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P38 MAPK信号通路参与BMP-13诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化
目的 探讨P38 MAPK对BMP-13诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化的影响.方法 实验共4个部分,分组如下:1)BMP-13腺病毒(Ad-BMP-13)对P38 MAPK的作用:Ad-BMP-13转染组、Ad-GFP转染组和C3H10空白组.Western blot检测磷酸化P38 MAPK(p-P38 MAPK)和总P38 MAPK(t-P38 MAPK)的表达变化,免疫荧光技术定位p-P38 MAPK;2)P38 MAPK干扰腺病毒(Ad-si-P38)对P38 MAPK的作用:si-P38干扰组、si-NC干扰对照组和C3H10空白组.Western blot检测t-P38 MAPK的表达；3)Ad-si-P38阻断P38 MAPK后对BMP-13诱导分化的影响:si-P38+ Ad-BMP-13转染组、si-NC+ Ad-BMP-13转染组、si-NC+ Ad-GFP转染组和C3H10空白组.Western blot检测cTnT和Cx43的表达,荧光定量PCR检测GATA-4和MEF-2C的mRNA表达；4)SB203580阻断P38 MAPK后对BMP-13诱导分化的影响:DMSO+ Ad-BMP-13转染组、SB203580(2、5和10 μmol/L)+Ad-BMP-13转染组.荧光定量PCR检测GATA-4和MEF-2C的mRNA表达.结果 BMP-13促进P38 MAPK的磷酸化.Ad-si-P38可以有效降低P38 MAPK表达水平.Ad-si-P38阻断P38 MAPK后BMP-13诱导组cTnT、Cx43表达有明显降低(P＜0.05),GATA-4和MEF-2C的表达也有显著降低(P＜0.05).随P38 MAPK特异性抑制剂SB203580浓度增加,BMP-13诱导组GATA-4和MEF-2C的表达降低(P＜0.05).结论 Ad-BMP-13可以通过激活P38 MAPK信号通路来调控C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化.
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P38抑制剂SB203580对大鼠脑缺血再灌注后AQP4表达及脑水肿的影响
目的 探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580对大鼠脑缺血再灌注后脑组织水通道蛋白4(AQP4)表达及脑水肿的影响.方法 SPF级雄性SD大鼠54只,随机分为假手术组(sham组)、模型组(/R组)和P38抑制剂组(SB203580组).用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.模型组与P38抑制剂组分别于造模前15 min舌下静脉注射10％二甲基亚砜(DMSO,400 μg/kg)和P38抑制剂(SB203580,400 μg/kg).缺血2h再灌注24h后对大鼠进行神经功能缺损评分,采用HE染色观察大鼠脑组织病理改变,干湿比重法测定缺血半球的脑含水量,Western blot检测磷酸化P38 (p-P38)和AQP4蛋白的表达、RT-PCR法检测AQP4 mRNA的表达.结果 与I/R组相比,SB203580组大鼠神经功能缺损症状明显改善,缺血侧半球脑含水量明显降低(P＜0.05).I/R组大鼠缺血周边区脑组织p-P38、AQP4蛋白及mRNA的表达分别为2.463±0.138、2.660±0.130及1.065±0.125,高于SB203580组的1.653±0.105、1.771±0.092及0.552±0.069 (P ＜0.05).结论 P38抑制剂SB203580减轻大鼠脑缺血再灌注后AQP4表达及脑水肿,其机制可能与SB203580抑制P38信号通路的激活降低了下游AQP4的表达有关.
