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微囊化肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝组织Smac及细胞色素c mRNA表达的影响
目的 动态观察微囊化肝细胞腹腔移植对急性肝衰竭大鼠肝组织Smac/DIABLO及细胞色素c(cyt-e)mRNA表达的影响.方法 D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝衰竭模型,并设微囊化肝细胞移植组、裸肝细胞移植组和对照组.RT-PeR法测定大鼠肝脏凋亡指标Smac/DIABLO和cyt-cmRNA表达情况.样本比较采用重复测量的多元方差分析或单因素方差分析,组间比较采用t检验.结果 急性肝衰竭大鼠肝组织中Smac/DIABLO及cyt-c mRNA的表达较对照组明显增加(F值为4.345、14.821、47.565、42.178、62.961,P值均<0.05).裸肝细胞移植组和对照组肝组织中的Smac/DIABLO和cyt-c mRNA表达在48 h高,而微囊化肝细胞移植组的峰值略微前移,在24 h高.结论 Smac/DIABLO及cyt-c mRNA的表达随着急性肝衰竭的进程而波动,可以较好地判断肝细胞凋亡情况.
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微囊化肝细胞移植促进急性肝衰竭大鼠肝细胞再生的研究
目的 分析微囊化肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝细胞再生的影响.方法 通过腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gal)建立急性肝衰竭大鼠模型,18 h后将造模动物随机分成生理盐水组(Ⅰ)、裸肝细胞移植组(Ⅱ)和微囊化肝细胞移植组(Ⅲ).造模后6、12、24、36、48、72、120、168及240 h时,从各组随机抽取6只大鼠,留下腔静脉血观察肝功能变化,取肝组织用免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.另取6只正常大鼠的肝组织作为参考值.结果 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组大鼠10 d生存率分别是26.7%(4/15)、40.0%(6/15)和73.3%(11/15),3组间大鼠生存率差异有统计学意义(x2=9.349,P=0.009).Ⅲ组大鼠生存率较Ⅰ、Ⅱ组有明显提高.造模后6 h,各组大鼠的ALT、AST均有所升高,以36～72 h为明显.Ⅱ、Ⅲ组的ALT、AST自36 h开始下降,Ⅲ组的下降较Ⅱ组显著.Ⅰ组造模后TBil逐渐升高,72 h时达高峰;Ⅱ、Ⅲ组的TBil在48 h时开始下降,其中,在36、48和72 h时Ⅲ组下降较Ⅱ组更为显著.免疫组织化学结果表明,正常组PCNA蛋白呈弱阳性或阴性表达,造模后表达量逐渐增多,48 h时达高峰.其中,Ⅲ组的表达量显著高于Ⅰ、Ⅱ组.结论 微囊化肝细胞移植促进了肝细胞的再生,并可改善急性肝衰竭大鼠的肝功能和预后.
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微囊化肝细胞移植治疗暴发性肝衰竭大鼠的疗效观察
目的 观察微囊化肝细胞腹腔移植对暴发性肝衰竭大鼠的疗效.方法 气流法制备含肝细胞的微囊.D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝功能衰竭模型,设模型组、裸肝细胞腹腔移植组、微囊化肝细胞移植组,每组8只测定ALT、AST、TBil水平.样本比较采用重复测量的多元方差分析或单因素方差分析,组间比较采用t检验.结果 肝衰竭模型建立后ALT、AST、TBil迅速升高(P＜0.05),并于24h～72h达高峰.同一时间点两两比较发现,Ⅱ、Ⅲ组在48h、72h、120h均明显低于Ⅰ组(P＜0.05),Ⅲ组在48h、72h均低于Ⅱ组(P＜0.05).Ⅲ组峰值较Ⅰ组前移.模型组、裸肝组和微囊组大鼠生存率分别是26.7%(4/15)、40.0%(6/15)、73.3%(11/15),微囊组较模型组、裸肝组大鼠生存率有显著性提高(P＜0.05).结论 HCT能降低FHF大鼠ALT、AST和TBil水平,减轻肝损伤程度,可能改善FHF预后.
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微囊化肝细胞移植对急性肝功能衰竭大鼠血管内皮生长因子表达的影响
目的 动态分析微囊化肝细胞移植对急性肝功能衰竭(ALF)大鼠肝组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 D-氨基半乳糖诱导建立ALF大鼠模型18 h后,分成ALF模型组、裸肝细胞移植组和微囊化肝细胞移植组各50只大鼠.造模后24、36、48、72、120、168和240 h取各组大鼠肝组织.免疫组织化学法检测VEGF和增殖细胞核抗原(PCNA)表达,半定量RT-PCR检测VEGF mRNA表达.多组样本组间比较采用单因素方差分析.结果 与ALF模型组比较,裸肝细胞移植组和微囊化肝细胞移植组大鼠肝组织中PCNA表达量在36 h开始即显著增高(F=26.26,P<0.05).与ALF模型组和裸肝细胞移植组比较,微囊化肝细胞移植组大鼠肝组织中VEGF表达量从36 h开始明显升高(F=25.44,P<0.05),且下降也较缓慢,在240 h表达量仍显著高于ALF模型组和裸肝细胞移植组(F=220.25,P<0.05).造模24 h,裸肝细胞移植组VEGFmRNA(56.7±9.1)开始高于ALF模型组(48.0±1.9),差异有统计学意义(F=3.54,P<0.05),而微囊化肝细胞移植组(100.7±1.9)在48 h开始显著高于裸肝细胞移植组(94.5±1.4),差异有统计学意义(F=47.82,P<0.05),至240 h时,表达量仍显著高于裸肝细胞移植组,差异有统计学意义(F=21.70,P<0.05).结论 微囊化肝细胞移植可增加ALF大鼠肝组织中VEGF的表达,促进肝细胞的再生.
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S期激酶相关蛋白2在急性肝功能衰竭大鼠肝组织中的表达
目的 探讨急性肝功能衰竭(ALF)大鼠S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达变化及意义.方法 雄性SD大鼠256只,其中240只用D-氨基半乳糖溶液制备ALF模型.将大鼠分为ALF模型组、裸肝细胞移植组和微囊化肝细胞移植组,经腹腔分别注射RPMI 1640培养液、裸肝细胞悬液、微囊化肝细胞悬液各2 mL.另外6只作为健康对照组,另10只用于肝细胞分离.免疫组织化学法检测不同时间点大鼠肝细胞中Skp2蛋白的表达,全自动生化分析仪测定各组ALT、AST、TBil值,并观察各组生存率,多组样本间比较采用单因素方差分析.结果微囊化肝细胞腹腔移植可较裸肝细胞更好地降低ALF大鼠ALT、AST、TBil水平(P<0.05).造模36 h时,ALF模型组、裸肝细胞移植组和微囊化肝细胞移植组肝中Skp2-标记指数分别为(28.2±6.1)%、(41.4±10.5)%和(68.0±10.8)%(F=29.08,P<0.05),三组各15只大鼠168 h时各有4、6和11只存活.结论 动态观察Skp2表达可较好地判断ALF肝细胞的再生情况.
