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小鼠抗中东呼吸综合征冠状病毒刺突蛋白受体结合区单克隆抗体的筛选
目的：制备抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV)刺突蛋白(S)受体结合区(receptor binding domain,RBD)的单克隆抗体(单抗),并对其特性进行鉴定。方法将昆虫-杆状病毒表达的 MERS-CoV S 蛋白 RBD 片段纯化后免疫 BALB/ c 小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 Sp2/0融合,通过有限稀释法筛选阳性克隆,用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹法(Western blot)和 MERS-CoV 假病毒中和试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定。结果共筛选出12株杂交瘤细胞,ELISA 证实其分泌的单抗与 MERS-CoV S 蛋白 RBD 片段有特异反应；双抗体夹心法鉴定其中两株单抗2E4和2F3为免疫球蛋白 IgM 型,其余10株均为 IgG1型；MERS-CoV 假病毒中和试验结果显示4株单抗：1F1、2E4、3C3、3E6有中和活性；Western blot 分析表明单抗1F1、2E4、3C3、3E6能特异识别 MERS-CoV S 蛋白,而不与 SARS-CoV S 蛋白的 RBD 反应。结论我们制备了12株针对 MERS-CoV S 蛋白 RBD 的鼠源单抗,所获杂交瘤细胞株特异性强,分泌抗体性能稳定,其中4株具有中和活性。
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快速眼动期睡眠行为障碍与神经变性疾病的研究进展
快速眼动(rapicl eye movement,REM)期睡眠行为障碍(REM behavior djsorder,RBD)是以REM睡眠期肌肉弛缓现象消失并出现与梦境相关的复杂运动为特征的发作性疾病,可导致自伤及同床者受伤并使睡眠中断,既往认为RBD仅仅是一种独立的睡眠障碍疾病.
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帕金森病睡眠障碍的主客观评估方法
睡眠障碍的表现形式多样,包括夜间睡眠问题和白天睡眠问题,前者包括失眠、快速眼球运动(REM)睡眠期行为障碍(RBD)、睡眠呼吸暂停综合征、不宁腿综合征(restless legs syndrome,RLS)、周期性肢体运动障碍(periodic limb movement disorder,PLMD);后者包括白天过度瞌睡、突发睡眠等,均可严重影响患者的生活质量.
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快速眼动睡眠行为障碍与α-突触核蛋白病关系的研究进展
快速眼动(REM)睡眠行为障碍(RBD)是以REM睡眠期出现肌张力缺失现象消失并伴随不愉快梦境相关的复杂运动为特征的发作性疾病.RBD与多种神经变性疾病有密切的联系,可能是α-突触核蛋白病的前驱表现.对RBD的深入研究,有利于进一步明确RBD与α-突触核蛋白病的准确关系,寻找能够识别具有发生α-突触核蛋白病高危因素RBD人群的生物学标志,早期识别发生α-突触核蛋白病的高危人群,并为其提供神经保护治疗,帮助延缓疾病进展.