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高渗盐水影响小胶质细胞释放单核细胞趋化蛋白1的研究
目的 在体外细胞实验中探讨高渗盐水(hypertonic saline,HS)是否影响小胶质细胞的激活及释放单核细胞趋化蛋白-1 (monocyte chemotactic protein 1,MCP-1),以及其潜在的机制.方法 体外混合培养原代胶质细胞,利用摇床震摇的方法纯化分离小胶质细胞,分为对照组、缺氧+无糖培养基组(简称缺氧组)、缺氧+无糖培养基+ 100 mmol/L HS组(简称HS组)及SB203580组(p38信号通路特异抑制剂).除对照组外,其他各组均进行氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD),利用免疫荧光及ELISA方法检测HS对小胶质细胞生成及释放MCP-1的影响,并使用Western blot方法检测HS是否可影响p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白的磷酸化水平.数据采用单因素方差分析,用LSD法进行组间两两比较,P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 免疫荧光实验显示缺氧组与对照组比较,MCP-1表达明显增高;HS与缺氧组比较,MCP-1表达明显减少;ELISA检测发现缺氧4h后,SB203580组及HS组与缺氧组比较,细胞培养基上清中MCP-1含量(pg/mL)明显减少;SB203580组与HS组间差异无统计学意义(对照组:107.956±8.921;缺氧组:173.467±9.027; HS组:145.957±10.952; SB203580组:136.279±15.63; P＜0.05);western blot显示HS组各时间点与缺氧组各相应时间点相比,p38磷酸化水平均明显降低(对照组:0.590±0.105;缺氧组:30 min,1.553±0.215;1 h,1.212±0.161;2 h,1.179±0.105;4 h,1.178±0.122.HS组:30 min,1.028±0.168;1 h,0.852±0.112;2 h,0.927±0.121; 4h,0.815±0.107; P＜0.05).结论 100 mmol/L HS可能通过抑制p38信号通路的激活来抑制小胶质细胞的激活,从而减少小胶质细胞释放趋化因子MCP-1.
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高压氧和SB203580联合应用对大鼠脑缺血再灌注紧密连接蛋白claudin-1的表达及血脑屏障通透性的影响
目的:探讨高压氧(HBO)和SB203580联合应用对大鼠脑缺血再灌注紧密连接蛋白claudin-1的表达及血脑屏障的通透性影响.方法:雄性Wistar大鼠,随机分成假手术组(sham)、脑缺血再灌注组(IR)、HBO+脑缺血再灌注组(HBO+IR)、脑缺血再灌注组+SB203580 (IR+SB203580)、HBO+脑缺血再灌注+SB203580组(IR+HBO+SB203580).复制局灶性脑缺血再灌注模型,IR+SB203580组和IR+HBO+SB20358组于脑缺血再灌注前30min经侧脑室注射100μl P38MAPK信号传导通路抑制剂SB203580,HBO+IR组与IR+HBO+SB203580组并于再灌注期间行0.25MPa(2.5ATA) HBO治疗5次,在处死动物前1h经尾静脉注射2％伊文思兰(EB),采用EB法检测缺血再灌注后血脑屏障通透性的变化.应用免疫组织化学的方法和Western blot法分别观察claudin-1蛋白缺血再灌注72h后脑组织中的分布及claudin-1蛋白的表达水平的变化.结果:Claudin-1的蛋白表达与sham组相比于再灌注后72h表达显著降低(P＜0.01),同时伴有脑组织EB的含量显著增高(P＜0.01).HBO+IR组与IR+ SB203580组较IR组脑组织claudin-1蛋白表达水平明显增加(P＜ 0.01,P＜0.05),脑组织EB的含量显著降低(P＜0.01).IR+HBO+SB203580组相比脑组织中claudin-1蛋白表达与IR+HBO组、IR+SB203580较比显著增加(P＜ 0.01),脑组织EB的含量显著降低(P＜0.01).结论:高压氧从蛋白水平可明显增加脑缺血再灌注脑组织中紧密连接相关蛋白claudin-1的蛋白表达,从而降低血脑屏障通透性;高压氧与SB203580二者具有协同作用.
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p38MAPK抑制剂对大鼠急性坏死性胰腺炎合并肺损伤的保护作用
目的 探讨p38MAPK特异性抑制剂SB203580对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠合并肺损伤的保护作用.方法 54只雄性SD大鼠按数字表法随机分为对照组、ANP组和SB203580(干预)组,每组18只.以左旋盐酸精氨酸腹腔注射建立大鼠ANP模型,对照组大鼠腹腔注射等容积生理盐水,干预组在制模前腹腔注射SB203580(用二甲基亚枫溶解配制成10 μmol/L)5 mg/kg体重.术后3、6、12 h分批处死大鼠,取血测淀粉酶、TNF-α和IL-6含量,行胰腺及肺组织病理学检查,计算肺组织湿/干重比,测髓过氧化酶(MPO)含量,RT-PCR法检测中性粒细胞趋化因子(C1NC) mRNA表达,蛋白质印迹法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达.结果 术后6h,对照组的血淀粉酶、TNF-α和IL-6含量、肺组织湿/干重比、MPO活性、CINC mRNA及p-p38MAPK蛋白表达量分别为(1035±73) U/L、(0.94±0.16) μg/L、(4.77±0.86) μg/L、3.92±0.29、(0.39±0.02) U/g、0.28 ±0.04、0.09±0.04;ANP组分别为(5848±656)U/L、(3.84±0.32) μg/L、( 103.54±15.32) μg/L、4.97±0.47、(1.03±0.08) u/g、0.62±0.06、0.52±0.14；干预组分别为(4259±286) U/L、(1.64±0.21) μg/L、(76.56±11.46) μg/L、4.32±0.34、(0.78±0.05)U/g、0.37±0.04、0.27 ±0.08.ANP组的各项指标均显著高于对照组,干预组的各项指标均显著低于ANP组,但仍显著高于对照组(P值均＜0.01).结论SB203580可通过阻断p38MAPK信号通路,在一定程度上减少炎症因子的产生,减轻ANP大鼠胰腺及肺组织损伤.
