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P38激酶介导胆红素诱导的SHSY5Y细胞凋亡
观察P38激酶在胆红素诱导神经细胞凋亡中的作用,探讨参与此过程的信号转导通路.将胆红素(2×10-2g/L)直接作用于体外培养的人神经母细胞瘤细胞系SHSY5Y,利用Hochest33258染色在荧光显微镜下观察细胞核的形态是否发生凋亡样改变;用P38激酶抑制剂SB203580预处理细胞后,在倒置光显微镜下观察胆红素作用不同时间细胞形态的变化及存活情况;利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的改变.结果显示SHSY5Y细胞经胆红素作用后细胞核出现典型的凋亡样改变;细胞经SB203580预处理1h,胆红素作用3h后凋亡率为(12.1±2.4)%,对照组为(19.4±2.7)%;4h后凋亡率为(39.3±4.8)%,对照组为(66.2±5.2)%,差异有显著性意义(P＜0.01).提示P38激酶参与了胆红素诱导SHSY5Y细胞凋亡的信号转导过程.
关键词： 胆红素 P38激酶 凋亡 人神经母细胞瘤细胞系 -
反义P38cDNA抑制胆红素诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡
目的:观察P38激酶特异性抑制剂SB203580及反义P38激酶cDNA对胆红素诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响,探讨P38激酶信号转导通路在胆红素诱导SH-SY5Y细胞凋亡中的作用及高胆红素血症损伤中枢神经细胞的分子机制及在听神经病发病中的作用.方法:分别经SB203580和二甲基亚砜预处理的SH-SY5Y细胞在胆红素作用3h和5h后,在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况;流式细胞仪检测凋亡细胞百分率.采用脂质体法将含人反义P38cDNA的真核表达载体pcDNA3.0-antiP38导入SH-SY5Y细胞,建立稳定低表达P38蛋白的细胞株,经Western blotting鉴定后命名为SH-SY5Y-antiP38,而转染空载体pcDNA3.0的SH-SY5Y细胞株则命名为SH-SY5Y-pcDNA3.0;SH-SY5Y-antiP38细胞和SH-SY5Y-pcDNA3.0细胞分别经胆红素作用3h和5h,在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况;流式细胞仪检测凋亡细胞百分率.结果:在0.02g/L胆红素作用下,流式细胞仪显示与对照相比SB203580预处理的SH-SY5Y细胞在胆红素作用3h后,其凋亡细胞由19.4%下降到12.1%,5h后由66.2%降到39.3%;与SH-SY5Y-pcDNA3.0细胞相比,SH-SY5Y-antiP38细胞在胆红素作用3h后,其凋亡细胞由11.1%降到8.02%,5h后67%降到23.4%.结论:P38激酶参与了胆红素诱导SH-SY5Y细胞凋亡的信号转导.P38通路的激活可能在高胆红素血症导致的神经细胞损伤中(包括听神经细胞)发挥重要作用.
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慢性异丙肾上腺素刺激引起心肌细胞凋亡的机制研究
目的 探讨异丙肾上腺素(ISO)长期刺激其受体对心肌细胞凋亡的影响.方法 实验用雄性小鼠30只,分为3组,盐水对照组、ISO刺激组和ISO+SB203580干预组,分别通过埋植渗透给药泵持续给予盐水、ISO[30 mg/(kg·d)]或lSO+p38抑制剂SB203580[10 mg/(kg·d)],共7 d,随后取血清及心肌组织测定指标.结果 慢性ISO刺激引起明显的心肌肥厚和细胞凋亡,增加血清和心肌中炎症因子白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成(P＜0.01),增加诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达(63%)、一氧化氮(NO)及过氧化亚硝酸盐的生成(P＜0.01).SB203580干预后,p38激酶活性抑制,血浆和心肌中IL-6和TNF-α等炎症因子生成减少[干预组与ISO组比较,IL-6:(22.26±6.38)ng/L VS(51.32±9.20)ng/L.TNF-α:(11.75±1.09)ng/L vs(8.64±1.01)ng/L,P＜0.01],iNOS的表达及其介导的NO生成和过氧化亚硝酸盐损伤减少[干预组与ISO组比较,NO:(38.60±6.60)μmaol/g蛋白vs(58.80±13.28)μmol/g蛋白;硝基酪氨酸:(2.86±0.43)μg/g蛋白vs(4.20±0.47)μg/g蛋白,P＜0.01].超氧阴离子生成也减少.结论 本研究表明,慢性异丙肾上腺素刺激可以引起心肌细胞凋亡,这种致凋亡损伤可能是通过激活p38激酶,促进炎症因子生成,激活iNOS,增加自由基生成和损伤造成的.
