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人巨细胞病毒感染对腮腺导管上皮细胞角蛋白K8和K18表达的影响
目的 研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对腮腺导管上皮细胞角蛋白K8和K18表达的影响.方法 用免疫组化方法研究腮腺巨细胞包涵体病(PCID)石蜡包埋组织中巨细胞病毒立即早期抗原和角蛋白K8、K18的表达.结果 PCID腮腺组织导管上皮出现包涵体巨细胞;包涵体巨细胞HCMV抗原DDG9/CCH2阳性;包涵体巨细胞角蛋白K8表达呈阴性,而K18表达呈强阳性.结论 HCMV感染腮腺导管上皮细胞诱发角蛋白K8降解,K18表达上调是一种反应性改变;单层上皮角蛋白网具有维持上皮细胞机械力学完整性的功能.
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慢性乙型肝炎患者血清角蛋白18裂解片段及其应用研究进展
近年来,血清角蛋白18及其裂解片段在肝病诊断方面的应用潜力引起了国内外研究者的强烈兴趣,但其在慢性乙型肝炎方面的应用研究较少.该文总结和探讨了循环血角蛋白18裂解片段M30及M65水平变化在慢性乙型肝炎中的意义以及应用前景.
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细胞角蛋白18-mRNA的表达与口腔鳞状细胞癌侵袭转移的关系
目的 探讨单层细胞角蛋白(cytokeratin,cK)18-mRNA表达与口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的局部侵袭与血道转移的关系.方法 选用23例OSCC组织及相应癌旁组织,通过半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法在不同时段检测CK-18-mRNA在OSCC外周血中的表达,探讨CK-18-mRNA与OSCC远处转移及复发的关系.结果 23例OSCC组织中有16例CK-18-mRNA呈阳性表达,但表达量存在明显差异(P＜0.01),与肿瘤部位无关.OSCC组织中CK-18-mRNA表达量[(29.30±22.37)%]显著高于痛旁组织[(15.50±11.07)%,P＜0.01];其表达量与临床分期、分化程度及淋巴结转移有关.23例OSCC术前外周血中有4例出现CK-18-mRNA表达,仪1例在随访过程中始终存在CK-18-mRNA的表达.结论 CK-18-mRNA可作为预测OSCC侵袭转移的辅助指标,中晚期患者外周血中CK-18的表达不能作为确诊OSCC远处转移的指标,但通过连续观察能够为监测OSCC转移与复发提供参考依据.
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角蛋白18在HepG2细胞凋亡中的磷酸化(Ser33,Ser52)及其意义
目的 研究角蛋白18 (keratin18,K18) 在人肝癌细胞HepG2凋亡中的磷酸化情况并分析其意义.方法 以不同浓度的顺铂(cisplatin,CDDP)作用于HepG2细胞,用双标记流式细胞术(Annexin V/PI)染色检测HepG2细胞的凋亡情况,免疫荧光法和蛋白质印迹法检测不同凋亡状态下K18的磷酸化水平.结果 顺铂可以使HepG2细胞发生明显的凋亡,而且凋亡比例随着药物浓度的增加而增加;52位丝氨酸(Ser52)磷酸化水平随着药物浓度增加而增加;33位丝氨酸(Ser33)磷酸化在低浓度药物作用下增加,但在高浓度药物作用下明显减少.结论 Ser33和Ser52磷酸化的K18与HepG2细胞凋亡有密切关系.