关键词： 胰腺炎 急性坏死性 p38丝裂原活化蛋白激酶 SB203580 急性肺损伤 -
SB203580对缺氧/复氧损伤诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及其机制
目的 研究SB203580(吡啶咪唑类抗炎药)对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制.方法 SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养,取第2代细胞实验;共分为3组:对照组,正常培养细胞;模型组,细胞缺氧1 h后,复氧6、12、24、48 h培养;SB203580预处理组,在缺氧损伤前1 h,用不同剂量SB203580(0.2、2、20 μmol·L-1)预处理细胞,尔后进行缺氧/复氧损伤处理,各细胞用Hoechst 33258、Tunnel染色、流式细胞仪及Western blot方法,观察缺氧/复氧后细胞凋亡及p38MAPK的磷酸化水平.结果 与对照组相比,缺氧/复氧后,实验组细胞的凋亡率显著增加,且细胞内p38MAPK磷酸化水平明显升高;而应用SB203580预处理细胞,可显著降低实验组细胞的凋亡率及细胞内p38MAPK的磷酸化水平.结论 SB203580通过抑制p38MAPK的活性,对缺氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞凋亡有保护作用.
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肢体缺血预处理通过激活有丝分裂原激活蛋白激酶p38减轻脑缺血导致的大鼠海马CA1区神经元凋亡和脑水肿
目的 旨在探讨肢体缺血预处理(LIP)能否减轻脑缺血过程中海马CA1区神经元凋亡和脑水肿.方法 72只永久凝闭椎动脉的Wistar大鼠随机分为6组:假手术,LIP(双侧股动脉夹闭10 min,间歇10 min,3次循环),脑缺血,LIP+脑缺血,DMSO和SB 203580+LIP+脑缺血组.各组大鼠中6只在脑缺血后3 d处死,TUNEL染色计数凋亡细胞;6只在脑缺血后24 h处死,测定脑组织含水量.结果 TUNEL染色显示,假手术和LIP组海马CA1区偶有TUNEL阳性细胞;脑缺血组海马CA1区可见大量棕黄色着色的TUNEL阳性细胞,与假手术组及LIP组相比,细胞数量明显增加;LIP+脑缺血组,TUNEL阳性神经元数与脑缺血组相比明显减少,提示LIP明显抑制缺血引起的海马CA1区锥体细胞凋亡;有丝分裂原激活蛋白激酶p38拮抗剂SB 203580+LIP+脑缺血组,海马CA1区阳性染色锥体细胞明显增加,与DMSO+LIP+脑缺血组相比有显著性差别,表明SB 203580可拮抗LIP抑制凋亡的作用.与假手术和LIP组比较,脑缺血组脑组织含水量明显增加,表明LIP降低了脑缺血引起的脑组织含水量增加;LIP前应用SB 203580可抑制LIP的脑保护作用,使脑组织含水量较LIP+脑缺血组显著增加.结论 LIP能够减轻脑缺血过程中海马CA1区神经元凋亡和脑水肿,可能与活化有丝分裂原激活蛋白激酶p38有关.
