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  • p38丝裂原活化蛋白激酶对H2O2预处理的适应性细胞保护作用的影响

    作者:廖新学;唐小卿;郭瑞鲜;陈正华;杨春涛;杨战利;孟金兰;陈培熹;冯鉴强

    3580不影响H2O2预处理的适应性细胞保护作用.50 μmol/L H2O2具有比H2O2预处理更强的激活p38的作用,H2O2预处理能明显地抑制50 μmol/LH2O2对p38的激活作用.结论 H2O2预处理抑制高浓度H2O2对p38的激活可能是其适应性细胞保护机制之一.

  • 蛇床子素通过c-Jun氨基末端激酶和p38蛋白调节海人酸活化BV-2小胶质细胞增殖

    作者:沈阳;曾常茜

    目的 观察蛇床子素对海人酸活化BV-2小胶质细胞增殖以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白和p38蛋白表达的影响,探讨蛇床子素对BV-2细胞增殖抑制的分子机制.方法 将BV-2细胞随机分为对照组、海人酸组和蛇床子素组,孵育24 h后在倒置显微镜下观察各组细胞形态;免疫组化法检测各组BV-2细胞JNK蛋白和p38蛋白表达.结果 倒置显微镜下对照组BV-2细胞贴壁生长,分布均匀,形态规则,胞体瘦小,突起细长,胞体透亮折光性好;海人酸组BV-2细胞生长密集,聚集成团,胞体变大变圆,突起变短或消失;蛇床子素组BV-2细胞形态和数量与对照组相似,分布较为均匀,形态规则,胞体瘦小,呈现树枝状突起.p38和JNK蛋白表达阳性率海人酸组较对照组增高(p38:0.438±0.014比0.216±0.013,JNK:0.456±0.013比0.279±0.013,均P<0.05),蛇床子素组p38和JNK蛋白表达阳性率分别为0.238±0.013、0.211±0.012,较海人酸组均降低(均P<0.05),但与对照组差异无统计学意义(均P>0.05).结论 蛇床子素抑制海人酸活化BV-2细胞增殖,其机制可能通过下调BV-2细胞JNK蛋白和p38蛋白表达而实现.

  • 小檗碱对转化生长因子β1诱导人胚肺成纤维细胞转分化及丝裂原活化蛋白激酶信号通路蛋白磷酸化水平的影响

    作者:任志涛;游雪甫;于会明;杨信怡

    目的 探讨小檗碱对转化生长因子β1诱导的人胚肺成纤维细胞MRC-5转分化过程中细胞外羟脯氨酸和细胞内平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白及丝裂原活化蛋白激酶信号通路相关蛋白磷酸化水平的影响.方法 体外培养MRC-5细胞,采用 MTT法检测不同浓度小檗碱对细胞增殖的抑制作用,确定适合的作用范围;Western blot法检测不同浓度转化生长因子β1刺激MRC-5细胞转分化过程中平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白表达水平,确定适宜的转化生长因子β1诱导浓度.不同浓度小檗碱预处理的MRC-5细胞经转化生长因子β1刺激后,采用比色法测定细胞外羟脯氨酸水平,对于细胞内平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白表达水平以及丝裂原活化蛋白激酶信号通路相关蛋白p38 MAPK、SAPK/JNK、ERK1/2的磷酸化水平采用Western blot法进行检测.结果 参考 MTT法检测结果,选定小檗碱适宜浓度(20、40、80μmol/L)进行研究.Western blot结果显示2 ng/ml浓度转化生长因子β1可明显诱导 MRC-5细胞转分化.小檗碱预处理的 MRC-5细胞,较单纯转化生长因子β1诱导细胞,培养液中羟脯氨酸水平明显降低.Western blot法检测结果显示,小檗碱预处理细胞较单纯转化生长因子β1诱导细胞,平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白表达水平明显受到抑制,丝裂原活化蛋白激酶信号通路相关蛋白 p38 MAPK、SAPK/JNK、ERK1/2 磷酸化水平亦受到不同程度抑制.结论 小檗碱预处理对转化生长因子β1诱导的MRC-5细胞转分化过程有抑制作用,其机制可能与小檗碱下调丝裂原活化蛋白激酶信号通路相关蛋白的磷酸化水平有关.