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p38激酶-HSP27信号通路在染料木黄酮诱导人乳腺癌细胞肌动蛋白细胞骨架解聚中的作用
目的:研究染料木黄酮(genistein)对人乳腺癌细胞(MDA-MB-435)肌动蛋白细胞骨架的影响,探讨p38激酶-HSP27信号通路对染料木黄酮诱导的细胞骨架肌动蛋白重组调控的可能机制.方法:不同浓度染料木黄酮(12.5、25.0、50.0和100.0 μmol/L)体外孵育MDA-MB-435细胞24 h后,用免疫印迹法研究细胞内p38激酶和HSP27表达及磷酸化水平的改变,同时分析肌动蛋白,HSP27其在细胞内定位的改变.结果:染料木黄酮处理24 h,胞浆中的G-肌动蛋白含量明显增多,而细胞骨架中的F-肌动蛋白含量明显减少;p38激酶和HSP27的蛋白总量无明显改变,但二者磷酸化水平随着染料木黄酮处理浓度的增加逐渐降低;与此相应的是HSP27在胞浆中含量明显减少,在细胞骨架中含量明显增多.结论:p38激酶途径以及HSP27磷酸化/脱磷酸化过程可能介导染料木黄酮所致MDA-MB-435细胞肌动蛋白细胞骨架的重组.
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Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系
目的 探讨Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系.方法 实验设正常对照组(细胞未作其他处理)、人乙酰肝素酶重组蛋白处理组(5、10 μg/ml)以及提前3 h加入Src激酶特异性抑制剂pp2(5 μmol/L)或p38激酶特异性抑制剂SB 203580(1 μmol/L)再加入人乙酰肝素酶重组蛋白(10 μg/ml)作用24 h组.利用划痕损伤实验和Transwell小室基质侵袭实验分别检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞、高表达乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901细胞和乙酰肝素酶表达被下调的SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中Src激酶、p38激酶、磷酸化Src激酶(p-Src)和磷酸化p38激酶(p-p38)蛋白表达的影响.结果 与正常对照组比较,5和10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白均能明显增强人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力(P<0.05);与未加抑制剂的人乙酰肝素酶重组蛋白比较,抑制剂pp2和SB 203580均能削弱人乙酰肝素酶重组蛋白增强的人胃癌MGC-803细胞的迁移和基质侵袭能力(P<0.05).10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白促进人胃癌MGC-803细胞Src激酶和p38激酶的磷酸化,而SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中磷酸化的Src激酶和p38激酶表达水平较SGC-7901细胞明显下调(P<0.01);抑制剂pp2和SB 203580对人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶蛋白表达无明显影响;在人胃癌SGC-7901细胞和MGC-803细胞中,Src激酶的抑制剂pp2抑制磷酸化p38蛋白的表达,而p38激酶的抑制剂SB 203580对磷酸化Src蛋白表达无明显影响.结论 乙酰肝素酶可能通过促进Src激酶磷酸化或p38激酶的磷酸化或先促进Src激酶磷酸化再促进p38激酶的磷酸化,从而促进人胃癌细胞迁移和侵袭能力.乙酰肝素酶-Src激酶磷酸化-p38激酶磷酸化可能是人胃癌细胞内存在的与细胞迁移和侵袭有关的信号转导通路.