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角蛋白18磷酸化与奥沙利铂作用下结肠癌HCT116细胞凋亡的关系
目的 探讨在化疗药物作用下角蛋白18(K18)磷酸化与结肠癌HCT116细胞凋亡的关系.方法 以不同浓度的奥沙利铂作用于HCT116细胞,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术和钙黄绿素-AM/碘化丙啶(Calcein-AM/PI)法检测细胞凋亡情况,免疫印迹(western blotting)方法检测K18磷酸化表达水平;HCT116细胞分别转染绿色荧光蛋白(GFP)、野生型K18和33、52丝氨酸(Ser33A、Ser52A)磷酸化位点突变的K18质粒后,用奥沙利铂处理,Annexin V-FITC/PI和Calcein-AM/PI法分析K18及其突变对细胞凋亡的影响.结果 奥沙利铂可以使HCT116细胞发生明显的凋亡,而且凋亡比例随着药物浓度的增加而升高,经20、60、100 μmol/L奥沙利铂处理后,细胞较对照组均出现凋亡增加,依次为(15.6±3.1)％、(30.1±4.9)％和(62.6±6.8)％,两两比较差异均有统计学意义(P均＜ 0.05);K18的Ser33、Ser52磷酸化水平也随着药物浓度的增加而增加;单纯质粒转染的各细胞组之间的凋亡率差异均无统计学意义(P＞0.05),但经过奥沙利铂处理后,Ser33A和Ser52A质粒转染的HCT116细胞的凋亡率[(27.3±6.7)％和(31.2±8.1)％]明显低于GFP和K18质粒转染的细胞凋亡率[(40.5±4.8)％和(50.9±6.3)％,P＜0.05],转染K18质粒组的HCT116细胞的凋亡率高于GFP转染对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);Ser33A和Ser52A质粒转染组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 K18 Ser33和Ser52磷酸化水平随着细胞凋亡水平的增加而增加;K18过表达提高了HCT116细胞对奥沙利铂的敏感性,而抑制K18 Ser33和Ser52的磷酸化可以减少化疗药物作用下结肠癌细胞的凋亡.
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角蛋白18在33和52位丝氨酸磷酸化水平的变化及与肝纤维化的关系
目的 探讨角蛋白18(keratin 18,K18)在33和52位丝氨酸(Ser)磷酸化水平变化的作用及其与肝纤维化的关系.方法 6周龄Balb/C小鼠30只,分为3组(对照组和2个实验组),每组10只.对照组腹腔内注射橄榄油;实验组腹腔内注射四氯化碳(CCl4)和橄榄油的混合液(1:9),10 ml/kg,每周2次,连续4周,分别在2周和4周处死小鼠.应用组织化学免疫荧光法检测正常对照小鼠和肝纤维化小鼠肝组织中K18及其磷酸化Ser33和Ser52的表达及其相对亚细胞定位;免疫印迹法(Western blotting)检测正常对照小鼠和肝纤维化小鼠肝组织的K18及其磷酸化Ser33和Ser52水平.结果 组织化学免疫荧光结果显示,K18在正常对照小鼠和肝纤维化小鼠肝组织中均有表达,但在小鼠肝纤维化不同阶段无明显差异;在正常对照小鼠肝组织中表达比较弱,而随着肝纤维化的进展表达增强.West-ern blotting结果,肝纤维化小鼠肝组织中的Ser33和Ser52磷酸化的K18表达水平显著增加,尤其是Ser33表达增加更为明显.