  • SH-SY5Y神经细胞中α3神经型尼古丁受体对细胞凋亡及p38MAPK信号通路的影响

    作者:张雪玲;齐晓岚;任家谋;吴昌学;官志忠

    目的 研究人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中α3神经型尼古丁受体(nAChR)对细胞凋亡及凋亡相关信号通路p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响,了解α3 nAChR在老年性痴呆发病中的作用机制.方法 将细胞分为稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒组、空质粒组及正常对照组,用real-time PCR和Western blot法检测α3 nAChR mRNA水平和蛋白水平的表达,以评价RNA的干扰效率;real-time PCR方法检测凋亡相关蛋白bax及bcl-2 mRNA水平.将3组细胞用10 μmoL/Lβ淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)处理48 h,进一步用流式细胞术检测细胞凋亡率;用Western blot迹方法检测细胞中p-p38及p38蛋白表达水平的变化.将3组细胞用p38通路阻断剂阻断信号转导后再用Aβ25-35处理,测定细胞凋亡率.结果 稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒的细胞克隆株,α3 nAChR mRNA及蛋白表达水平分别降低了95%和86%;与空质粒和正常对照组相比,凋亡相关蛋白bax mRNA水平增加2.11倍(P<0.01),bcl-2 mRNA水平下降0.53倍(P<0.01),凋亡率未发生变化(3.40%±0.20%),但能增加Aβ诱导的细胞凋亡(24.52%±1.59%);与Aβ处理SH-SY5Y细胞组相比,Aβ引起α3 nAChR沉默细胞p-p38蛋白表达水平增加178% (P <0.01);在加入p38特异性阻断剂后加入Aβ,与未加阻断剂时相比,3组细胞凋亡率均减少(p<0.01),其中α3 nAChR沉默细胞组明显.结论 α3 nAChR沉默可能通过增强凋亡相关信号通路p38MAPK从而增加Aβ25-35的致凋亡作用;α3 nAChR沉默可以通过增加促凋亡相关蛋白bax,减少抗凋亡相关蛋白bcl-2从而增加Aβ25-35的致凋亡作用.

  • p38丝裂原活化蛋白激酶通路介导的早期生长反应基因-1活性与乳腺癌细胞表柔比星耐药性的关系

    作者:肖兰;胡建莉;崔文

    目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路介导的早期生长反应基因(EGR)-1活性与乳腺癌细胞表柔比星耐药的关系.方法 SB203580(15 μmol/L)干预后,激光共聚焦显微镜观察;流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、凝胶电泳迁移率法(EMSA)、RT-PCR及Western blot分别检测耐药MCF-7/Adr及亲本MCF-7细胞内磷酸化p38MAPK蛋白表达、细胞凋亡及细胞内表柔比星浓度、EGR-1蛋白活性改变、细胞对表柔比星敏感性;EGR-1 mRNA、P糖蛋白、磷酸化p53及p38蛋白表达.结果 p38MAPK通路激活的MCF-7/Adr细胞经SB203580(15 μmol/L)干预24和48 h后,(1)MCF-7/Adr细胞(早+晚期)凋亡率分别由(0.54±0.17)%和(0.81±0.16)%提高为(25.36±1.17)%和(38.21±1.25)%,P<0.05,并呈一定时间依赖性;(2)MCF-7/Adr细胞的平均荧光强度分别为(32.45±2.36)及(41.66±3.12),均高于空白对照组及DMSO组MCF-7/Adr细胞的(14.17±1.45)及(16.28±0.63),P<0.01;MCF-7/Adr细胞对表柔比星药物的耐受性显著降低;(3)增加了MCF-7/Adr细胞的EGR-1活性,IC50分别为(21.53±2.17)和(8.77±1.02),低于空白对照组(40.74±2.56);伴随p38MAPK通路活性抑制和EGR-1 mRNA表达增加,磷酸化p53蛋白表达显著上调,而P糖蛋白显著下调.结论 p38MAPK通路与乳腺癌表柔比星耐药密切相关,可能与p38MAPK通路介导的EGR-1表达相关,EGR-1激活抑制了其下游耐药基因转录,从而使表柔比星耐药得以逆转.