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黄芪注射液对布比卡因脊神经毒性损伤后p38激酶的影响
我国产科病人多采用椎管内麻醉进行剖宫产手术麻醉或分娩镇痛等,其中部分病人出现由于局麻药神经毒性反应引起的不同程度的神经系统并发症.
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急性机械牵张对正常和肥厚心脏p38激酶活性的影响
目的:探讨急性机械牵张对正常心脏和压力超负荷致心肌肥厚心脏的p38激酶活性的影响.方法:40只雌性SD大鼠随机分成4组各10只.其中C、D组行腹主动脉环扎术,造成左心室肥厚的动物模型.用Westernblot方法测定各组大鼠左心室肌的p38激酶活性.结果:术后4周C、D组大鼠有明显的心肌肥厚,心功能处于代偿期.A组即假手术不行急性机械牵张的大鼠左心室肌未见明显的p38激酶活化;而B组即假手术行急性机械牵张、C组术后不行急性机械牵张、D组术后行急性机械牵张的大鼠左心室肌中p38激酶均发生明显活化(P＜0.01);其中与C组比较D组p38激酶并未进一步活化.结论:p38激酶信号转导途径是机械牵张导致心肌肥厚的重要环节;但在已肥厚的心脏,p38激酶活性的改变可能能够阻止心脏再受额外刺激而发展为失代偿性肥厚.
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EGCG抗兔晶状体上皮细胞增殖机制中p38激酶作用的研究
目的:研究p38激酶在绿茶提取物中的表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-Epigallocatechin-3-gallate,EGCG]抗晶状体上皮细胞增殖机制中的作用.方法:用噻唑蓝比色法(MTT比色法)研究p38的特异性抑制剂SB203580对EGCG抑制晶状体上皮细胞增殖作用的影响;用Western Blo法研究EGCG对p38激酶的磷酸化和非磷酸化水平的影响.结果:(1)预先加入25 μmol/L,50μmol/L的SB203580孵育1 h后,100μmol/LEGCG对晶状体上皮细胞增殖的抑制率低于对照组,但这种差别没有统计学上的意义(P＞0.05);200μmol/L EGCG组对晶状体上皮细胞的抑制率低于对照组,有统计学的意义(P＜0.05);(2)在晶状体上皮细胞,磷酸化的p38基础水平很低.p38的磷酸化水平随EGCG浓度的增加逐渐增加,而非磷酸化的p38的水平与基础水平一样保持不变.以200 μmol/LEGCG作用15 min来研究其对p38的磷酸化和非磷酸化影响的时-效规律发现,加药后初期,p38的磷酸化水平很高,随后逐渐下降.同时,非磷酸化p38的水平保持不变.结论:(1)EGCG对晶状体上皮细胞的增殖抑制作用可能通过p38通路;(2)EGCG对p38影响主要在于调节蛋白激酶的磷酸化与去磷酸化水平,不影响总蛋白含量.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 P38激酶 晶状体上皮细胞 -
心力衰竭过程中大鼠左心室肌p38激酶的动态变化和细胞内分布规律
目的探讨压力超负荷致心力衰竭过程中p38激酶活性的变化及其细胞内分布规律.方法40只雌性SD大鼠随机分成4组,每组10只.其中2组行腹主动脉缩窄术,增加左心室压力后负荷;术后通过一定时程的喂养,建立心力衰竭的动物模型.用WesternBlot方法测定各组大鼠左心室肌的p38激酶和p-p38激酶的含量并对其组织切片行免疫组化染色.结果腹主动脉缩窄术后4周,大鼠有明显的心肌肥厚(P＜0.01),此时心功能处于代偿期;术后8周,出现失代偿性心力衰竭(P＜O.05).术后4周,大鼠左心室肌中p38激酶发生明显活化(P＜0.01)且有核转位现象;术后8周,左心室肌中p38激酶的活化程度反而下降(P＜0.01),核转位现象减少.结论p38激酶的激活是压力超负荷介导心力衰竭的重要环节,它在心力衰竭的不同阶段中调控细胞生长有重要作用;心力衰竭期间p38激酶活性的下降或许对此过程中的心肌正常生长和心肌重塑起作用.