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p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580对大鼠垂体GH3细胞增殖和分泌的影响
目的 观察p38 MAPK通路特异性抑制剂SB203580对生长激素腺瘤GH3细胞增殖和分泌的影响,以探索p38 MAPK通路作为生长激素腺瘤潜在治疗靶点的可行性.方法 MTT实验检测不同浓度SB203580处理生长激素腺瘤GH3细胞24、48和72 h后细胞增殖活力.不同浓度的SB203580处理生长激素腺瘤GH3细胞72 h后经AnnexinV-FITC/PI双染,流式细胞仪分析细胞凋亡的情况.ELISA检测不同浓度的SB203580处理生长激素腺瘤GH3细胞72 h后细胞上清中生长激素的分泌水平.结果 SB203580能够有效抑制生长激素腺瘤GH3细胞的增殖(P＜0.05),并呈现良好的时间依赖性与浓度依赖性.不同浓度的SB203580能够显著诱导生长激素腺瘤GH3细胞凋亡(P＜0.05).SB203580处理泌生长激素腺瘤GH3细胞可显著降低生长激素水平(P＜0.05),呈现良好的浓度依赖性.结论 p38 MAPK通路特异性抑制剂SB203580可抑制生长激素腺瘤GH3增殖和生长激素分泌,并能促进细胞凋亡.
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p38mapk特异性抑制剂sb203580在胰性脑病中的作用
由于急性胰腺炎的作用下，会引发一系列并发症，作为其中具有高死亡率的一种胰性脑病，展开了大量的研究。本文就胰性脑病的基本情况以及发病机制、p38mapk特异性抑制剂sb203580以及p38mapk特异性抑制剂sb203580在胰性脑病中的作用进行阐述，希望能够为胰性脑病的防治提供一定的理论基础。
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细菌性脑炎模型信号通路样受体4-p38蛋白激酶信号途径的表达及意义
目的 观察信号通路Toll样受体4(TLR4) -p38蛋白激酶(p38MAPK)在小鼠细菌性脑炎模型中的表达及意义.方法 将BABL/c小鼠30只随机分为正常组、细菌性脑炎模型组、SB203580(p38MAPK抑制剂)干预组,分别按干预后3、7 天各分两组.正常组侧脑室注入生理盐水,模型组侧脑室给予脂多糖(LPS); 干预组在给予LPS后即在腹腔注射SB203580.检测脑组织TLR4mRNA和p38MAPKmRNA的表达变化,测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量.结果 与正常组比较,LPS刺激后小鼠脑组织TLR4 mRNA和p38MAPKmRNA表达迅速升高,其相应的脑组织TNF-α、IL-6含量表达也升高,第7天的含量分别为 (65.95±8.82) pg / mg和(70.75±8.65) pg / mg.给予 SB203580 抑制剂后TLR4mRNA和p38MAPKmRNA 表达明显减弱,其相应的脑组织TNF-α、IL-6含量表达与感染组比较也明显降低.结论 LPS刺激小鼠脑组织可引起TLR4-p38 MAPK信号通路的活化并释放炎性细胞因子,而SB203580则对其有明显的抑制作用,证明细菌性脑炎与TLR4-p38MAPK信号通路密切相关.
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慢性异丙肾上腺素刺激引起心肌细胞凋亡的机制研究
目的 探讨异丙肾上腺素(ISO)长期刺激其受体对心肌细胞凋亡的影响.方法 实验用雄性小鼠30只,分为3组,盐水对照组、ISO刺激组和ISO+SB203580干预组,分别通过埋植渗透给药泵持续给予盐水、ISO[30 mg/(kg·d)]或lSO+p38抑制剂SB203580[10 mg/(kg·d)],共7 d,随后取血清及心肌组织测定指标.结果 慢性ISO刺激引起明显的心肌肥厚和细胞凋亡,增加血清和心肌中炎症因子白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成(P＜0.01),增加诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达(63%)、一氧化氮(NO)及过氧化亚硝酸盐的生成(P＜0.01).SB203580干预后,p38激酶活性抑制,血浆和心肌中IL-6和TNF-α等炎症因子生成减少[干预组与ISO组比较,IL-6:(22.26±6.38)ng/L VS(51.32±9.20)ng/L.TNF-α:(11.75±1.09)ng/L vs(8.64±1.01)ng/L,P＜0.01],iNOS的表达及其介导的NO生成和过氧化亚硝酸盐损伤减少[干预组与ISO组比较,NO:(38.60±6.60)μmaol/g蛋白vs(58.80±13.28)μmol/g蛋白;硝基酪氨酸:(2.86±0.43)μg/g蛋白vs(4.20±0.47)μg/g蛋白,P＜0.01].超氧阴离子生成也减少.结论 本研究表明,慢性异丙肾上腺素刺激可以引起心肌细胞凋亡,这种致凋亡损伤可能是通过激活p38激酶,促进炎症因子生成,激活iNOS,增加自由基生成和损伤造成的.