  • 谷胱甘肽对糖基化终产物诱导平滑肌细胞增殖的影响

    作者:刘杰;韦金儒

    目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞的增殖作用和还原型谷胱甘肽(GSH)对AGEs介导的动脉平滑肌细胞增殖作用的抑制机制.方法 以体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞为实验模型,分为8组,每组12孔,每孔细胞密度1×105/ml,与不同浓度的AGEs共同培养,并用不同浓度的GSH干预.分别用噻唑蓝(MTT)比色法测定血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和用ELISA测定细胞的磷酸化p38丝裂原蛋白激酶(p-p38 MAPK)的浓度来探讨平滑肌增殖的机制和干预因素.结果 (1)AGEs对VSMC MTT吸光度的影响:经过AGEs干预,B、C、D组(吸光度值分别为0.43±0.15,0.49±0.16,0.48±0.18)与对照组比较,VSMC MTT的吸光度值增高(P<0.01).但随着AGEs浓度增加,B、C、D组间MTT吸光度值差异无统计学意义(P>0.05).(2)GSH对AGEs干预的VSMC MTT吸光度的影响:在加入GSH的AGEs干预组,F、G、H组(吸光度值分别为0.35±0.10,0.33±0.11,0.28±0.08)与AGEs(25 mg/L)对照组比较,MTT吸光度值下降(P<0.01).但随着GSH浓度增加,F、G、H组组间差异无统计学意义(P>0.05).(3)AGEs对VSMC内p-p38 MAPK的影响:经过AGEs干预后,p-p38 MAPK吸光度值增加(P<0.01),B组(0.65±0.17)、C组(0.85±0.26)、D组(0.94±0.17)分别为对照组(0.26±0.06)的2.5、3.2和3.6倍(P<0.01).随AGEs浓度增加,C、D组与B组相比,p-p38 MAPK显著增加(P<0.01).(4)GSH对AGEs干预的VSMC内P-p38 MAPK的影响:在加入GSH的AGEs干预组,F、G、H组(吸光度值分别为0.36±0.09,0.28±0.07,0.26±0.07)与B组即AGEs对照组比较,p-p38 MAPK吸光度降低(P<0.01),与对照组相比分别下降45%、56%和60%(P<0.01).随着GSH浓度增加,G、H组与F组相比,p-p38 MAPK逐渐降低(P<0.01).结论 (1)AGEs具有促进VSMC增殖的作用,其作用机理可能与激活了p-p38 MAPK信号传导通路有关.(2)GSH对AGEs介导的VSMC增殖具有抑制作用,其作用机制可能与抑制了p-p38 MAPK信号传导通路有关.

  • 促红细胞生成素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的抗炎保护作用及其机制

    作者:汪悠悠;贾宁;彭莉;张慧涛;朱晔;郑晶;朱伟平;张桦

    目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)的抗炎保护作用及其机制。方法36只雄性SD大鼠随机分为假手术(SOR)组、IRI组和EPO组,每组12只。于再灌注2 h、6 h、12 h、24 h各时相点观察肾脏病理改变,检测血尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)水平,ELISA法检测肾组织匀浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western印迹法检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)蛋白表达。结果 IRI组血BUN、Scr水平和肾组织匀浆TNF-α含量显著升高,并出现明显的肾脏病理改变;肾组织p-p38MAPK蛋白表达明显增强,于再灌注12 h达到峰值,24 h表达减弱。而在EPO组,BUN、Scr和 TNF-α水平显著低于 IRI 组(P<0.05),在各时相点的肾脏病理改变与同期 IRI 组比较明显减轻, p-p38MAPK表达在各时相点较IRI组明显减弱。结论 EPO可显著改善IRI造成的肾脏病理和肾功能异常,其肾脏保护作用可能与抑制p38MAPK活化、降低TNF-α水平、减轻炎性损伤有关。

  • p38MAPK参与血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡机制研究及养血清脑颗粒的保护作用

    作者:梁迎春;杨海燕;赵林;于爱玲;张馨娜;宁方波;刘运林;杨申

    目的:探讨应用养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠认知功能的影响,并观察大鼠海马细胞凋亡及 p38MAPK 磷酸化表达的变化。方法应用两血管法(2VO)制作血管性痴呆大鼠模型,将60只3月龄雄性Wistar大鼠随机分成血管性痴呆模型组、假手术组和养血清脑颗粒组。养血清脑颗粒组给予2 g·kg-1·d-1的养血清脑颗粒溶液2 ml灌胃,血管性痴呆组和假手术组给予等量的2 ml生理盐水灌胃,1个月后应用Morris水迷宫实验分别测试各组大鼠的空间认知能力,TUNEL法检测海马CA1区细胞凋亡,蛋白印迹法观察大鼠海马区p38MAPK磷酸化变化。结果第1、2、3天养血清脑颗粒组大鼠隐蔽平台逃避潜伏期明显小于模型组隐蔽平台逃避潜伏期,差异有统计学意义(P<0.01);养血清脑颗粒组大鼠原平台象限时间大于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。大鼠海马区细胞凋亡、磷酸化P38MAPK的表达的比较:养血清脑颗粒组明显低于血管性痴呆模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论养血清脑颗粒能显著改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,同时抑制海马区细胞凋亡,可能是通过抑制 p38MAPK 通路而实现的,这可能是养血清脑颗粒参与治疗血管性痴呆的作用机制之一。

