结果 蛋白印迹实验显示EHD2在4对NSCLC癌组织中低表达,在癌旁组织中高表达;免疫组化结果表明EHD2的表达在分化好的癌组织中表达比分化差的组织高,其趋势与Ki-67的表达相反.NSCLC中EHD2与组织学分化、pTNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移以及Ki-67密切相关;EHD2低表达与NSCLC患者的不良预后密切相关.结论 EHD2表达异常可能与NSCLC的发生发展关系密切;EHD2可作为判断NSCLC预后的指标,并可作为治疗的潜在靶点.
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EHD2下调促进乳腺上皮细胞转化的研究
目的 研究EHD2与肿瘤的关系及其表达抑制对乳腺上皮细胞转化能力的影响.方法 取3例浸润性乳腺导管癌及其配对癌旁正常组织,通过Western Blot比对EHD2的蛋白表达水平.siRNA干扰非癌乳腺上皮细胞HBL100的EHD2蛋白表达水平,研究EHD2下调对细胞悬浮性克隆生长能力的影响.结果 EHD2在癌组织中的蛋白表达均高于正常乳腺组织(F=5.389,P＜0.05)；siRNA干扰EHD2表达明显降低(t=101.458,P＜0.005),HBL100细胞的悬浮生长克隆数显著增加(t=88.754,P＜0.000).结论 EHD2可能是新乳腺抑癌基因,它的表达缺失可能引起正常上皮细胞的恶性转化.
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EHD2蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义
目的：探讨 EHD2蛋白在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）组织中的表达情况及意义。方法：采用 Western blot 技术和免疫组织化学法（SP 法）检测 ESCC 和相应癌旁正常组织 EHD2蛋白的表达水平，分析其表达与患者临床病理学参数的关系。结果：在8对新鲜食管鳞癌组织中，EHD2蛋白在食管鳞癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织（P ﹤0.01）；在44例石蜡标本中，EHD2蛋白在食管鳞癌组织的阳性表达率明显低于癌旁正常组织（P ﹤0.05），且 EHD2蛋白的表达明显与有无淋巴结转移（P =0.006）和组织分化程度相关（P =0.023），与患者的年龄、性别、肿瘤大小和 TNM 分期无相关性（P ﹥0.05）。结论：EHD2蛋白在食管鳞癌组织中低表达，提示 EHD2蛋白可能是新的食管鳞癌抑癌因子，并有望为食管鳞癌的预后判断和治疗提供新的思路。
关键词： EHD2 食管鳞状细胞癌 Western blot 免疫组织化学