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非酒精性脂肪性肝病患者血清中GK-18水平检测的诊断价值及其与生化指标的相关性分析
目的：探讨非酒精性脂肪性肝病（ NAFLD）患者血清中GK-18水平检测的诊断价值及其与生化指标的相关性。方法选取2014年10月—2016年6月九江学院附属医院收治的NAFLD患者168例为观察组，选择同期在本院进行体检的健康者160例为对照组，分别检测两组受检者血清丙氨酸氨基转移酶（ ALT）、γ-谷氨酰胺转肽酶（γ-GT）、天门氨酸氨基转移酶（ AST）、三酰甘油（ TG）、低密度脂蛋白胆固醇（ LDL-G）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-G）、空腹血糖（FPG）等生化指标以及血清中细胞角蛋白（GK-18）的M30和M65片段水平。结果观察组患者血清γ-GT、AST、TG、LDL-G、FPG、M30和M65水平高于对照组，差异有统计学意义（ P〈0.05）；两组受检者血清ALT、HDL-G水平比较，差异无统计学意义（ P〉0.05）。Pearson相关分析显示，血清GK-18 M30和M65水平与ALT、γ-GT、AST、TG、LDL-G、HDL-G、FPG呈正相关（ P〈0.05）。结论血清GK-18片段水平能够准确反映NAFLD患者的病变状态，且与生化指标水平呈正相关。
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改良型混合酶消化法培养小鼠乳腺上皮细胞
背景:目前采用的A型胶原酶和胰蛋白酶混合酶分离乳腺细胞团的方法操作复杂,实验条件要求高.目的:观察改良型混合酶消化法能否成功进行乳腺上皮细胞的体外培养.方法:采用Ⅰ型、Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶(1∶1∶1)混合消化直接用眼科剪剪碎的小鼠乳腺组织,37 ℃振荡消化获取乳腺细胞团,并采用差速贴壁法去除成纤维细胞,将细胞团接种于细胞培养瓶进行培养.结果与结论:倒置显微镜下观察显示,改良型混合酶消化法能获得较多的细胞团,且培养12 h后细胞团绝大多数贴在细胞瓶壁,培养72 h后细胞团完全铺开融合成片,细胞呈典型的铺路石样.免疫荧光细胞化学染色结果显示,培养细胞角蛋白18呈阳性反应.说明应用改良型混合酶消化法能在短时间内获得大量较纯的乳腺上皮细胞.
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HBV相关慢加急性肝衰竭患者血清M30和CCL20水平变化及意义
目的 观察HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者血清M30、CCL20的水平及其与短期(3个月)预后的关系,分析其临床意义.方法 收集2014年10月-2017年1月在湖南省人民医院感染科诊治的HBV-ACLF患者51例(HBV-ACLF组);住院或门诊随访慢性乙型肝炎(CHB)患者30例(CHB组);健康体检者30例为对照组.HBV-ACLF患者随访3个月,根据随访结果分为存活组及死亡组.采用ELISA法检测各组基线及HBV-ACLF组患者治疗2周后外周血血清M30、CCL20水平.计量资料2组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析.结果 治疗前HBV-ACLF组、CHB组和对照组M30、CCL20水平[(591.54±262.06)、(241.58±120.33)、(114.35 ±52.09)U/L;(386.51 ±55.12)、(177.11±27.51)、(33.95±11.62) pg/ml]3组间差异有统计学意义(F值分别为22.75、51.47,P值均＜0.05).治疗2周后HBV-ACLF死亡组患者M30水平显著高于存活组[(648.17±285.55)U/L vs (426.43±217.64) U/L,t=2.37,P＜0.05],HBV-ACLF死亡组CCL20水平显著低于存活组[(232.28±39.28) pg/ml vs(352.29±52.43) pg/ml,t=-2.35,P＜0.05].治疗2周时与治疗前HBV-ACLF死亡组和存活组血清M30和CCL20水平的变化率[(0.08±0.04)vs(0.27±0.12);(0.39±0.06)vs(0.11 ±0.02)]差异均有统计学意义(t值分别为2.49、2.54,P值均＜0.05).结论 血清M30、CCL20水平在HBV-ACLF患者中显著升高,能够较为准确的反映肝脏的细胞凋亡及炎症程度.治疗过程中CCL20水平明显下降的患者病死率更高,M30水平明显下降的患者有相对较好的预后,动态观察M30、CCL20水平变化可能对预测HBV-ACLF患者的短期预后有一定价值.