  • p38 MAPK在氧化应激诱导肾间质纤维化中的研究进展

    作者:霍振霞;王保兴

    氧化应激是肾脏纤维化形成的关键因素之一,它的持续存在可刺激多种细胞因子、激活多条信号通路,贯穿肾脏纤维化发生、发展的始终。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内介导胞外刺激的重要信号通路,是细胞促增殖和传递应激信号的关键激酶。其中,p38 MAPK是MAPK家族成员之一,在肿瘤、应激反应、炎症、缺血-再灌注损伤及免疫调控等领域发挥着重要作用,可以通过调节转化生长因子β1、核因子-κB及p53等因子的表达,从而影响肾间质纤维化的进程。本文主要就p38 MAPK信号通路在氧化应激诱导肾间质纤维化的研究新进展进行综述。

  • p38丝裂原活化蛋白激酶对急性坏死性胰腺炎大鼠低钙血症的影响

    作者:方勇木;黄鹤光;周一农

    目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠低钙血症和甲状旁腺激素受体1(PTHR1)表达的影响.方法 将雄性SD大鼠72只按完全随机法分为ANP组、SB203580干预(SB)组和假手术(SO)组,每组分3、6、12 h 3个时间点,每个时间点8只.以5%牛磺脱氧胆酸钠逆行胰胆管注射建立ANP模型,SB组在造模前30 min腹腔注射p38MAPK特异抑制剂SB203580 10 mg/kg体重.观察各组血清钙浓度,蛋白质印迹法(Western blotting)分析骨组织磷酸化p38MAPK(P-p38 MAPK)和TNF-α变化,实时RT-PCR检测骨组织PTHR1 mRNA表达.结果 制模后6 h,SO组、ANP组和SB组血清钙浓度分别为(2.50±0.08)mmoL/L、(2.11±0.06)mmol/L和(2.35±0.10)mmol/L;骨组织P-p38 MAPK表达量分别为0.14±0.04、0.80±0.06和0.33±0.05;骨组织TNF-α表达量分别为0、0.91±0.04和0.44±0.03;骨组织PTHR1 mRNA表达量分别为1.00±0.12、0.23±0.04和0.44±0.06.SB组骨组织P-p38 MAPK及TNF-α表达较ANP组显著降低(P<0.01);骨组织PTHR1 mRNA表达量及血清钙浓度较ANP组显著增加(P<0.01).结论 p38MAPK信号转导通路可介导ANP低钙血症的发生,抑制该通路可改善ANP低钙血症.

  • p38丝裂原活化蛋白激酶在不可分型流感嗜血杆菌致人单核细胞炎症反应中的作用

    作者:徐志豪;徐峰;沈华浩;李兰娟

    目的 通过不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)与单核细胞相互作用,研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路在NTHi致人体免疫细胞炎症反应中的作用.方法 NTHi为临床分离株,经血清学方法和16S rRNA测序证实.外周血单核细胞来自健康成年人静脉血,分为4组:培养基组、NTHi刺激组、SB203580(p38 MAPK抑制剂)干预组和UO126(p44/42 MAPK抑制剂)干预组.NTHi与单核细胞共培养1 h、4 h后收集细胞,用Western blot法检测p38、p44/42 MAPK的磷酸化程度;16 h后用流式细胞仪检测细胞表面Toll样受体(TLR)4的表达.预先用SB203580或UO126与单核细胞共孵育1 h,然后加入NTHi(感染复数为200),分别在4 h、16 h后收集上清,用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平.采用SPSS11.5统计软件,组间比较用t检验,单核细胞TNF-α的表达用单因素方差分析,组间比较用LSD检验.结果 NTHi可迅速诱导p38、p44/42 MAPK通路的磷酸化,并至少持续到刺激后4 h.与培养基组比较,NTHi刺激16 h后单核细胞表面TLR4的表达明显增加(11.8±1.6,4.8±0.6),差异具有统计学意义(t=4.08,P<0.05).NTHi刺激4 h和16 h后上清液中的TNF-α(16.4±5.3,30.2±10.7)较培养基组(0.6±0.6,1.4±1.1)显著增加,差异具有统计学意义(4 h时I-J值为15.78,16 h时I-J值为28.82,P均<0.01).与细菌组比较,SB203580干预组单核细胞TNF-α水平显著降低(4 h时I-J值为11.26,16 h时I-J值为21.32,P均<0.05),而UO126干预组TNF-α水平无明显变化(4 h时I-J值为6.32,16 h时I-J值为12.57,P均>0.05).结论 TLR4可能参与了NTHi诱导的单核细胞反应,p38 MAPK是该反应的关键信号分子.