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缺血后处理对肺缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制
目的:探讨缺血后处理(IpO)是否通过抑制P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)活化来减轻再灌注损伤肺细胞的凋亡.方法:雄性SD大鼠40只,随机分成5组(n=8),即对照组(C组)、肺缺血/再灌注组(I/R组)、肺缺血/再灌注+缺血后处理组(IPO组)、缺血后处理+溶剂对照组(D组)、缺血后处理+SB203580组(SB组).各组分别于再灌注2h留取左肺组织,检测肺组织湿/干重比(W/D)和总肺含水量(TLW);光镜观察肺组织形态学结构改变并进行肺组织损伤定量评估(IQA);原位末端标记法(TUNEL)检测肺细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AJ);RT-PCR和免疫组化法测定Bax、Bcl-2基因和蛋白的表达.结果:与C组相比,I/R组W/D、TLW、IQA和AI均显著升高(P＜0.05,P＜0.01),肺组织结构发生明显损伤;Bcl-2、Bcl-2/Bax基因及蛋白表达明显降低,Bax基因及蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01);IPO组、D组、SB组与I/R组相比,W/D、TLW、IQA和AI均显著降低(P ＜0.05,P＜0.01),肺组织结构损伤情况有所改善;Bcl-2、Bcl-2/Bax基因及蛋白表达明显升高,Bax基因及蛋白表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01);D组与IPO组比较各项指标均无明显差异(均P＞0.05);SB组与IPO组相比,肺组织W/D、TLW、IQA和AI均显著降低(P＜0.05,P＜0.01),肺组织结构未见明显损伤;Bcl-2、Bcl-2/Bax基因及蛋白表达明显升高,Bax基因及蛋白表达明显降低(P＜ 0.05,P＜0.01).结论:I/R通过激活P38MAPK导致大鼠肺泡结构严重破坏,肺内细胞大量凋亡;IPO可能是通过抑制P38MAPK通路的激活而减轻I/R损伤.
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G-CSF联合SB203580对4Gy照射小鼠免疫系统的作用
目的 研究G-CSF联合p38抑制剂SB203580 (SB)对免疫细胞辐射损伤的作用.方法 C57BL/6雄性小鼠按体质量随机分为对照组、照射组和给药组.照射组和给药组给予4 Gy全身照射.给药组小鼠给予腹腔注射G-CSF和SB,G-CSF于4Gy照射后2h和6h给药(1μg/只),每天2次,连续给药5d,SB于照射后24h给药(15 mg/kg),隔日给药,共给药5次.照射后10d测外周血计数,进行白细胞CD4、CD8、B220检测、胸腺细胞CD4、CD8检测和骨髓细胞活性氧检测.结果 照射组外周血计数和CD8、B220比例下降,而胸腺细胞中CD4+CD8+细胞比例及骨髓细胞活性氧水平显著增加.与照射组相比,联合给药组外周血红细胞数、血小板、CD4、CD8细胞比例升高,胸腺细胞中CD4+CD8+细胞比例下降.结论 G-CSF联合SB对4 Gy照射引起的免疫细胞损伤存在保护作用.