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急性胰腺炎患者血清M30、M65及白细胞介素17水平的变化及意义
目的 探讨急性胰腺炎(AP)患者血清M30、M65及IL-17水平的变化及临床意义.方法 选取2009年12月-2013年12月延安大学附属医院收治的126例AP患者,根据临床诊断分为轻度急性胰腺炎(82例)和急性重症胰腺炎(44例).选择同期本院体检中心体检的健康人员107例为对照组,分别于第1、2、4天分析3组患者血清中M30、M65、白细胞介素(IL)17水平,以及血清M30/M65值.计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验,两组间比较采用独立样本t检验;计数资料组间比较采用x2检验.结果 急性重症胰腺炎及轻度急性胰腺炎患者在第1、2、4天时其血清M30、M65、IL-17水平均显著高于健康受试者(P值均＜0.05),而M30/M65比值则显著低于健康受试者(P＜0.001);急性重症胰腺炎患者在第1、2、4天时其血清M30、M65水平均显著高于轻度急性胰腺炎患者(P值均＜0.001),急性重症胰腺炎患者的M30/M65值则在第1天时显著低于轻度胰腺炎患者(P值均＜0.001),但IL-17在轻度急性胰腺炎患者与急性重症胰腺炎患者间差异无统计学意义(P＞0.05).M65和IL-17在诊断AP的过程中具有良好的敏感性及特异性.结论 AP发作后24h血清M65、IL-17水平和M30/M65值可能成为早期评估AP严重程度的血清生物学标志物.
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HBV相关慢加急性肝衰竭患者血清M30、M65检测及其临床意义
目的 检测HBV相关慢加急性肝衰竭(ACtF)患者血清M30、M65的水平,探讨其与疾病的关系.方法 选取31例HBV相关ACLF患者(好转20例,无效11例);20例慢性乙型肝炎(CHB)患者,10例健康人为对照,采用EHSA方法检测外周血清中M30、M65水平,多组间数据比较采用方差分析,两两比较采用q检验.结果 ACLF组血清M30[(508.65±340.16)U/L]、M65[(768.75±290.02)U/L]高于CHB组[(212.27 ±91.33) U/L,P ＜0.05;(384.40±134.46)U/L,P ＜0.05]和健康对照组[(94.12±17.64)U/L,P ＜0.05;(121.99 ±29.25)U/L,P ＜0.05].ACLF患者血清M30与M65水平呈正相关(r=0.78,P＜0.05).好转组与无效组血清M30、M65水平差异无统计学意义[(572.38 ±349.45) vs (436.14 ±285.59)U/L,P =0.29;(817.25 ±307.66) vs(703.90±221.37) U/L,P=0.31].结论 M30、M65水平能够较为准确的反映肝脏的细胞凋亡及坏死程度,在HBV相关ACLF患者中显著升高.
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细胞角蛋白18磷酸化与乙型肝炎病毒感染的关系
目的 了解细胞角蛋白18(CK18)磷酸化水平与HBV感染之间的关系.方法 选取CHB患者肝活组织标本21份,另选肝移植健康供体肝组织14份作为对照,免疫荧光双染法和Western印迹检测其CK18磷酸化丝氨酸(pSer) 33及pSer52水平的变化;利用HepG2细胞系转染1.3 mer HBV载体或者不含HBV的空载体,免疫荧光双染法和Western印迹检测其CK18 pSer33及pSer52水平的变化,提取细胞总mRNA,实时定量PCR相对定量分析细胞分化周期因子2(cdc2),蛋白激酶Cε(pKCε)的表达水平.两独立样本间采用t检验.结果 与健康对照者相比,CHB患者HBsAg染色的肝细胞,CK18 pSer33水平显著增高(t=6.618,P=0.000),而pSer52差异无统计学意义(t=2.429,P=0.051);转染HBV的HepG2细胞CK18 pSer33水平,cdc2 mRNA水平均显著高于转染空载体的细胞(t=5.365,P=0.006),而pSer52和pKCεmRNA水平则差异无统计学意义(t=1.098,P=0.334).结论 HBV感染与CK18 pSer33水平的变化密切相关.