  • 丁基苯酞通过p38丝裂原活化蛋白激酶通路拮抗β淀粉样蛋白致皮质神经元凋亡

    作者:赵云霞;李甲龙;王瑞霞;张镛

    目的 研究丁基苯酞是否可以通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,抑制β淀粉样蛋白(Aβ) 1-42致原代培养皮质神经元凋亡.方法 将原代培养的皮质神经元随机分为对照组、Aβ1-42干预组(干预组)、Aβ1-42+丁基苯酞0.1 μmol/L组(A组)、Aβ1-42+丁基苯酞1 μmol/L组(B组)、Aβ1-42+丁基苯酞10 μmol/L组(C组).Aβ1-42作用24 h后,采用免疫荧光法染色观察细胞形态及凋亡比率,Western blot定量检测总p38、p-p38、caspase-3蛋白表达水平.结果 免疫荧光双染显示,对照组神经元细胞体边缘光滑,突触长,细胞核完整;干预组细胞边缘塌陷,突触缩短,细胞核碎裂.与对照组比较,干预组、A、B、C组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),干预组p-p38和caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.05);与干预组比较,A、B、C组caspase-3蛋白表达及B、C组p-p38蛋白表达明显减少(P<0.05).结论 丁基苯酞可以通过p38蛋白磷酸化拮抗Aβ1-42致原代培养皮质神经元凋亡.

  • 吡格列酮对大鼠缺血再灌注心肌p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

    作者:王浩;叶平;朱启伟;骆雷鸣

    目的 观察临床用于降糖治疗的噻唑烷二酮类药物吡格列酮对大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用及对p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响.方法 将24只健康雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、吡格列酮10mg/(kg·d)组(P组)、吡格列酮10 mg/(kg·d)+过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)特异性阻断剂GW9662组(P+G组),每组6只;利用结扎左前降支的方法建立缺血再灌注损伤模型,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口原位末端标记法检测心肌细胞凋亡,Western blot方法检测心肌组织磷酸化p38(p p38)蛋白的变化.结果 与I/R组比较,Sham组、P组心肌细胞凋亡指数(AI)显著降低[(8.6±4.3)%、(21.4±8.8)% vs (40.1±12.3)%,P<0.05];P+G组心肌细胞AI显著高于P组[(37.0±10.5)% vs (21.4±8.8)%,P<0.05].与I/R组比较,Sham组、P组p-p38蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),与P组比较,P+G组p-p38蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 吡格列酮抑制缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡,可能与下调p-p38表达有关,这2种作用是由PPARγ介导的.

  • p38促分裂原活化蛋白激酶在高脂饮食1型糖尿病小鼠颈动脉损伤后内膜增生中的作用

    作者:王启章;陈茂刚;徐格林;刘新峰

    目的 探讨p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)特异性抑制剂SB203580对高脂饮食1型糖尿病小鼠颈动脉血管内损伤后内膜增生的影响.方法 选择雄性突变型INS2AKrrA小鼠12只及同窝出生的野生型C57BL/6雄性小鼠6只,小鼠分为3组:对照组,高TC饮食组,干预组,每组6只.各组小鼠于颈动脉损伤后28 d处死并取右颈总动脉.免疫组织化学检测内膜磷酸化p38MAPK、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)表达.结果 与对照组比较,高TC饮食组术后28 d管腔面积明显缩小,内膜面积、中膜面积、内膜/中膜面积、磷酸化p38MAPK、VCAM-1、8-OHdG表达水平明显增强(P<0.01).与高TC饮食组比较,干预组术后28 d管腔面积明显增加,内膜面积、中膜面积、内膜/中膜面积明显缩小,VCAM-1、8-OHdG、磷酸化p38MAPK表达明显降低(15.27±3.70 vs 28.39±5.33,P<0.05;8.75±3.32 vs 19.92±5.35,P<0.05;7.69±2.18 vs18.45±3.77,P<0.01).结论 p38MAPK抑制剂可能主要通过减轻氧化应激及VCAM-1等炎性反应控制糖尿病高脂饮食小鼠颈动脉血管内损伤后内膜增生.

