首页 > 文献资料
-
DT390与TMTP1融合蛋白靶向治疗卵巢癌的实验研究
目的:探讨白喉毒素(diphtheria toxin,DT)片段DT390与靶向肽TMTP1的融合蛋白对卵巢癌的治疗效果.方法:以卵巢癌顺铂耐药细胞株C13*及顺铂敏感细胞株OV2008为细胞模型,设对照组、TMTP1组、DT390-TMTP1组、DT390-biTMTP1组及DT390-triTMTP1组.激光共聚焦显微镜观察各组细胞核的形态.MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率.建立裸鼠C13*细胞皮下瘤模型,观察肿瘤的形成及生长,TUNEL法检测皮下瘤组织的细胞凋亡率.结果:激光共聚焦显微镜观察到DT390-biTMTP1和DT390-triTMTP1引起细胞核皱缩和碎裂.MTT结果显示细胞存活率随着DT390-biTMTP1与DT390-triTM-TP1浓度增加而显著降低.流式细胞术检测结果显示DT390-biTMTP1组与DT390-triTMTP1组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05),并且DT390-biTMTP1组与DT390-triTMTP1组的C13*细胞凋亡率为66.0%±12.0%与72.9%±4.6%,较OV2008细胞的55.5%±8.9%与65.1%±9.8%更高.裸鼠皮下瘤结果显示DT390-biTMTP1与DT390-triTMTP1均显著抑制卵巢癌皮下瘤的形成(P<0.01)及生长(P<0.05).TUNEL检测显示DT390-biTMTP1组和DT390-triTMTP1组皮下瘤组织的细胞凋亡率显著增强(P>0.05).同时,以上实验结果均显示DT390-TMTP1对C13*及OV2008细胞无明显作用(P>0.05).结论:DT390-biTMTP1及DT390-triTMTP1融合蛋白靶向抑制卵巢癌细胞,显示了潜在的临床应用前景.
-
一种新型重组免疫毒素DT390-Rantes真核表达质粒的构建及功能
目的构建一种新型重组免疫毒素DT390-Rantes的真核表达质粒,并对这种免疫毒素的功能进行初步研究.方法通过RT-PCR的方法,从小鼠肝脏中获得Rantes基因;将Rantes基因插入到含有DT390片段的真核质粒SRα中,构建成重组质粒;重组质粒转入大肠杆菌JM109,筛选出含有正确插入片段的克隆;限制性内切酶酶切图谱分析重组质粒,并进行DNA序列分析;用脂质体介导法转染NIH3T3细胞,免疫荧光检测重组质粒的表达情况;MTT法测定DT390-Rantes的表达活性.结果经过酶切分析及DNA测序证实,Rantes基因正确插入到真核表达质粒SRα中,并在NIH3T3细胞中表达;MTT法证实,重组免疫毒素DT390-Rantes能在体外杀伤活化的T细胞.结论成功地构建了一种新型重组免疫毒素真核表达质粒DT390-Rantes-SRα,该质粒可在真核细胞中瞬时表达,其转染上清对活化的T细胞具有杀伤作用.
-
免疫毒素IP10-DT390核酸制剂对实验性变态反应性脑脊髓炎的治疗作用
研究重组免疫毒素杀伤活化T 细胞后,对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的发生和发展产生的抑制作用.利用含有编码重组免疫毒素IP10-DT390的真核质粒,直接导入动物肌肉,使IP10-DT390在骨骼肌内表达,通过IP10-DT390对活化T细胞的选择性杀伤,探索对EAE的治疗效果.实验结果显示,这种新型免疫毒素核酸制剂可以减轻EAE模型鼠的发病症状、选择性的减少中枢系统自身活化的T 淋巴细胞浸润、降低外周血T细胞数量,而对免疫反应的其他成分影响不明显.该免疫毒素核酸制剂可能成为治疗有关自身免疫性疾病的一种新的有效方法.
关键词： 实验性变态性脑脊髓炎 IP10 DT390 重组免疫毒素 T细胞 -
免疫毒素基因DT390真核表达载体的构建及功能研究
目的:构建一种新型免疫毒素DT390-mIP10(白喉杆菌毒素390-小鼠γ干扰素诱导性蛋白10)基因的真核表达质粒,并对其功能进行初步研究.方法:通过RT-PCR扩增mIP10基因,并插入到含有DT390基因片段的真核质粒SRα中,构建重组质粒.以PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,用免疫荧光检测重组质粒的表达;用MTT比色法测定重组免疫毒素质粒的生物学活性.结果:构建了DT390-mIP10的真核表达载体SRα-DT390-mIP10,并在NIH3T3细胞中获得表达.表达的DT390-mIP10在体外能有效地杀伤活化的T细胞.结论:免疫毒素基因重组真核表达载体DT390-mIP10的构建成功并在真核细胞中表达,为其在肿瘤及自身免疫性疾病治疗方面的进一步应用研究奠定了基础.
-
新型重组免疫毒素DT390-mRantes治疗小鼠EAE的初步研究
目的:构建一种含有重组免疫毒素DT390-mRantes(白喉杆菌外毒素390片段-活化T细胞表达与分泌调节因子)的真核表达质粒, 并用于治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE).方法:利用自提的MBP诱导C57BL/6小鼠产生EAE, 将mRantes导入含有DT390的真核表达质粒SRα中, 经阳离子纳米脂质体包被后, 治疗小鼠EAE, 同时对其临床症状、脑部病理改变、外周血相关细胞因子及T/B细胞比例进行检测, 了解该重组免疫毒素的治疗效果.结果:成功构建真核表达质粒DT390-mRantes-SRα, 治疗组小鼠临床症状减轻, 脑部特异性淋巴细胞浸润减少, 外周T细胞相关细胞因子表达降低, T/B细胞比例降低.结论:新型重组免疫毒素DT390-mRantes治疗小鼠EAE有较为明显的效果, 为治疗人的多发性硬化(MS)提供有益的借鉴.
关键词： 实验性变态性脑脊髓炎 DT390 mRantes 重组免疫毒素