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角蛋白18与乙型肝炎病毒相关慢加急性(亚急性)肝衰竭患者预后的相关性
目的 研究HBV相关慢加急性(亚急性)肝衰竭(HBV-ACLF)患者血清角蛋白18(K18)水平及其与患者预后之间的关系.方法 选取2012年12月至2014年10月在福州市传染病医院就诊并被确诊为HBV-ACLF的患者120例,选择HBV-ACLF患者的性别和年龄匹配的CHB患者20例、健康体检者20名.ELISA法检测血清K18(M30、M65)片段含量,分析先入组的40例ACLF患者、CHB患者、健康体检者间M30、M65、M30/M65及其他实验室指标的差异.所有HBV-ACLF患者随访3个月,分成死亡组和存活组,测定其M30、M65值,并收集相关临床资料.计量资料组间比较采用两独立样本t检验或单因素方差分析,计数资料采用X2检验,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析预测价值,参数相关采用Pearson相关分析.结果 HBV-ACLF组、CHB组和健康对照组血清M30分别为(2.99±0.29)、(3.12±0.26)和(2.16±0.12) lg U/L(F=95.36,P＜0.01),M65分别为(3.41±0.29)、(3.38±0.29)和(2.01±0.11)lg U/L(F=217.60,P＜0.01),M30/M65分别为0.39±0.11、0.55±0.09和1.45±0.34(F=202.63,P＜0.01).HBV-ACLF组白细胞计数、TBil、ALT、AST在3组中高,血小板计数、白蛋白、血Na+、PTA低.对120例HBV-ACLF患者随访3个月,死亡40例,病死率为33.3％.M30/M65和终末期肝病模型评分曲线下面积分别为0.871和0.668(Z=3.011,P＜0.01),M30/M65比值与终末期肝病模型评分呈显著负相关(r=一0.389,P＜0.01).结论 K18(M30、M65)与肝脏疾病的严重程度密切相关.M30/M65比值对HBV-ACLF具有良好的诊断与预后评估意义.
关键词： 角蛋白18 肝炎病毒 乙型 慢加急性(亚急性)肝衰竭 预后 -
细胞角蛋白18和Fas在非酒精性脂肪性肝病中的表达及临床意义
目的 探讨细胞角蛋白18片段M30 (CK18 M30)和Fas水平在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD),尤其是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)中的诊断价值.方法 共纳入58例NAFLD患者,其中36例NAFLD患者接受了肝活组织检查,根据NAFLD活动度积分(NAS)和肝纤维化分期,分为NASH组(24例)和非NASH组(12例).将同期15名健康体检者作为健康对照组.采用ELISA法检测受试者血清中的CK18-M30和Fas水平.评估组间CK18-M30和Fas的水平差异采用秩和检验,用ROC曲线评估CK18-M30、Fas在NASH中的诊断价值.结果 NAFLD组患者血清CK18-M30的水平高于健康对照组[97.24(86.06,113.12) U/L比78.41(74.29,80.76) U/L,Z=4.206,P＜0.01];NASH组患者血清中的CK18-M30水平高于非NASH组[111.06(94.30,142.68) U/L比89.00(83.56,106.50) U/L,Z=-2.233,P＜0.05].CK18 M30诊断NASH的ROC曲线的AUC值为0.73(0.56,0.90),诊断NASH的敏感度和特异度分别为79.2％和58.3％,Fas诊断NASH的AUC值为0.58(0.38,0.77),诊断NASH的敏感度和特异度分别是54.2％和66.7％.NAFLD组与健康对照组、NASH组与非NASH组相比血清Fas水平升高,但差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 血清CK18-M30的水平对于NASH的诊断有一定价值.Fas对NASH的诊断价值有待扩大样本量后进一步研究.
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靶向CK18的shRNA表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响
目的:构建靶向人角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)基因的shRNA真核表达载体,稳定转染人乳腺癌MCF-7细胞株,观察其对MCF-7细胞增殖的影响.方法:设计两条靶向CK18基因的RNA干扰序列,命名为CK18-shRNA1、CK18-shRNA2,同时设计阴性对照,将合成的寡核苷酸链与Psilencer3.1-H1/Hygro质粒连接形成重组质粒,并经脂质体介导稳定转染MCF-7细胞,G418筛选后扩增获得稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR和Western blotting法检测细胞株中CK18 mRNA和蛋白的表达,并进一步通过MTT法检测重组表达载体稳定转染对细胞增殖的影响.结果:重组表达载体(Psilencer3.1-CK18-shRNA1、Psilencer3.1-CK18-shRNA2和Psilencer3.1-NC-shRNA)经PCR及DNA测序分析证明序列插入正确,经500 μg/ml G418筛选出稳定转染Psilencer3.1-CK18-shRNA的MCF-7细胞,Psilencer3.1-CK18-shRNA2转染可有效抑制MCF-7细胞中CK18 mRNA和蛋白的表达,而Psilencer3.1-CK18-shRNA1转染不影响MCF-7细胞中CK18 mRNA和蛋白的表达水平.与阴性对照Psilencer3.1-NC-shRNA组相比,Psilencer3.1-CK18-shRNA2转染可有效抑制MCF-7细胞的增殖[(0.40±0.01)vs(0.55 ±0.06),P＜0.05].结论:靶向CK18的shRNA表达载体稳定转染细胞后可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖.