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硫化氢在SB203580影响肝星状细胞增殖、凋亡中的作用
目的：探讨H2S在P38丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）阻断剂SB203580影响大鼠肝星状细胞（HSC）-T6增殖、凋亡中的作用及对Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达的影响。方法设对照组（HSC加含10%胎牛血清的DMEM培养液）、二甲基亚砜（DMSO）组（对照组基础上加DMSO）、NaHS组（对照组基础上加NaHS至适浓度）、SB组（DMSO组基础上加SB203580至适浓度）、SB+NaHS组。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定SB203580及H2S对HSC的增殖抑制率（IR）；Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术（FCM）检测HSC凋亡率；逆转录PCR法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达。结果 SB组（7.64±2.46）、SB+NaHS组（12.71±2.73）细胞凋亡率高于对照组（1.70±0.88），且SB+NaHS组高于SB组（均P＜0.05）；DMSO组（2.07±1.18）、NaHS组（2.56±1.23）与对照组差异无统计学意义。Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA在各组细胞中均表达，其中NaHS组表达高于对照组（P＜0.05），且表达量多，条带亮、宽， SB组与SB+NaHS组表达低于对照组和NaHS组（P＜0.05），表达量较少，条带较暗。结论 H2S激活P38MAPK信号通路，且SB203580特异性阻断P38MAPK信号通路后，H2S刺激的HSC增殖受到抑制，凋亡得到促进。
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P38MAPK抑制剂SB203580对高糖诱导HK-2细胞转分化的影响
目的：探讨不同浓度P38丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）抑制剂SB203580在高糖诱导肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（TEMT）过程中的机制及其较佳作用浓度。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞（HK-2）并分为对照组（5.5 mmol/L GS）、DMSO组（5.5 mmol/L GS+30μmol/L SB203580等体积的DMSO）、高糖组（30 mmol/L GS），以及30 mmol/L GS+5、10、20、30μmol/LSB203580处理的S5、S10、S20及S30组，干预48 h。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况，计算半数抑制浓度（IC50）；选取对照组、高糖组、S30组，Western blot法检测P38MAPK、P-P38MAPK及α-平滑肌肌动蛋白（SMA）的表达、免疫荧光法检测α-SMA的表达。结果（1）与对照组相比，DMSO对HK-2细胞增殖无显著抑制作用（P>0.05）；高糖组、S5组HK-2细胞增殖增多（P<0.05）；S20、S30组HK-2细胞增殖减少（P<0.05）。与高糖组相比，S5、S10、S20、S30组细胞增殖均受到抑制（P<0.05）。（2）与对照组相比，高糖组、S30组P-P38MAPK表达量增高（P<0.05）。与高糖组相比，S30组P-P38MAPK的表达量降低（P<0.05）。3组P38MAPK表达量无显著差异（P>0.05）。（3）与对照组相比，高糖组、S30组α-SMA表达量增高（P<0.05）。与高糖组相比，S30组α-SMA表达量降低（P<0.05）。结论30 mmol/L GS可以诱导HK-2细胞TEMT；30μmol/L SB203580是抑制HK-2细胞TEMT的较佳抑制浓度，SB203580可能通过下调P-P38MAPK表达，从而抑制HK-2细胞增殖及胞浆中α-SMA的表达，延缓TEMT进程。
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结膜下注射50μmol/L p38信号转导通路抑制剂SB203580对角膜细胞的毒性
背景:p38 信号转导通路抑制剂SB203580 具有抗炎及抑制肿瘤血管生长的作用,但其刺激性和毒性成为眼表应用的障碍.目的:观察结膜下注射SB203580 对大鼠角膜的毒性作用.方法:分别于SD 大鼠右眼结膜下注射0.04 mL 50 μmol/L SB203580 或等量生理盐水,1 次/d,共7 d.注射后第7 天记录各组角膜炎症指数,并摘取角膜行组织学及透射电镜检查.结果与结论:裂隙灯显微镜下观察发现SB203580 注射部位结膜呈可逆性贫血状改变,在注射次日消失;注射SB203580或生理盐水后,大鼠角膜炎症指数差异无显著性意义(P > 0.05);但注射生理盐水后睫状充血程度重于注射SB203580 的大鼠(P < 0.05);组织学检查发现所有大鼠角膜上皮层完整,基质层排列规则,内皮层连续,透射电镜观察发现细胞结构及细胞器无明显异常.提示结膜下注射0.04 mL 50 μmol/L SB2036580 对大鼠角膜无明显毒性作用.