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生殖道HPV感染合并HCMV、HSV、UU、CT感染情况分析
目的:对比HPV感染组与HPV未感染组之间合并HCMV、HSV、UU、CT四种病原体的感染情况,探讨生殖道HPV感染合并其它病原体感染对宫颈癌的发生、发展的影响.方法:收集经检测已知为HPV分型－种亚型或合并多种亚型呈阳性的宫颈分泌物DNA提取液87例,及HPV分型亚型呈阴性的宫颈分泌物DNA提取液43例,应用PCR结合反向寡核苷酸探针杂交技术检测(RDB);应用实时荧光定量PCR扩增检测技术(FQ－PCR)对上述标本进行了测定.结果:[1]HPV阳性组(87例)和HPV阴性组(43例)合并HCMV、HSV、UU、CT病原体感染的综合检出率分别为74.71%和49.42%;[2]HPV阳性组(87例)中合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为22.99%(20例)、1.15%(1例)、57.47%(50例)、24.13%(21例),HPV阴性组(43例) 合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为9.3%(4例)、0%(0例)、41.86%(18例)、6.98%(3例);[3]HPV阳性组按亚型不同可分为高危型组和低危型组.其中高危型组(78例)中合并HC、MV、HSV、UU、CT感染分的单项检出率分别为19.23%(15例)、1.28%(1例)、52.56%(41例)、17.94%(14例),低危型组(9例)中合并HCMV、HSV、UU、CT感染的单项检出率分别为55.56%(5例)、0%(0例)、100.00%(9例)、77.78%(7例);[4]HPV阳性组中以分型为16亚型的合并感染率高;HCMV、UU、CT分别为40.00%(8/20)、28.00%(14例)、19.05%(4例);[5]在87例HPV阳性组的病例中,查到30例有宫颈上皮内瘤样变(CIN)病例资料.这30例中有23例合并HCMV、UU、CT感染,其单项检出率分别为21.08%(6例)、69.57%(16例)、30.43%(7例);有7例HPV阳性CIN病例不合并HCMV、HSV、UU、CT感染.结论:宫颈上皮细胞HPV感染与宫颈癌的发生、发展有密切关系,HPV感染者也可同时合并其他泌尿生殖道常见病原体感染.多种病原体同时感染宫颈与宫颈癌的发生、发展及预后的关系有待进一步研究.
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15例夜间睡眠期行为异常患者的脑电图及多导睡眠图分析
目的 通过对夜间睡眠期行为异常患者的脑电图及多导睡眠图分析,鉴别诊断额叶癫痫及REM期睡眠行为异常(RBD),并结合文献对其临床表现、电生理特点进行总结.方法 对15例夜间睡眠期行为异常患者,均行长程录像脑电图(Video-EEG)及多导睡眠监测(PSG).并依据国际睡眠障碍分型修订版(ICSD-R)及国际抗癫痫联盟(ILAE)所制定的癫痫综合征分类标准,给予鉴别诊断及相应治疗,随访观察预后.结果 其中9例为额叶癫痫患者,其发作间期脑电图,额区、额中线区可见异常放电者7例；发作期脑电图,额区、额中线区可见节律性演变者2例,伴有大量肌肉及动作伪差,行为异常多发作于非快速眼动睡眠Ⅰ～Ⅱ期,睡眠结构中,总睡眠时间缩短、睡眠Ⅲ～Ⅳ期、REM睡眠期缩短、Ⅰ～Ⅱ期睡眠时间延长.6例为RBD患者:发作间期及发作期脑电图正常；PSG记录中,发作均位于REM期,并持续出现肌电活动增加,总睡眠时间、睡眠Ⅰ～Ⅱ期、REM睡眠期均缩短.结论 额叶癫痫及RBD的临床症状复杂,容易误诊、延诊,故借助神经电生理检查手段(长程脑电图结合PSG)可以提高疾病的诊断率.
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RBD + ODC 及其突变体融合表达质粒的构建和表达验证
目的：构建 RBD + ODC 及其突变体融合表达质粒，并进行验证。方法选取 Ras 下游效应分子Raf-1中能够与 K-Ras 蛋白相互作用的 RBD + CRD 氨基酸片段作为结合结构域，以 ODC 蛋白分子全长作为功能结构域。以正常人胰腺组织的 cDNA 为模板扩增相应的目的基因片段，应用分子克隆的方法通过在引物中引入 GS 片段使结合结构域和功能结构域相连并通过双轮 PCR 法在 ODC 功能位点引入突变，所获得的核苷酸片段均连入 pcDNA3.1真核表达载体中。结果与结论经测序和 Western Bolt 验证，成功构建了RBD + ODC 及突变体 RBD + ODC 的重组质粒，2种质粒均能够在人 HEK293T 细胞中正常表达。