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血清K18对乙型肝炎肝衰竭患者生存情况的影响
目的 探讨血清角蛋白18(K18)对乙型肝炎肝衰竭患者生存情况的影响.方法 选取2015年1月～2016年7月我院收治的97例乙型肝炎肝衰竭患者设为观察组,115例乙型肝炎非肝衰竭患者设为对照1组、120例健康对照组设为对照2组.对观察组患者进行3个月随访,根据生存情况将其分为存活组、死亡组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测所有研究对象的血清K18水平,包括M65、M30等.结果 观察组血清M65、M30显著高于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组1组血清M65、M30显著高于对照2组,差异有统计学意义(P＜0.05).死亡组血清 M65显著高于存活组,差异有统计学意义(P＜0.01),存活组与死亡组之间血清M30相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 合并肝衰竭可以影响乙型肝炎患者的血清M65、M30水平,且血清M65水平与乙型肝炎肝衰竭患者生存情况密切相关.
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血清sFas和M30对早期诊断慢性丙型肝炎患者肝纤维化的临床意义
目的：分析慢性丙型肝炎（CHC）患者血清sFas和M30的变化，探讨其对CHC患者肝纤维早期诊断的临床意义。方法纳入75例CHC患者（CHC组）和50例健康对照者（健康对照组），通过ELISA方法测定血清sFas及M30水平，通过受试者工作曲线（ROC）分析其用于诊断早期肝纤维化的临床价值。结果 CHC组中血清sFas和M30均显著高于健康对照组（P ＜0．001）；在肝纤维化程度不同的CHC患者组间比较中，血清sFas和M30差异具有统计学意义（P＜0．05）；sFas用于诊断CHC患者早期肝纤维化的曲线下面积（AUC）为0．652，95％ CI：0．439～0．731，P＜0．05，当临界值为15．38 ng／L时，其诊断的灵敏度为73．7％，特异度为71．6％；血清M 30用于诊断CHC患者早期肝纤维化的AUC为0．735，95％ CI：0．523～0．894，P＜0．05，临界值为433．90 U／L时，其诊断的灵敏度为72．8％，特异度为78．7％。结论血清sFas与M30在CHC患者内均高表达，其中M30对于诊断早期肝纤维化具有较佳的指示价值。
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基于角蛋白18的回归模型对乙型肝炎肝衰竭预后的意义
目的 研究HBV相关慢加急性肝衰竭患者血清角蛋白18 (K18)水平及其与患者预后之间的关系. 方法 选取2012年12月至2014年3月于福州市传染病医院肝内科就诊并被确诊为HBV相关慢加急性肝衰竭患者120例,随访3个月,分成死亡组和生存组,检测其血清K18 (M30、M65)片段含量,并收集相关实验室资料,分析不同组间M30、M65、M30/M65及其他实验室指标的差异.用二分类logistic回归分析,筛选出影响HBV相关慢加急性肝衰竭患者的死亡独立危险因素,构建相应logistic回归模型(LRM).再选取2014年4月至2014年10月HBV相关慢加急性肝衰竭患者51例,测定其M30、M65值,并收集相关临床资料,计算LRM值,验证LRM模型诊断价值.结果 对120例肝衰竭患者随访3个月,死亡40例,病死率33.3％.死亡组年龄、血氨、国际标准化比值、终末期肝病模型评分、M65值高于存活组,凝血酶原活动度、甲胎蛋白水平低于存活组;糖尿病、肝硬化、肝性脑病、肺部感染、上消化道出血、肝肾综合征等基础病及并发症在死亡组中的发生率高于存活组.年龄、肝性脑病(HE)、上消化道出血、直接胆红素、M30/M65是影响患者预后的独立危险因素,所构建的模型LRM=0.061×年龄+0.69 ×HE+ 4.11 ×上消化道出血+ 3.201 ×ln(直接胆红素)-3.875×ln (M30/M65)-24.248.计算51例HBV相关慢加急性肝衰竭患者LRM值和MELD评分,并随访3个月,LRM模型AUC 0.889,MELD评分AUC0.858,两者间差异没有统计学意义(Z=0.417,P＞0.5).结论 M30/M65比值对HBV相关慢加急性肝衰竭具有良好的诊断价值,构建的包含M30/M65的LRM模型对预测HBV相关慢加急性肝衰竭患者的短期预后有较高价值.