  • 丹酚酸B体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

    作者:李伟望;王海萍;张娟娟;吕洋

    目的 探讨丹酚酸B体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为心肌细胞样的可行性.方法 取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养BMSC,第2代BMSC经丹酚酸B诱导分化为诱导组,未诱导为对照组.相差显微镜观察细胞形态;免疫组织化学法检测结蛋白、心肌肌钙蛋白Ⅰ (cTnI)、连接蛋白43(Cx43)、p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)的表达;透射电镜观察分化细胞的超微结构.结果 原代细胞接种4h后贴壁生长,48 h后细胞呈纺锤形和长梭形,传代细胞经丹酚酸B诱导1周后细胞呈多角形、梭形等形状,部分细胞有分支,诱导4周后诱导组细胞形态明显改变,细胞核位于中央,呈柱状的细胞紧密平行排列,有明显方向性.诱导组细胞中均有结蛋白、cTnI、Cx43及p38MAPK表达,阳性率分别为40.0%、32.3%、53.5%和64.8%,对照组细胞呈弱阳性或阴性表达.免疫荧光检测显示,结蛋白与cTnⅠ呈共表达.结论 丹酚酸B体外可诱导大鼠BMSC分化为心肌样细胞.

  • 溶血磷脂酸受体3介导溶血磷脂酸诱导的血管平滑肌细胞表型转化

    作者:李小好;杨波;尚桂莲;周志斌

    目的 探讨溶血磷脂酸(LPA)受体在LPA诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用及相关信号传导通路.方法 培养SD大鼠分化表型VSMC,培养液加胰岛素样生长因子(IGF-1)为IGF-1组,加溶剂载体为空白组,以不同浓度水平LPA(0.1~10 μmol/L)刺激,依次为LPA 0.1组、LPA 1组和LPA 10组,并在LPA(1μmol/L)条件下,以LPA受体1,3拮抗荆二辛烷甘油焦磷酸盐(DGPP 8:0)为DGPP 1组,RT-PCR法检测平滑肌肌动蛋白α(SMA-α)和骨桥蛋白mRNA表达,Western blot法检测p38分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK),细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化蛋白水平.结果 与空白组和IGF-1组比较,LPA 0.1组、LPA 1组和LPA 10组呈剂量依赖促进骨桥蛋白mRNA表达上升,SMA-α mRNA表达下降(P<0.01);与空白组比较,LPA 1组p38MAPK和ERK激活(P<0.01),DGPP 1组p38MAPK和ERK无明显变化(P>0.05).结论 与Gq蛋白偶联的LPA受体3介导了LPA诱导的VSMC表型转化,阻滞上述通路有可能成为控制与动脉粥样硬化和再狭窄等血管疾病相关的VSMC表型转化潜在的治疗干预靶点.

  • 转化生长因子β诱导骨髓干细胞化为心肌样细胞的研究

    作者:吕洋;吴志刚;王海萍;霍艳丽;高辰玮

    目的 探讨转化生长因子β(TGF-β)对骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化为心肌样细胞的影响.方法 取SD大鼠四肢骨髓,分离培养MSCs,应用2、5、10、15 ng/ml TGF-β1对第2代MSCs定向诱导,依次为A组、B组、C组和D组,不加TGF-β1诱导为对照组.各组培养4周后,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学技术检测结蛋白、α横纹肌肌动蛋白及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的表达,通过肌钙蛋白Ⅰ表达计算心肌样细胞的转化率.结果 对照组结蛋白、α横纹肌肌动蛋白及p38MAPK均为弱阳性或阴性表达.与对照组比较,其他4组上述各标记物阳性表达均明显升高(P<0.01).B组表达呈峰值水平,明显高于A、C和D组(P<0.05,P<0.01).对照组的心肌样细胞转化率较低.与对照组比较,其他4组心肌样细胞转化率均明显升高(P<0.01),B组高,明显高于A组和D组(P<0.05,P<0.01),但与C组差异无统计学意义(P>0.05).结论 TGF-β可诱导MSCs获得心肌分化表型,TGF-β15 ng/ml可能是一种合适的诱导浓度.