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TLR4-p38 MAPK信号通路在金黄色葡萄球菌感染人巨噬细胞系U937过程中的表达及意义
目的：观察金黄色葡萄球菌感染人巨噬细胞系U937细胞后信号通路Toll样受体4(TLR4)-p38蛋白激酶(p38MAPK)的表达及意义。方法体外培养人巨噬细胞系U937细胞,感染0、30、60和90 min 时收集细胞,应用Western blot法检测各组TLR4和p38MAPK蛋白表达的变化；在另一实验中,分为对照组、金黄色葡萄球菌感染60 min组及p38MAPK 抑制剂SB2035805 mg/mL干预组、SB20358010 mg/mL干预组,应用Western blot法检测各组TLR4和p38MAPK蛋白表达的变化。结果随着感染时间的延长,TLR4和p38MAPK蛋白的表达逐渐增加；给予SB203580抑制剂后,TLR4和p38MAPK蛋白的表达明显减弱。结论金黄色葡萄球菌感染U937细胞可引起TLR4-p38MAPK信号通路的活化,而SB203580对其有明显的抑制作用,证明TLR4-p38MAPK信号通路与金黄色葡萄球菌感染U937细胞密切相关。
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体外循环肺部炎症反应的研究
目的:探讨体外循环过程中应用丝裂原激活蛋白激酶的特异性阻滞剂后观察肺组织损伤程度的变化及对术后肺功能的影响.方法:将18只乳猪随机分为3组,每组6只.实验组(Ⅱ组)体外循环术中用P38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)的特异性阻滞剂(SB203580)行肺灌注;Ⅰ组、Ⅲ组为对照组.分别在不同时段取三组动物的肺脏标本,以免疫印迹方法测量肺组织p38MAPK活性,组织学观察肺损伤改变,测量肺组织干湿重比,术后采集动脉血行血气分析,估测肺换气功能.结果:Ⅰ组p38MAPK活性明显增高,Ⅰ组肺损伤与Ⅱ、Ⅲ组相比明显加重.肺换气功能Ⅱ组好于Ⅰ组.结论:体外循环过程中,应用p38MAPK特异性阻断剂有抑制肺损伤的作用,改善术后肺功能.
关键词： 体外循环 肺损伤 p38丝裂原激活蛋白激酶 SB203580 -
p38蛋白激酶抑制剂SB203580对重症胰腺炎大鼠急性肺损伤的保护作用
目的：探讨丝裂原活化蛋白激酶p38（p38MAPK）抑制剂SB203580对重症胰腺炎大鼠急性肺损伤的保护作用。方法健康雄性 SD大鼠60只，随机均分为3组：假手术组、重症胰腺炎组（模型组）、p38MAPK 抑制剂SB203580＋重症胰腺炎组（抑制剂组），12 h后取左肺下叶测组织湿／干重比，用Western印迹法检测右肺上叶环氧合酶（COX）－2、基质金属蛋白酶（MMP）9、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和磷酸化 p38（p－p38）蛋白的表达，右肺下叶行病理学观察。结果与假手术组比较，模型组肺组织湿／干重比明显增加（P＜0．05），肺组织p－p38、iNOS、MMP9、COX－2蛋白表达明显增高（P＜0．05），与模型组比较，抑制剂组肺组织湿／干重比明显降低（P＜0．05），p－p38、iNOS、MMP9、COX－2蛋白表达量明显（P＜0．05）。结论P38抑制剂SB203580通过减轻肺组织中p－p38、MMP9、iNOS和COX－2的表达，从而减轻肺组织的损伤。
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p38MAPK在阿尔茨海默病患者中的表达及作用机制
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在阿尔茨海默病(AD)患者中的表达及作用机制.方法 收集82例AD患者及20例健康志愿者外周血,采用Western印迹检测p38 MAPK表达及激活情况;将PC12细胞随机分为正常组、模型组、SB203580组、模型组及SB203580组采用20 μmol/L的β淀粉样蛋白(Aβ25～35)构建PC12细胞损伤模型.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI流式双染法检测细胞凋亡,紫外分光光度法检测细胞中天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3活性,Western印迹检测B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p53、酶切Caspase 3蛋白表达.结果 p38MAPK在AD患者及健康志愿者外周血淋巴细胞中的表达量差异无统计学意义(P＞0.05);而pp38 MAPK在AD患者外周血淋巴细胞中的表达量显著高于健康志愿者(P＜0.01).与正常组比较,模型组细胞活力降低,细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、Caspase3活性均显著提高,Bax、p53、酶切Caspase3表达量上调,Bcl-2表达量下调(均P＜0.01).与模型组比较,SB203580组细胞活力上升,细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、Caspase3活性均显著降低,Bax、p53、酶切Caspase3表达量上调,Bcl-2表达量下调(均P＜0.01).结论 pp38 MAPK在AD患者外周血中高表达,pp38 MAPK抑制剂SB203580能通过调控细胞凋亡相关蛋白表达抵抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡.