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角蛋白18磷酸化增加结肠癌HCT116细胞自噬并提高其对奥沙利铂的敏感性
目的 研究奥沙利铂(OXA)作用下角蛋白18(K18)磷酸化与结肠癌HCT116细胞自噬和凋亡的关系并分析其可能机制.方法 HCT116细胞分别转染空载质粒、野生型K18和33、52磷酸化位点突变的K18质粒(Ser33/52A),用60 μmol/L的OXA处理细胞,加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)或细胞自噬诱导剂雷帕霉素处理细胞.异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexinV-F1TC/PI)双标记结合流式细胞术以及钙黄绿素乙酰甲酯/碘化丙啶(calcein-AM/PI)染色法分析K18及其突变体对细胞凋亡的影响;Western blot法检测K18的磷酸化水平、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、beclin-1的表达.结果 Ser33/52A质粒的转染可以明显降低K18的磷酸化水平,经过OXA处理后,转染K18质粒组的HCT116细胞的凋亡率显著高于空载质粒转染对照组,而Ser33/52A质粒转染的HCT116细胞的凋亡率明显低于空载体和K18质粒转染的细胞凋亡率,K18质粒转染组细胞自噬明显高于空载转染对照组,而Ser33/52A质粒转染组自噬水平明显降低.结论 K18过表达促进HCT116细胞自噬及其对OXA的敏感性,而K18 Ser33和Ser52磷酸化水平的降低则抑制自噬并降低HCT116细胞的凋亡率.
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角蛋白KRT18对LRP16亚细胞定位的影响
目的:通过构建LRP16绿色荧光蛋白(GFP)融合子,观察LRP16蛋白在乳腺癌MCF-7、小鼠成纤维NIH3T3细胞株中的亚细胞定位,研究角蛋白18(Cytokeratin 18 ,KRT18)对LRP16亚细胞定位的影响,并利用Western-blot对KRT18能够调控LRP16核浆穿梭进一步验证.方法:构建真核表达载体pEGFP-LRP16,经脂质体介导pEGFP-LRP16质粒单独转染,与携带KRT18基因的Flag-pCDNA3-KRT18质粒共同转染NIH3T3、MCF-7细胞,荧光显微镜观察LRP16的亚细胞分布变化.Western-Blot法进一步验证在KRT18过表达和小干扰(siRNA)技术沉默掉KRT18后对内源性LRP16蛋白核浆分布的影响.结果:成功构建pEGFP-LRP16融合载体,荧光显微镜观察LRP16蛋白在MCF-7细胞呈核型分布为主,在NIH3T3细胞呈浆型分布为主.与KRT18共同转导后LRP16亚细胞分布趋向细胞浆.Western blot分析证实角蛋白18会介导内源性LRP16由核向浆穿梭的生物学功能.结论:KRT18通过与LRP16相互作用将LRP16扣留在细胞浆,是影响LRP16亚细胞分布的关键因子.为进一步研究KRT18对LRP16翻译后核功能执行的调控机制奠定了基础.