  • 软脂酸通过丝裂原活化蛋白激酶通路促进血管内皮细胞凋亡

    作者:江海龙;马丽群;苏海明;沈倩波;葛冬云;王海涛;甘继宏

    目的 探讨软脂酸(PA)诱导的血管内皮细胞凋亡中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的作用.方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分对照组、PA组、MAPK通路干预组[分别先用p38抑制剂SB203580、氨基末端激酶(JNK)抑制剂PD98059、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂SP600125干预]再分为PA+SB组、PA+PD组、PA+SP组.流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测caspase-3、磷酸化p38、JNK和ERK1/2表达水平;分光光度法检测caspase-3的活性.结果 与对照组比较,PA组、PA+ SB组、PA+PD组、PA+SP组HUVEC凋亡及caspase-3表达和活性明显增加,PA组磷酸化p38MAPK表达明显增加(P<0.05).与PA组比较,PA+ SB组HUVEC细胞凋亡率、caspase-3表达和活性明显降低(P<0.05);而PA+ PD组和PA+ SP组HUVEC凋亡率、caspase-3表达和活性无明显变化(P>0.05).结论 PA通过p38MAPK通路促进内皮细胞凋亡.

  • 不规则趋化因子对人单个核细胞P38和转录因子-κB的影响

    作者:姜艳;孙健;潘迪;陈玉花;李波

    目的 探讨不规则趋化因子(FKN)在动脉粥样硬化形成中的作用及其可能的信号转导途径,以及FKN影响人单个核细胞表达NF-κB过程与Ras/p38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的相关性.方法 采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,将细胞预处理后分为:空白1组、FKN 1组、FKN+Ras抑制剂组(FTI-277组)、空白2组、FKN 2组、FKN+p38抑制剂组(SB203580组).分别于30 min时,采用Western blot方法对磷酸化p38及NF-κB进行半定量测定.结果 与空白1组、空白2组比较,FKN 1组、FKN 2组NF κB和p38相对吸光度值明显增加(P<0.01),与FKN 1组、FKN 2组比较,FTI-277组、SB203580组NF-κB和p38相对吸光度值明显降低(P<0.01).结论 FKN可以使NF-κB表达和磷酸化p38增加;Ras/p38介导了FKN刺激单个核细胞引起NF-κB活化的增加;Ras/p38途径为FKN诱导NF-κB活化的信号转导通路之一.

  • 钙网蛋白介导缺氧预处理对心脏保护机制的研究

    作者:武旭东;李卫红;陶天琪;刘秀华;唐朝枢

    目的:探讨缺氧预处理(H PC )对于心肌钙网蛋白表达与肌浆网钙稳态的影响及其信号转导机制。方法选择SD大鼠22只,随机分为假手术组6只,模型组8只,H PC组8只。复制SD大鼠H PC和心肌梗死模型,检测左心室压力大上升速率和大下降速率(± dp/dtmax )、T TC法测定心肌梗死面积,差速离心法制备心肌肌浆网并鉴定其纯度,以Millipore滤过法测定肌浆网Ca2+摄取活性和肌浆网Ca2+释放速率,Western blot检测钙网蛋白、p38丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶水平。结果与假手术组比较,模型组+ dp/dtmax和-dp/dtmax分别下降39%和46%(P<0.05);与模型组比较,HPC组分别升高43%和59%(P<0.05),肌浆网Ca2+摄取升高[(60.38±5.76)nmol Ca2+/(mg?min) vs (31.10±3.13)nmol Ca2+/(mg?min)],肌浆网Ca2+释放降低[(32.12±1.18)nmol Ca2+/(mg?15 s) vs (39.61±1.16)nmol Ca2+/(mg?15 s),P<0.05],钙网蛋白表达和p38丝裂原活化蛋白激酶水平明显升高( P<0.05)。结论 H PC通过p38丝裂原活化蛋白激酶途径上调钙网蛋白表达,改善心肌肌浆网C a2+摄取和肌浆网C a2+释放功能、减轻细胞内钙超载而保护缺血心肌。

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